혈액 샘플링, 마약 관리 및 의식 검사 중 혈압과 심장 박동을 측정 대퇴 동맥혈과 정맥 Catheterization

Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral Arterial and Venous Catheterization for Blood Sampling, Drug Administration and Conscious Blood Pressure and Heart Rate Measurements. J. Vis. Exp. (59), e3496, doi:10.3791/3496 (2012).

연구의 여러 분야에 필요한 실험실 연구에서 순환 시스템에 액세스할 수 있습니다. 만성 이식 카테터를 사용하는 쥐의 약리 연구 연구자들이 효과적으로하도록 허용하고 편안하게, 물질을 관리 반복 혈액 샘플링을 수행하고 혈압과 심장 박동을 의식 직접 측정에 도움이됩니다. 일단 카테 테르가 이식됩니다 장기 샘플링이 가능합니다. 명백하고 카테터 인생은 잠금 사용 솔루션, 홍조 처방 및 카테 테르 재료를 포함한 여러 요인에 따라 달라집니다. 이 비디오는 대퇴 동맥과 암흑의 정맥 catheterization의 방법론을 설명합니다. 또한 비디오 대퇴 정맥과 혈액 샘플링, 약물 관리와 의식에서 자유롭게 이동하는 쥐 혈압과 심장 박동수의 측정에 동맥 카테터의 사용을위한 동맥 카테터의 사용을 설명합니다. 스위블 시스템에 부착된 밧줄과 활용은 동물이 호 수 있도록합니다동물에게 최소한의 혼란과 연구자에 의해 사용하고 샘플을 촬영했습니다. 카테 테르의 명백을 유지하려면, 카테 테르주의 일상 유지 관리가 잠재적인 오염을 최소화하기 위해 잠금 솔루션 (100 U / ML heparinized 식염수), 기계 지상 뭉툭한 팁 주사기 바늘과 주사기 필터의 사용을 사용해야합니다. 주의 무균 수술 테크닉, 적절한 카테 테르 자료 및주의 카테 테르 유지 보수 기술로, 그것은 오랜 기간 (몇 주)에 대한 특허 카테터하고 건강한 동물을 유지할 수 있습니다.

1. 이전에 수술을 시작

참고 : 이전 어떤 동물 절차는 귀하의 기관 / 조직을 통해 적절한 권한을 획득했는지 확인 시작합니다. 모든 생존 수술과 마찬가지로 수술이 멸균 조건에서 수행하고 적절한 진통제와 항생제가 필요한 성공적인 결과를 위해 사용되고 있는지 확인하십시오.

1. 이전 catheterization 절차를 시작하는 것은 그들이 특허 수 있도록하기 위해 무균 식염수에 그들을 플러시하여 카테터를 평가합니다.
2. 쥐를 마취.
3. 수술에 대한 쥐를 준비합니다.
   1. 목 뒤에 (양어깨 사이로)와 내부 다리 영역을 포함하는 수술 지역에서 모피를​​ 쉐이브.
   2. 각각 Betadine 및 70 % 에탄올 스크럽을 사용하여 중앙에 시작 원형 스위프 바깥쪽하는 면도 외과 영역을 씻어. 반복70 % 에탄올로 최종 클렌징과 마무리 각 지역이 3 회.
   3. 외과 영역 이상의 살균 표면 및 장소 무균 드레이프의 동물을 놓습니다. (보도 자료 - N - 인감의 사용은 조사가 절차를 통해 동물을 모니터 있도록 이상적인 수술 draping입니다.)
4. 수술에 대한 모든 수술 도구를 보장하는 것은 소독하고 있습니다.

2. 카테 테르 배치에 대한 외과 영역의 준비

1. 쥐이 (배가) 경향이 누워으로 약 ½ 인치 (12 ㎜) 가위로 양어깨이나 메스, 다음 해부하다 무딘 피하 "주머니"의 수준에서 목 뒤쪽에 수평 절개를 다시 약 분기 크기. 이것은 카테터가 동맥부터 가져온 때문에 제거되지 않습니다 즉 때문에, 동물의 성장 및 / 또는 운동에 대한 보상됩니다 튜브의 작은 금액을 배치하는 공간으로 사용될 것입니다 그것은 거기 있었어요D 인치 (또는이 단계는 이전에 카테 테르를 터널링 즉시 수행할 수 있습니다.)
2. 그 뒤로 (부정사 위치)에 쥐를 놓고 뒷다리 다리의 자연스러운 각도를 따라 사타구니 지역 [대략 ½ 인치 (12 ㎜) 절개에 절개를합니다.
3. (일반적으로 45도 각도 야기한 밀고 가위 및 / 또는 면봉을 누른 이것은 쉽게 로컬 리 제이션을 보장 (야기한 팁 가위, hemostats, 면봉 등을 사용할 수 있습니다) 결합 조직 (그림 1)을 분리하는 해부하다 퉁명스러운 의 대퇴 동맥과 정맥까지 관심의 영역)이 노출되어 있습니다.
   1. 정맥 컬러 어두운 빨간색이고 동맥은 명확하고 정맥보다 밝은 있습니다. 동맥 따라 실행 신경 톤으로 약간 흰 있습니다.
4. cathete의 작은 섹션의 배치를위한 다리 안쪽을 따라 피부 아래에 작은 열 영역 (즉, 주머니, 분기 약 크기)을 만들기 위해 다리 지역에서 해부하다 퉁명스러운R은 (다시 계정 동물의 움직임에 타고 만성 배치하면 동물의 성장).
5. 당신이 완전히 동맥과 정맥을 볼 수 있도록 절개 지역에 견인기를 놓습니다.
6. 좋은 팁을 사용하면 부드럽게 떨어져 동맥과 정맥의 대퇴 동맥을 따라있는 신경을 (컬러에 약간 흰) 별도 포셉. (그림 2) 신경을 잘라내거나 손상되지 않도록주의한다.
7. 동맥 / 정맥의 약 ¼ 인치 (5-7 ㎜) 길이 부분을 노출하는 하나의 단위로 동맥과 정맥을 분리합니다.
8. 동맥에서 정맥 분리의 과정을 반복합니다. 혈관에 수술용 악기 (예 : 미세 팁 포셉) 직각을 유지하고 병렬로 혈관을 분리. 이것은 찢어 따끔따끔 찌름이나 혈관을 손상을 피하고에 도움이됩니다. 아래 천천히 포셉를 열고 이것을 반복에서 동맥과 정맥 사이에 부드럽게 좋은 팁 포셉를 배치함으로써, 당신은 천천히 혈관을 분리합니다. 참고 : 일부를 찢어하거나 관찰 않는 경우출혈이 멈출 때까지 멸균 면봉 및 / 또는 2 X 2 거즈와 지역에 장소 압력을 사용하여 출혈하면 다음 수술 진행합니다.

3. 카테 테르를 터널링

1. 장소 멸균 생리는 절개를 통해 2 곱하기 2는 거즈를 흠뻑 젖고 그 위에 동물을 켜십시오.
2. 이전에 만든 subcutaneously 엉덩이의 수준으로 다시 내려 포셉 안내 [hemostats의 팁이 척추 향해 (안 나왔 지적 있도록 있던 뒷면에 절개에 로체스터 Pean 포셉을 (긴 직선 포셉) 장소 ) 척수 손상되지 않도록]. 약에서는 고관절 지역은 다리 지역에서 만들어진 절개쪽으로 hemostat 팁을 설정하고 준비 다리 절개 밖 hemostats의 끝부분을 밀어.
3. 부드럽게 포셉와 카테터 (없는 동맥 / 정맥에 삽입되는 끝)의 마지막을 파악하고 부드럽게 만들어진 구멍을 통해 카테터를 당겨궁극적 목 절개 아웃.
4. 해당 카테터의 끝에 20 U / ML 헤파린 / 식염수에 가득 적절한 무딘 - 팁 바늘 주사기를 놓고 heparinized / 식염수에 카테터를합니다 (기포가없는 것을 확인) 입력합니다. 다시 한번 카테터 특허는 것을 확인하고 손상이 카테터에 와서 없다. 더 공기가 카테 테르 라인에 들어가서 다시 한번 공전에 밀고를 바꿀 수없는 보장하기 위해 카테 테르 라인의 끝에 붙어있는 주사기를 남겨주세요.

4. 대퇴 정맥과 동맥에 카테터를 삽입하면 (그림 3)

1. 대퇴 정맥에 따라 멸균 4.0 실크 / 스레드의 접힌 부분을 놓고 다음 접힌 끝에 실크를 잘라. 지금 정맥에 따라 실크 두 가지가있을 것입니다. 또는 양자 택일로, 개별적으로 정맥에 따라 4.0 실크의 2 조각을 놓으십시오.
2. 당신은 정맥 아래에 배치 실크, 하나 다리쪽으로 조각 (말초 끝)과 몸에 대한 다른 구분합니다. 티다음 작은 hemostats를 사용하여 인체에 가장 가까운쪽으로 느슨하게 묶인 즉, 비단을 파악하고 가르 쳤지만, 당겨 매듭을 조여하지 않습니다. 다리 (말초 끝)쪽으로 최대한 비단의 다른 조각을 당겨와 트리플 매듭에 이것을 묶어, 작은 hemostats와 비단을 파악하고 가르 쳤 당기십시오. 이 방법은 정맥이 쉽게 카테 테르 (4 단계)을 삽입에 필요한 절개를하기 위해 만들어 피를 채울 수 있습니다.
3. 정맥에 lidocaine 1-2 방울을 넣으십시오.
4. 바나, 남은 마이크로 해부 가위를 사용하여 약 정맥에 작은 절개를 ¼ 통해 45도 각도.
5. 절개와 포셉 또 한 쌍의을 사용으로 미세하게 밀고 포셉 (45 포셉)를 장소, 조심스럽게 정맥 ​​카테 테르에 피드. 부드럽게 이것은 연구자가 부드럽게 포셉 아래와 정맥에 정맥 카테 테르를 게재할 수 있으므로, 정맥에 배치됩니다 포셉를 엽니다.
6. 카테 테르가 완전히 삽입되면 (approX. 6-7의 CM은) (카테 테르시 마크가 카테 테르가 완전히 넣었을 때 식별에있는 외과의 도움을 카테 테르에 위치) (이것은 복부 대정 맥에 정맥 카테 테르를 삽입), 정맥 주변의 앞쪽에 묶인를 강화 트리플 매듭을 묶는 및 카테 테르 (이것은 정맥을 occluding하지 않도록). 다시 카테 테르 (트리플 매듭)를 안전하고 배치를 보장하기 위해 다리 근처 실크 봉합사 (후부 묶은)를 사용합니다. 봉합사의 매듭이 너무 꽉 및 카테 테르는 기능입니다되지 않도록하는 데 도움이 카테 테르에 보이는 약간의 혈액이있을 때까지 천천히 주사기를 다시 그립니다. 혈액은 카테 테르에 더 이상 볼 때까지 확인 후, 플런저를 놓으면 되죠.
   참고 : 필요한 경우 대퇴 정맥에 카테터를 삽입이 가능합니다.
7. 다음과 같은 예외가있는 대퇴 동맥 카테터를 삽입 단계 9-13을 반복합니다 :
   1. 트리플 매듭과 함께 다리 (후부)에 가까운 실크 넥타이와 타우 당겨카테 테르의 배치에 대한 절개를 제작하기 전에 몸 (앞쪽에) 근처에 느슨하게 묶인를 묶는 전에 ght. 이것은 동맥은 혈액이 쉽게 잘라 만들기로 채울 수 있습니다. 근위 봉합사가 동맥을 절단하기 전에 동맥을 윗니와 아랫니가 맞물리다로 가르쳐 뽑아 있는지 확인하십시오. 절단이 이루어집니다 때 혈액 손실을 막을 수있을 겁니다.
   2. 동맥 카테 테르를 삽입 대퇴 동맥에서 약 5cm (이것은 복부 대동맥에서 카테 테르를 삽입).
   3. 봉합사와 카테 테르를 확보하면, 봉합사를 너무 꽉 및 카테 테르를 occluding 있지 않은지 확인하십시오.

5. 랩 - 업 수술

1. 다리 안쪽에있는 카테터와 장소 (루프 무딘 이전 해부를했던 지역에 적합해야합니다)에서 분기 크기 루프 한푼도합니다. 모두 카테터를 삽입 후, 근육 계층에 5.0 봉합 수술 1-2 바늘과 함께 그들을 확보.
2. 비 연속 sutur 4.0 Ethilon로 절개를 닫습니다알면서도.
3. 그 위에 쥐 켜고 뒤에 해부 주머니에 분기와 장소의 크기에 대한 카테터의 다른 루프를합니다. 봉합사로 절개를 닫습니다.
4. vetbond의 드롭을 사용하여, 안으로 카테터를 확보.
5. 패딩 hemostats로 다시 절개 근처에 카테터를 고정하고 종료에서 주사기를 제거합니다.
6. 밧줄 형태의 재킷과 함께 쥐 맞추기, 카테터를 (헤파린 잠금을 유지하기 위해) 모자와 패딩 hemostats를 제거합니다.

- 장기적인 유지 보수를 20 U / ML 헤파린 / 식염수에 카테터 생리 식염수를 교체하십시오.

6. 카테터의 유지 보수 (무균 장갑이 절차를 수행하는 동안 착용한다)

1. 패딩 포셉와 카테 테르를 클램프.
2. 카테 테르 플러그를 제거합니다.
3. 카테 테르에 잠금 솔루션 무딘 밀고 주사기를 삽입합니다.
4. 포셉을 Unclamp.
5. 잠금 솔루션 카테 테르를 작성 (볼륨 미리 dete입니다rmined - 일반적으로 0.3 ML).
6. 카테 테르 팁에 혈액의 역류를 방지하고 주사기를 제거하는 꼴이지 동안 카테 테르를 클램프.
7. 카테 테르 플러그를 교체합니다.
8. 포셉을 Unclamp 부드럽게 혈액은 카테터의 끝에없는 보장하기 위해 약간의 플러그를 밀어.

7. 혈액 샘플링 (무균 장갑이 절차를 수행하는 동안 착용한다)

패딩 포셉와 카테 테르를 클램프.

1. 카테 테르 플러그를 제거합니다.
2. 천천히 무딘 밀고 주사기 및 폐기를 사​​용하여 잠금 솔루션을 철회.
3. 카테 테르로 샘플링 주사기를 첨부 천천히 샘플을 철회.
4. 패딩 포셉와 카테 테르를 클램프 및 잠금 솔루션 주사기를 장소에 카테 테르 및 잠금 솔루션 카테 테르를 다시 입력합니다.
5. 솔루션 카테 테르를 다시 작성하는 동안 카테 테르를 클램프.
6. 카테 테르 플러그를 다시 삽입합니다.
7. 패딩이 집게를 제거하고 부드럽게 t 밀어 그는 약간 더에 꽂습니다.

8. 약물 주입

1. 패딩 포셉와 카테 테르를 클램프.
2. 카테 테르 플러그를 제거합니다.
3. 천천히 무딘 밀고 주사기 및 폐기를 사​​용하여 잠금 솔루션을 철회.
4. 카테 테르에 약을 채운 주사기를 첨부하여 동물에 물질을 달이다.
   • 여러 주사가 필요한 경우에는 하나는 따라서 동물에 더 적은 액체 주입을 필요로하는, 3 방법 꼭지뿐만 아니라 중간을 사용할 수 있습니다.
   • 어떤 사람은 지속적인 혼합을위한 살균 필터 일정한 주입 주사기 펌프를 연결할 수 있습니다.
5. 패딩 포셉와 클램프 및 잠금 솔루션 주사기를 장소에 카테 테르 및 잠금 솔루션 카테 테르를 다시 입력합니다.
6. 솔루션 카테 테르를 다시 작성하는 동안 카테 테르를 클램프.
7. 카테 테르 플러그를 다시 삽입합니다.
8. 패딩이 집게를 제거하고 부드럽게 약간 더의 플러그를 밀어.

1. 패딩 포셉과 동맥 카테 테르를 고정하고 카테 테르 플러그를 제거합니다.
2. 압력 변환기에 동맥 라인을 연결합니다.
3. 혈압 수집 소프트웨어를 사용에 대한 제조 지침을 따르십시오.
4. 혈압 모니터링 기간의 결론에 패딩이 집게를 사용하면 카테 테르를 클램프와 변환기에서 분리하십시오.
5. 잠금 솔루션 카테 테르를 플러시하고 위​​에 설명된대로 카테 테르 플러그를 교체하십시오.

10. 대표 결과

대표 혈압 측정은 의식 자유롭게 움직이는 동물에서 찍은 및 그림 4에 표시됩니다. 동시에 대퇴부 동맥 라인에서 혈압을 측정하면서 Phenylephrine (3 ug / kg, IV), 알파 1 아드레날린 수용체 작용제는, 혈압을 높일 수있는 대퇴 정맥 라인으로 투여되었다. Phentolamine (4 MG / kg, IV),nonselective 알파 아드레날린 길항제는 다음 혈압을 낮추 투여되었다.

그림 1. 조직의 무딘 절개. 그 뒷면에있는 쥐를 사용하면 뒷다리 다리의 각도에 약 ½ 인치 (12 ㎜) 절개를 만들었하고 대퇴 동맥과 정맥을 노출하는 결합 조직을 절개하다 무딘 것입니다 무딘 가위 또는 hemostats를 사용해야합니다.

그림 2. 대퇴 동맥과 결합 조직의 정맥의 분리.

그림 3. 카테 테르의 배치. 바나, 남은를 사용하여 마이크로 해부 가위는 각도는 45도 (위)에있는 선박을 통해 방법의 ¼ 정도의 작은 절개를 배치하고 일에 미세 밀고 포셉 배치전자 절개와 포셉 다른 쌍을 사용하여 선박 (중간)에 카테 테르를 피드. 마지막으로, 카테 테르의 배치 완료시 장소 (아래)에있는 카테 테르 치료.

그림 4. 의식적 자유롭게 움직이는 동물에서 가져온 대표적인 혈압 측정합니다.

동맥과 정맥 catheterization은 역사적으로 모두 심하게 및 만성 혈압, 샘플 혈액을 모니터링하는 데 사용하고 실험 쥐 동물 모델 ^1-4에서 물질을 제공하고 있습니다. 이러한 수술 instrumentations의 가장 큰 장점은 혈액 샘플링, 마약 관리 및 혈압 모니터링, 모니터링을 포함한 절차, 동물 ¹ 최소한의 장애 및 / 또는 스트레스 실시되도록한다는 것입니다. 많은 수사관들이 프로토콜을 작성하고 자신의 실험실은 수술 ^5-8을 수행하는 구체적인 방법론을 가지고있다. 비디오와 일러스트는 우리 연구실은 대퇴 동맥과 정맥 catheterization 절차에 관해서와 성공적인 것으로 판명는지 보여줍니다.

쥐은 일반적으로 취급 자신의 작은 크기와 편의로 인해 과학 연구의 다수를위한 실험실에 사용됩니다. 만성 여러 위치가 있습니다카테 테르는 몇 가지 이름으로 경정맥 정맥, 복부 대동맥, 경동맥과 대퇴 동맥을 포함한 동물 이내에 설치할 수 있습니다. 쥐의 대퇴 카테 테르의 명백 증가 길이 만성 catheterization 결과에 대한 위치는 다른 카테 테르 위치 ^9에 비해 사전 수술 동물의 체중의 빠른 복구를했습니다.

많은 조사가 급성뿐만 아니라 만성 혈액 샘플링 ^1-5,11-13에 대한 카테터를 내재하는 데 사용했습니다. 많은 연구에서 여러 피는 동물의 필요와 외부 cannulation / catheterization 인해 자사의 비 외상성 자연에 유리 하나 방법론집니다 그립, 동물이 의식이있는 동안 또한 그것 때문에 anesthetics의 영향에 의해 제한받지 않는다, 할 수 있습니다 또한 동물은 자유롭게 ^{1,10 이동하실} 수 있습니다. 혈액 샘플을 얻기 위해 그리고 설치류 동물의 스트레스 호르몬을 측정하는 가장 좋은 방법은 긴 ^6,13을 논의했습니다. pharmacokinetic studi와 관련만성 이식 카테 테르 시스템을 사용할 때 말이지, 연구 동물의 catheterization을 최소화 자제심과 반복 혈액 샘플링을 허용합니다. 또한, 연구 아드레날린, noradrenaline과 자유롭게 처리 (30 초)과 또는 ¹⁴ (5 분) 구속되었을 동물에 비해 쥐 (경정맥 카테터)를 이동 플라즈마에 도파민의 감소 기저 농도를 보이고있다. 스트레스의 증가를 분별하기 위해하는 추가 방법은 플라즈마 corticosterone 수준을 측정하는 것입니다. 이전에 그것은 심지어는 플라즈마 corticosterone 수준이 만성 cannulated 쥐 ¹⁵ 상승다고 수술 복구 시간의 3~4일를 따라 것을 제안했다. 그러나, 방법론 최근 개선 uncannulated 쥐 ¹⁶ 비교 경정맥 혈관 cannulated 쥐의 기준 플라즈마 corticosterone 수준에 차이가 없다는 것으로 나타났습니다. 또한, corticosterone 분석을위한 HPLC 방법론도 공개되는 corticoster한 수준은 구속 스트레스에 의해 고가되지만, 안정적인 경정맥 catheterization ¹⁶ 이후.

만성 catheterization의 추가 사용은 설치류에서 혈압과 심장 박동수의 측정이다. 혈압과 쥐의 심장 박동을 측정하기 위해 활용 여러 방법이있다, 이들은 비침습 꼬리 커프스 방법론, radiotelemetry 절차 및 직접 내재하는 카테터를 포함합니다. 각 방법은 다른 출판물에 자세히 설명되어 있습니다 자사의 장점과 단점을 가지고 있습니다. 내재 유체 - 채워진 카테터는 쥐 내에서 여러 동맥에 이식 수 있습니다. 대퇴 동맥이 측정에 사용될 수있는 하나 동맥지만. 혈압 / 심장 속도 측정은 카테 테르의 말초 끝을 보정 압력 변환기에 연결됩니다. 카테 테르는 동물의 움직임을 자유롭게 허용하는 스위블에 연결된 보호 봄 안에 보관되어하거나, 버튼을 surgi에 첨부할 수 있습니다캘리 동물에 이식. 내재하는 카테터는 동물 ^17,18에 장기적인 스트레스를 최소화의 장점이 있습니다. 자료 저렴한 아르 또한, 보정 압력 대책과 지속적인 장기 대책을위한 쉬운 ¹⁹ 여러 주 동안 상대적으로 낮은 스트레스 조건에서 얻을 수 있습니다. 우리는 단점을 포함하여,이 기술에있다는 것을 언급하지 않았다면 우리가 놓칠 수는 있겠지만,이 수술 침입 기법이며, 카테 테르의 유지 관리가 명백, 카테 테르의 주입에 의한 동맥 손상을 유지하기 위해 필요합니다 몇 가지 이름을 감염의 가능성.

만성 - 이식 동맥 카테터의 혈압 직접 레코딩 만성 대책에 대한 자세한 기술적으로 도전하지만,보다 정확하고 동물을 방해하지 않고 지속적으로 할 수 있습니다. 테일 즉석 측정의 정확도가 다소 떨어질되지만 그들은 수술을 필요로하지 않고도 반복 수 있습니다에드. 테일 - 커프스 방법은 펄스 ²⁰ 검출을 용이하게하기 위해 꼬리 혈관을 팽창하는 동물의 난방뿐만 아니라 처리가 필요하지. 취급 및 추가 열 스트레스 따라서 매우 정확한 측정을 제공하지, 혈압 측정에 영향을 줄 수 있습니다. 또한, 이외 직접 꼬리 즉석 방법은 쉽게 동시 혈액 샘플링이나 약물 관리를 허용하지 않습니다.

직접 측정을 얻을 수있는 추가적인 방법은 telemetric 방법론을 사용하고 있습니다. 데이터가 지속적으로 구속하지 않고 또는 anesthetics ¹⁸ 의식 자유롭게 이동 동물에 오랜 기간 동안 혈압 (및 기타 조치)의 고품질 녹음이 가능합니다. 그러나, 원격 장치 이상 동안 매우 비용이 많이 드는 있습니다. 원격 비교할 때, catheterization 혜택은 다음과 같습니다 감소 "설정"과 운영 비용, 쉽게 마약을 관리하고 쉽게 의식 자유롭게 움직이는 동물의 혈액 샘플을 취할 수있는 능력을. administrat따라서 최소한 동물에 스트레스를 최소화하고보다 정확한 측정을 위해 수 있도록 동물을 방해하면서 마약과 물질, 그리고 연구 동물에서 얻기 혈액 샘플 이온을 할 수 있습니다.

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저자는 그림의 기여에 대한 박사 앤드류 킹 박사와 카트리 나 킹을 인정하고 싶습니다. NIH 부여 : R00HL087927.

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