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अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

, , ,

Department of Developmental and Cell Biology, School of Biosciences, University of California, Irvine

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Cite this Article: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

Sigua, R., Tripathy, S., Anand, P., Gross, S. P. Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (62), e3501, doi:10.3791/3501 (2012).

Protocol: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

मक्खियों की खींच और खरीदा जा सकता है और प्रयोगशाला में परिलक्षित. ड्रोसोफिला संस्कृति प्राप्त शीशियों की राशि पर निर्भर करता है, एक अक्सर संस्कृति शीशियों के 'फ्लिप', एक बार शीशियों अधिकतम क्षमता तक पहुँच गया है की जरूरत है. इस प्रवर्धन जारी जब तक लगभग 50 ड्रोसोफिला संस्कृति शीशियों में भर रहे हैं. एक तो बनाता है 'कप उड़ान भरने के 100 मिलीलीटर तिरंगा beakers के साथ (कप बनाने फ्लाई अगले भाग में चर्चा की है). 24 घंटे के बाद, तल पर चिपका मक्खी भोजन के साथ इन कप से बीज नई ड्रोसोफिला संस्कृति शीशियों भ्रूण का उपयोग करें. कमरे के तापमान पर, भ्रूण ड्रोसोफिला के लिए विकास रातोंरात भ्रूण से पूर्ण विकसित मक्खियों को समय के बारे में 8.5 दिनों कर रहे हैं. वरीयता प्राप्त भ्रूण पहली लार्वा चरण में 12-15 घंटे के बाद पक्षियों के बच्चे. लार्वा के बारे में 4 दिन के दूसरे और तीसरे लार्वा चरण में अंडे सेने के बाद 24 और 48 घंटे में दो बार, molting के लिए बढ़ता है. लार्वा तो pupariums में encapsulate और एक 4 दिन की कायापलट करने के लिए प्रस्तुत जब तक टी से उभरतेवारिस पोटा संबंधी मामलों 1. ड्रोसोफिला संस्कृति शीशियों में लगभग दो से तीन दिनों के लिए और अधिक विकास के लिए प्रत्येक में मक्खियों की राशि में वृद्धि की अनुमति दें. जब 400 शीशियों भर रहे हैं, वहाँ मक्खियों के एक पर्याप्त राशि पचास अंडे बिछाने कप (कप 1000 प्रति के बारे में महिला मक्खियों) के लिए होगा. मक्खियों अपने नए वातावरण को समायोजित करने के लिए समय की जरूरत है. यह आमतौर पर उनके लिए दो दिन के बारे में ले जाता है के बाद कप के लिए हस्तांतरित किया जा रहा है, संग्रह के लिए तैयार हो जाओ. अगर प्लेट दैनिक मक्खी कप जगह को साफ रखने, जो मक्खियों लंबे समय तक जीने के लिए अनुमति देगा. (ड्रोसोफिला देखभाल और प्रवर्धन के आगे समझने के लिए, कृपया डीबी रॉबर्ट्स 'ड्रोसोफिला देखें: एक व्यावहारिक दृष्टिकोण 2).

भ्रूण ड्रोसोफिला की बड़ी मात्रा में प्राप्त करने के लिए एक अच्छा स्रोत जनसंख्या 3 पिंजरों, जो व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं. विधानसभा और जनसंख्या पिंजरों के रखरखाव पुस्तक ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में अध्याय 5 और 7 पर देखा जा सकता है: पीसेल और आण्विक जीवविज्ञान 4 में ractical का उपयोग करता है. हालांकि, जनसंख्या पिंजरों महंगे हैं और बनाए रखने के लिए मुश्किल हैं. चूंकि जनसंख्या पिंजरों मक्खियों का एक प्रचुर मात्रा में पकड़ कर सकते हैं, कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग हस्तांतरण और खिला मक्खियों के लिए आवश्यक है. जैसा कि पहले कहा, कार्बन डाइऑक्साइड मक्खियों के स्वास्थ्य कम हो जाती है, उन्हें पैदा करने के लिए के रूप में अच्छी तरह से नहीं रखना. एक छोटे पैमाने पर, 100 मिलीलीटर तिरंगा beakers इस्तेमाल किया जा सकता है. पचास 100 मिलीलीटर beakers के साथ, dechorionated भ्रूण की 9 ग्राम प्राप्त किया जा सकता है. आदेश में मृत मक्खियों, अप्रयुक्त खमीर पेस्ट और अन्य दोष हम अलग जाल आकार के साथ एक डबल स्तरित चलनी पकड़ने बनाया है हटा दें. मृत मक्खियों की तरह एक चलनी जाल अवांछित सामग्री, जबकि भ्रूण के माध्यम से पारित करने के लिए (350 माइक्रोन रोमकूप आकार के) की अनुमति. दूसरा भाग (120 माइक्रोन ताकना आकार) जाल है, जो भ्रूण ड्रोसोफिला और अन्य अशुद्धियों को पकड़ने के जाल के माध्यम से पारित हो जाएगा मतलब है शामिल हैं.

1. फ्लाई कप तैयारी और भ्रूण संग्रह

  1. पलटेंएक खाली प्लास्टिक की शीशी में परिलक्षित कई शीशियों से मक्खियों, जब तक मक्खियों की राशि है शीशी ऊंचाई की एक इंच तक पहुँच चुके हैं. फिर, एक 100 मिलीलीटर अंडा संग्रह कप (नायलॉन जाल खिड़कियों के साथ Tricon बीकर) में उन मक्खियों को हस्तांतरण. एक कठिन सतह पर कप दोहन करने के लिए मक्खियों के भागने को रोकने के जब मक्खियों स्थानांतरित रखें. अगर प्लेट युक्त खमीर पेस्ट के साथ कवर कप और स्थिरीकरण समय के 24-48 घंटे की अनुमति.
  2. पचास मक्खी कप से रातोंरात अगर प्लेट ले लीजिए और प्लेटों की सामग्री को धोकर चलनी पकड़ने का उपयोग कर एक साफ पेंट ब्रश और पानी चल रहा है. मांस चलनी में पानी के बहुत से भ्रूण तक सब खमीर पेस्ट दूर धोया जाता है.
  3. उन्हें 3 मिनट के लिए 50% ब्लीच में डुबो कर साफ भ्रूण Dechorionate.
  4. आसुत जल के साथ बड़े पैमाने पर ढीला भ्रूण ब्लीच गंध जब तक कुल्ला. तो यह एसी गुना तौलिया कई बार पर रखकर भ्रूण के साथ जाल सूखी. एक साफ शीशी भ्रूण स्थानांतरण और वजन रिकॉर्ड. </ Li>

2. भ्रूण Homogenization और स्पष्टीकरण

  1. Dounce homogenizer में 1.5 बर्फ ठंड निष्कर्षण बफर के एक्स मात्रा साथ dechorionated भ्रूण रखें.
  2. ढीला पैर के साथ 5 स्ट्रोक करो. साफ अपकेंद्रित्र ट्यूबों में homogenate अशेष भाजक. 40 मिनट के लिए 15,000 जी पर अपकेंद्रित्र. 4 में डिग्री सेल्सियस
  3. ऊपरी सफेद लिपिड परत या कम गोली के बिना ध्यान से स्पष्ट सतह पर तैरनेवाला तरल एकत्र.
  4. स्थानांतरण सतह पर तैरनेवाला अपकेंद्रित्र ट्यूबों को साफ करने के लिए और 30 मिनट के लिए 50,000 जी पर अपकेंद्रित्र. 4 में डिग्री सेल्सियस
  5. परिणामस्वरूप उच्च गति एकत्र जैसा कि ऊपर बताया सतह पर तैरनेवाला तुरंत इस्तेमाल किया जा सकता है या तस्वीर जमे हुए और महीने के लिए -80 ° सी में संग्रहीत किया जा सकता है.

3. Microtubule polymerization और kinesin बाइंडिंग

  1. जमे हुए उच्च गति सतह पर तैरनेवाला कमरे के तापमान पर पिघलना. सूक्ष्मनलिकाएं भाजन करना, (0.3 मिमी) जीटीपी और taxol (20 माइक्रोन) जोड़ सकते हैं और में 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर धीरे आंदोलनएक घूर्णन प्रकार के बरतन.
  2. Kinesin बाँध, 2.5 मिमी nonhydrolyzable एटीपी अनुरूप 5'-adenylyl (AMPPNP) imidodiphosphate, कमरे के तापमान पर एक घूर्णन प्रकार के बरतन में एक 10 मिनट आंदोलन के बाद जोड़ें.

