The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
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Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).
प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं (एन.के.) बड़े दानेदार साइटोटोक्सिक लिम्फोसाइटों कि सहज प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए हैं और कैंसर और संक्रमण के खिलाफ लड़ने में प्रमुख भूमिका निभाते हैं, लेकिन गर्भावस्था और प्रत्यारोपण अस्वीकृति के प्रारंभिक दौर में भी फंसा है. इन कोशिकाओं परिधीय रक्त, जिसमें से वे अलग किया जा सकता में मौजूद हैं. कक्ष या तो सकारात्मक या नकारात्मक चयन का उपयोग कर अलग किया जा सकता है. सकारात्मक चयन के लिए हम एक सतह मार्कर के लिए निर्देश एंटीबॉडी का उपयोग जबकि ब्याज की नकारात्मक चयन के लिए कोशिकाओं हम सतह मार्करों के लिए लक्षित एंटीबॉडी के कॉकटेल का उपयोग सभी कोशिकाओं लेकिन ब्याज की कोशिकाओं पर मौजूद पर ही मौजूद है. यह बाद तकनीक एंटीबॉडी के मुक्त ब्याज की कोशिकाओं को छोड़ने के लाभ प्रस्तुत करता है, जिससे अवांछित सेल सक्रियण या differenciation के जोखिम को कम करने. हम इस वीडियो प्रोटोकॉल में प्रदर्शित कैसे नकारात्मक चयन द्वारा मानव रक्त से एन.के. कोशिकाओं को अलग करने के लिए, StemCell प्रौद्योगिकियों से RosetteSep किट का उपयोग कर. प्रक्रिया मानव परिधीय रक्त (एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड अनुमोदित प्रोटोकॉल के लिए मानव विषयों की रक्षा के तहत) प्राप्त करने और यह एंटीबॉडी कि एन.के. कोशिकाओं पर अनुपस्थित मार्करों के लिए बाध्य करेंगे की एक कॉकटेल के साथ मिश्रण है, लेकिन अन्य सभी mononuclear परिधीय में मौजूद कोशिकाओं पर मौजूद शामिल खून (जैसे, टी lymphocytes, monocytes ...). कॉकटेल में उपस्थित एंटीबॉडी पर एरिथ्रोसाइट्स glycophorin निर्देशित एंटीबॉडी संयुग्मित हैं. सभी अवांछित कोशिकाओं और लाल रक्त कोशिकाओं इसलिए परिसरों में फंस जाएगा. तब रक्त और एंटीबॉडी के कॉकटेल के मिश्रण पतला है, एक Histopaque ढाल पर overlayed और centrifuged. एन.के. कोशिकाओं (> शुद्ध 80%) Histopaque और पतला प्लाज्मा के बीच इंटरफेस पर एकत्र किया जा सकता है है. इसी प्रकार की कॉकटेल मानव टी lymphocytes जैसे अन्य सेल आबादी के संवर्धन के लिए उपलब्ध हैं.
एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रत्येक रोसेट सितम्बर अलगाव कॉकटेल के साथ शामिल है और StemCell प्रौद्योगिकियों एक वेबसाइट पर ऑनलाइन उपलब्ध है .
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इस तकनीक का उपयोग अलग कक्षों और विभिन्न अन्य सेल जुदाई किट का उपयोग कर आबादी में अलग किया जा सकता है है.
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| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Rosette Sep cocktail for human NK cells | Reagent | Stem Cell Technologies | 15065 | |
| PBS, steile, 1x | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14040-058 | |
| Fetal calf serum (FCS, FBS) | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 16140-071 | |
| Histopaque-1077 | Reagent | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure. | ||||
1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx
