The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Swedish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 23.20.196.179, User IP: 23.20.196.179, User IP Hex: 387237043
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).
Naturliga mördarceller (NK) celler är stora granulat cytotoxiska lymfocyter som tillhör det medfödda immunförsvaret och spelar stora roller i kampen mot cancer och infektioner, men är också inblandade i ett tidigt skede av graviditeten och transplantatavstötning. Dessa celler finns i perifert blod, från vilken de kan isoleras. Celler kan isoleras med hjälp av antingen positivt eller negativt urval. För positiva val som vi använder antikroppar riktade till en yta markör närvarande endast på celler av intresse medan negativt urval använder vi cocktails av antikroppar riktade till ytan markörer som finns på alla celler men cellerna av intresse. Den senare tekniken ger fördelen av att lämna celler av intresse fria från antikroppar, vilket minskar risken för oönskad cellens aktivering eller differentiering. I denna video-protokoll visar vi hur man skiljer NK-celler från humant blod med negativt urval, med hjälp av RosetteSep kit från StemCell teknik. Förfarandet innebär att få humant perifert blod (under en granskningsnämnder-godkända protokoll för att skydda de mänskliga subjekt) och blanda det med en cocktail av antikroppar som binder till markörer saknas på NK-celler, men finns på alla andra mononukleära celler som finns i perifera blod (t ex T-lymfocyter, monocyter ...). Antikropparna som finns i cocktail är konjugerade med antikroppar riktade till glycophorin A på erytrocyter. Alla oönskade celler och röda blodkroppar kommer därför att fastna i komplex. Blandningen av blod och antikroppar cocktail är utspätt, overlayed på en Histopaque lutning och centrifugeras. NK-celler (> 80% ren) kan hämtas i gränssnittet mellan Histopaque och den utspädda plasma. Liknande drinkar finns för anrikning av andra cellpopulationer, såsom mänskliga T-lymfocyter.
Ett detaljerat protokoll medföljer varje Rosett september isolering cocktail och finns tillgänglig online på StemCell teknik hemsida 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
De celler som isolerats med denna teknik kan ytterligare delas in i olika populationer med andra kit cellseparation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Rosette Sep cocktail for human NK cells | Reagent | Stem Cell Technologies | 15065 | |
| PBS, steile, 1x | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14040-058 | |
| Fetal calf serum (FCS, FBS) | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 16140-071 | |
| Histopaque-1077 | Reagent | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure. | ||||
1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx
