The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
School of Medical Sciences, University of New South Wales
This article is a part of JoVE Clinical and Translational Medicine. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
Current Access Through Your Registered Email Address
Austin, P. J., Wu, A., Moalem-Taylor, G. Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats. J. Vis. Exp. (61), e3393, doi:10.3791/3393 (2012).
ألم الأعصاب المزمن، والناجمة عن الأضرار التي لحقت الجهاز العصبي المركزي أو الطرفي، هو حالة سائدة والموهنة، التي تؤثر على 7-18٪ من عدد السكان 1،2. تتضمن الأعراض عفوية (وخز، وحرق، مثل الصدمة الكهربائية) ألم، dysaesthesia، مذل، allodynia (الألم الناتج من مثيرات غير مؤلمة عادة)، وفرط التألم (في زيادة الاستجابة للمحفزات مؤلمة). الأعراض الحسية وشارك في المهووسين المعوقين السلوكية، مثل الأرق والاكتئاب. لدراسة آلام الأعصاب المزمنة وقد وضعت عدة نماذج حيوانية محاكاة الطرفية إصابة العصب، واحدة من يستخدم بشكل واسع أكثر من غيره هو بينيت وشيه على (1988) العصب الوركي من جانب واحد مزمن اصابة انقباض (CCI) 3 (الشكل 1). هنا نقدم وسيلة لأداء غرفة تجارة وصناعة واختبار فرط الحساسية والألم.
يتم تنفيذ غرفة التجارة والصناعة تحت التخدير، مع العصب الوركي على جانب واحد يتعرض بجعل كماشق القربى، والقطع من خلال النسيج الضام بين السطحي الألوية والعضلات ذات الرأسين الفخذية. وترتبط أربعة حروف مركبة الأمعاء الكروم فضفاضة حول العصب الوركي على فترات 1 مم، لتسد فقط ولكن ليس فوق القوس العصبية اعتقال تدفق الدم. يتم إغلاق الجرح مع الخيوط الجراحية في العضلة والسلع الاساسية في الجلد. ويسمح للحيوان ثم للتعافي من جراحة لمدة 24 ساعة قبل اختبار فرط الحساسية والألم يبدأ.
لإجراء الاختبارات السلوكية، ويتم وضع الفئران في جهاز الفحص وغير مسموح لهم روض لإجراء الاختبار. منطقة اختبار هو السطح منتصف أخمصي من hindpaw (الشكل 2)، الذي يندرج ضمن توزيع العصب الوركي. ويتم تقييم الميكانيكية عتبة انسحاب من خلال تحفيز ميكانيكيا على حد سواء hindpaws الجرحى ويصب بأذى باستخدام ديناميكية أخمصي الالكترونية فون فراي aesthesiometer أو دليل فون فراي الشعر 4. عتبة انسحاب الميكانيكية هي التي تمارس أقصى قدر من الضغط(بالغرام) الذي يطلق عملية سحب مخلب. لقياس كمون انسحاب الحرارية، ووصف لأول مرة من قبل هارجريفز وآخرون (1988)، يتعرض hindpaw إلى شعاع من الحرارة الإشعاعية من خلال سطح الزجاج الشفاف باستخدام متر تسكين أخمصي 5،6. يتم تسجيل كمون الانسحاب الى التحفيز الحرارة والوقت لسحب مخلب في كلا hindpaws الجرحى ويصب بأذى. غرفة التجارة والصناعة بعد والميكانيكية عتبة انسحاب، فضلا عن انسحاب الحرارية الكمون في مخلب المصابين على حد سواء بدرجة كبيرة، مقارنة قياسات خط الأساس ومخلب يصب بأذى (الشكل 3). غرفة تجارة وصناعة نموذج للإصابة الأعصاب الطرفية جنبا إلى جنب مع اختبار فرط الحساسية والألم ويوفر نظام نموذجي للتحقيق في فعالية من العوامل العلاجية المحتملة لتعديل آلام الأعصاب المزمنة. في مختبرنا، ونحن الاستفادة من غرفة التجارة والصناعة إلى جانب الحساسية الحرارية والميكانيكية للhindpaws للتحقيق في دور العصبية والتفاعلات المناعية في التسببوعلاج آلام الأعصاب.
1. الوركي انقباض العصب المزمن
وينبغي استخدام تقنيات التطهير لإجراء العملية الجراحية. تطهير سطح العمل الجراحي مع الايثانول 70٪، وإعداد مسبق في الصكوك معقم (على سبيل المثال، مقص غرامة، ملقط، وضام)، الشاش، ومسحات من السلع الاساسية عن طريق جهاز الأوتوكليف. الخضوع لعمليات جراحية متعددة، وأدوات تنظيف resterilise مع الايثانول 70٪ أو معقمات جافة حبة بين الفئران. وينبغي ارتداء قناع جراحي، غطاء محرك السيارة الشعر والقفازات المعقمة.
لانقباض في العصب، وإعداد خياطة الوتر الكروم عن طريق خفض هذا إلى قطع صغيرة من سم طول حوالي 3 مغمورة في المياه المالحة عقيمة، لمنع جفاف. لإغلاق الجرح، واستخدام خيوط الحرير المتاحة تجاريا العقيمة.
2. قياسات للسلوكيات الألم
3. الميكانيكية سحب عتبة
دليل فون الشعر فراي هي سلسلة من زيادة شعيرات قطر التي هي معايرة للحث على قوة معينة عندما يطبق على الجلد. يمكن استخدامها كبديل للديناميكية أخمصي الالكترونية aesthesiometer فراي فون لقياس عتبة انسحاب مخلب، كما هو موضح سابقا 4. وهناك أيضا العديد من الشركات المصنعة بديل فراي الالكترونية aesthesiometers فون (مثل المجلس الدولي والولايات المتحدة وSomedic، السويد).
4. الحرارية سحب الإختفاء
وينبغي أن تعدل شدة حرارة الأشعة تحت الحمراء (IR) وثيقة اختبار أخمصي قبل بدء التجربة. في مختبرنا، علينا أن نعدل كثافة الأشعة تحت الحمراء لإعطاء انسحاب مخلب متوسط الكمون من حوالي 10 ثانية في الفئران ساذجا، ونحن تعيين كمون وقف انتاج المواد الانشطارية في 20 ثانية لتجنب سد الأنسجةالعمر في حالة عدم إزالة مخلب.
4. ممثل النتائج
ويرد مثال على عتبة انسحاب الميكانيكية والحرارية كمون انسحاب في الكفوف المماثل (المصاب) والمقابل (يصب بأذى) من قبل فئران ويستار (خط الأساس) و. 2-12 أيام بعد غرفة التجارة والصناعة في 3A الشكل، والشكل 3B ويمكن من هذه الأرقام أن نرى أن غرفة تجارة وصناعة يؤدي إلى خفض كبير في كل من عتبات انسحاب الميكانيكية والاختفاء انسحاب الحراري للhindpaw المماثل، تشير إلى وجود فرط الألم الميكانيكية والحرارية، وكلاهما من ملامح آلام الأعصاب المزمنة .

الشكل 1. التخطيطي توضح المواقع من الحروف المركبة في غرفة تجارة وصناعة نموذج. هذا نموذج حيواني من آلام الأعصاب ويشمل وضع الحروف المركبة من أربعة الكروم، الأمعاء فضفاضة على العصب الوركي، عند مستوى منتصف الفخذ. أنه يؤدي إلى إصابة فقط جزء من afferents الذهاب الى فرط الألم في القدم واللاحقة للhindpaw.

الشكل 2. رسم تخطيطي لمنطقة hindpaw تستخدم لاختبار الألم. ويستخدم السطح منتصف أخمصي الخلفي فقط لقطاع الطرق، كما هو مبين من قبل الدائرة المنقطة الحمراء، لاختبار الألم. ومعصب هذا المجال في الغالب من قبل فروع محطة من العصب الوركي. وينبغي تجنب الكعب وقطاع الطرق نظرا لحساسية الجلد التفاضلية.
3.JPG "/>
فرط الألم الرقم 3. بعد انقباض مزمن في العصب الوركي في الفئران. بعد غرفة التجارة والصناعة، وهناك hindpaw خفض كبير في عتبة انسحاب مخلب للمحفزات الميكانيكية (A) ومخلب كمون انسحاب للمؤثرات الحرارية (B) في المصاب (المماثل) مقارنة hindpaw (المقابل) يصب بأذى (P <0.01 التدابير المتكررة 2 في اتجاه وأنوفا). تظهر البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة، ن = 7 فئران ويستار.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
غرفة التجارة والصناعة هي المستخدمة على نطاق واسع إصابة الأعصاب الطرفية نموذج من آلام الأعصاب المزمنة. انها بسيطة نسبيا على القيام بها، وتنتج قوية ومستقرة فرط الألم ما لا يقل عن شهر واحد بعد تعافيه من الاصابة. بعد غرفة تجارة وصناعة والجرذان يحمل الموقف الشاذ من hindpaw المصاب (أصابع القدم التي عقدت معا وأخمصي، واستعرضوا مقلوبة مخلب)، فضلا عن تكرار اهتزاز، وحراسة ولعق من hindpaw الجرحى مما يدل على وجود ألم عفوي 9. بالإضافة إلى ضعف حسي، والمحققين عدة أظهرت أن غرفة تجارة وصناعة تثير الإعاقة السلوكية، مثل التفاعلات الاجتماعية تعطلت، واضطرابات النوم، والاكتئاب والقلق، مثل مثل السلوكيات 10-13، لكن هذا هو على النقيض من الفشل في العثور على مثل هذه المعوقات السلوكية 14،15 من قبل الآخرين. ولذلك فإن غرفة تجارة وصناعة تستخدم عادة لتحقيق كل من الفيزيولوجيا المرضية، والعوامل العلاجية المحتملة لعلاج آلام الأعصاب.
نحن descrالمكتب الدولي للتربية انقباض من جانب واحد للعصب الوركي اليسار، وينبغي مع ذلك تجدر الإشارة إلى أن العديد من المجربين كان أداء غرفة تجارة وصناعة في العصب الوركي حق، مع آلام مماثلة، والنتائج السلوكية. بعض المحققين قد يكون من الأسهل على إجراء عمليات جراحية على جانب محدد بسبب الطغيان، وتحول بعضها الآخر الجانبين ضمن تجارب لاستبعاد أي تحيز. من الجدير بالذكر أنه تم الإبلاغ عن عدة تنويعات على الإجراء الأصلي بما في ذلك استخدام سوى 2 في اربطة حول العصب 16،17 واستخدام مواد خياطة الجروح الأخرى من القناة الهضمية الكروم مثل القناة الهضمية واضحة وpolyglactin (vicryl) 18،19 في الفئران. وبالإضافة إلى ذلك، كما تم تعديل نموذج غرفة تجارة وصناعة لاستخدامها في الفئران، حيث ان هذا الإجراء هو متطابقة، باستثناء استخدام الحروف المركبة 2-3 مع المواد المختلفة بما في ذلك خياطة الوتر الكروم، والنايلون، والبرولين 15،20،21.
واحد الحد من هذا النموذج هو على درجة من الاختلاف بين الفئران التي تتعرض لغرفة التجارة والصناعة، وذلك بسبب variabiliالبحوث السابقة في ضيق من التشنج التي تنتجها ربط العقد مع الغرز. ويمكن التغلب على هذا جزئيا من خلال وجود الباحث من ذوي الخبرة المنفذ لعملية جراحية بطريقة متسقة. وعلاوة على ذلك، يمكن للنوع المواد المستخدمة في خياطة ligating العصب يسهم أيضا في التباين، ويعتقد أن المواد الكيميائية من الأمعاء الكروم توسط بعض الآثار السلوكية والكيميائية العصبية التي لوحظت في هذا النموذج 19،22. وينبغي إيلاء عناية خاصة لاختيار نوع الجنس الفئران (ذكور مقابل الإناث) 23، والعمر (الشباب مقابل العمر) 24،25، والنظام الغذائي 26 و 27 سلالة، والتي يمكن أن تؤثر تأثيرا كبيرا على تطور فرط الألم بعد غرفة التجارة والصناعة.
راسخة ألم اختبار فرط الحساسية، وذلك باستخدام الالكترونية فون فراي aesthesiometer أو دليل فون الشعر فراي عن عتبة انسحاب الميكانيكية وأخمصي تسكين (هارجريفز) متر للكمون انسحاب الحرارية، وإعادةالتدابير الكمية عرضة من فرط الألم في الحيوانات الصغيرة. استخدامها، بالاشتراك مع نماذج من آلام الأعصاب، على نطاق واسع، والسماح للمقارنات مباشرة من حساسية مخلب للمؤثرات الميكانيكية والحرارية عبر خيارات العلاج المختلفة، وبين سلالات مختلفة من الجرذان. تجدر الإشارة إلى أن تستخدم أيضا فحوصات السلوكية الأخرى، مثل دبوس اختبار الوخز وallodynia الباردة، وغرفة التجارة والصناعة لاختبار الألم الناجم عن فرط الحساسية 8.
في حين أن استخدام انسحاب انعكاسية من المحفزات الميكانيكية أو الحرارية هو المقياس الرئيسي لألم الأعصاب في هذا النموذج، والآخرين، إلا أنه في الآونة الأخيرة لانتقادات بسبب علاقته السيئة مع أعراض الإنسان وإشراك تحيز المجرب كبير 28. ولذلك، فإن استخدام نماذج إضافية مثل التدابير استثابي من الألم 29 و السلوكيات التي تنبعث عفويا 30 مفيدا.
ومع ذلك، قصرpite هذه القيود، وغرفة تجارة وصناعة نموذج الاختبارات انسحاب مخلب لفرط الألم القياس تقوم بدور محوري لفهم آليات ألم الأعصاب، وتحديد الأهداف مسكن جديد. في مختبرنا، نقوم بشكل روتيني غرفة تجارة وصناعة الميكانيكية وقياس عتبات سحب مخلب والحرارية الاختفاء انسحاب مخلب، من أجل فهم كيفية العصبية المناعي تفاعلات تسهم في آلام الأعصاب 31، وتقييم إمكانات النظام تحوير المناعة للحد من فرط الألم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
تمت الموافقة على التجارب على الحيوانات من قبل رعاية الحيوان واللجنة الأخلاق من جامعة نيو ساوث ويلز، أستراليا، واتباع المبادئ التوجيهية الصادرة عن الرابطة الدولية لدراسة الألم.
فإن الكتاب يود أن يقر الوصف الأصلي للنموذج غرفة التجارة والصناعة من قبل بينيت وشيه (1988).
وأيد هذا العمل جزئيا من المنح المقدمة من الوطنية للصحة ومجلس البحوث الطبية في استراليا (رقم # 568637) ومكتب نيو ساوث ويلز للعلوم والبحوث الطبية إلى بتوقيت جرينتش.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chromic gut | Ethicon Inc. | G-211 | 4-0 thickness |
| Isoflurane | Delvet Pty. Ltd., Seven Hills, NSW | n/a | |
| Mersilk | Ethicon Inc. | W-580 | 5-0 thickness |
| Autoclip | BD Biosciences | 427631 | 9 mm stainless steel |
| Riodine | Orion | R1000802F | 1% w/v iodine |
| Thermal plantar analgesia instrument | Ugo Basile | 37370 | |
| Dynamic plantar aesthesiometer | Ugo Basile | 37400 |
Sir/Madam,
I am Deepika Saini from chandigarh, and i m pursuing my Masters in Pharmacy (Pharmacology) from chandigarh college of pharmacy,landran,mohali,punjab (India). As my 2nd year research project i got a topic COMBINED EFFECTS OF NSAIDs AND PKC INHIBITORS IN TREATMENT OF SCIATIC NERVE LIGATION INDUCED NEUROPATHIC PAIN , so i need the procedure for sciatic nerve ligation. Please help me regarding this , i will be really very thankful to you.
Yours Sincerely,
Deepika Saini
1
ReplyPosted by: Deepika S.June 22, 2012, 5:34 AM