4. सूक्ष्मनलिकाएं और kinesin का में अंतर अवसादन

  1. Centrifugation द्वारा एक बराबर मात्रा sucrose (20% sucrose के और निष्कर्षण बफर में 10 माइक्रोन taxol) छ 23,000 (sw41ti रोटर, TLS-55) पर 30 मिनट के लिए तकिया के माध्यम से तलछट. 4 में डिग्री सेल्सियस
  2. मेजबान द्वारा निष्कर्षण 10 माइक्रोन taxol और 75 मिमी NaCl युक्त बफर में मूल homogenate मात्रा का 10% में गोली धो लें.
  3. 4.1 चरण में के रूप में एक और बराबर मात्रा sucrose के तकिया के साथ अवसादन दोहराएँ.
  4. 20 taxol, 75 मिमी NaCl, 10 मिमी 4 MgSO, और 10 मिमी एटीपी माइक्रोन साथ नमक धोने से गोली 5% निष्कर्षण बफर में पुनः निलंबित.
  5. 4 में 20 मिनट के लिए डिग्री सेल्सियस छ 120,000 (:: ३१००० आरपीएम, टीएलएस 55 42,000 rpm के sw41ti रोटर) में तलछट जमा सतह पर तैरनेवाला (kinesin) अंश.
  6. 14,000 जी में 4 बजे 15 मिनट के लिए केन्द्रापसारक ° निस्पंदन सी. प्रदर्शन पुनर्प्राप्त केंद्रित नमूना और इसके बाद के संस्करण के रूप में एक नया फिल्टर के साथ छानने का काम और 30 मिनट के लिए दोहराना केंद्रित नमूना इकट्ठा.
  7. एक प्रोटीन एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए परख प्रदर्शन करते हैं. संक्षेप में, एक ज्ञात प्रोटीन के अलग सांद्रता (गोजातीय सीरम albumin, बीएसए) ब्रैडफोर्ड अभिकर्मक का एक ज्ञात मात्रा के साथ मिलाया गया था और 595nm तरंगदैर्य में ऑप्टिकल घनत्व मापा. फिर एक ऑप्टिकल घनत्व बनाम एकाग्रता मानक वक्र के kinesin अंश शुद्ध इस नमूने के ऑप्टिकल घनत्व मानक बीएसए नमूने के रूप में समान शर्तों के तहत मापा का उपयोग अज्ञात एकाग्रता की गणना के लिए स्थापित किया गया था. जेल के रूप में अच्छी तरह से पश्चिमी वैद्युतकणसंचलन सोख्ता भी शुद्ध kinesin ज्ञात राशि का उपयोग किया गया था.
  8. वांछित और तरल नाइट्रोजन में तस्वीर स्थिर एकाग्रता की छोटी मात्रा में अशेष भाजक kinesin अंश -80 पर स्टोर करने के लिए डिग्री सेल्सियस

पूर्ण लंबाई कार्यात्मक kinesin भ्रूण ड्रोसोफिला से शुद्ध किया गया था चित्रा 1 चांदी दाग शुद्धि के दौरान भिन्न भिन्न दिखा जेल दर्शाया गया है. 3 लेन, लेन 2, 1 लेन स्पष्टीकरण के बाद उच्च गति सतह पर तैरनेवाला (2.5 कदम) का एक नमूना है स्पष्टीकरण के बाद गोली का एक नमूना है sucrose के तकिया के साथ पहले अवसादन (4.1 कदम) के बाद सतह पर तैरनेवाला का एक नमूना है, 4 लेन गली 7, 6 लेन, गोली का एक नमूना पहली अवसादन के बाद, 5 लेन दूसरी अवसादन (4.3 कदम) के बाद सतह पर तैरनेवाला के एक नमूना है दूसरे अवसादन के बाद गोली का एक नमूना है की गोली का एक नमूना है 9 लेन, अंतिम अवसादन (4.5 कदम), 8 लेन शुद्ध kinesin नमूना है फ़िल्टर्ड kinesin नमूना है, और लेन 10 मार्कर है. लेन 8 और 9 में 115 के आसपास केडी पर केंद्रित बैंड kinesin एक भारी श्रृंखला, जो figur साथ संगत है1 ई, Saxton 5 1988 में प्रकाशित कागज के 8 लेन चित्रा 2 शुद्ध kinesin अंश की ग पश्चिमी धब्बा का प्रतिनिधित्व करता है. kinesin को भारी श्रृंखला एंटीबॉडी का उपयोग कर पता चला. एंटीबॉडी AKINO1 काफी नहीं करता है अन्य kinesin परिवार के 6 सदस्यों के साथ पार प्रतिक्रिया. ध्यान दें कि हालांकि कार्यात्मक kinesin का एक अच्छा स्रोत में इस प्रोटोकॉल का परिणाम है, जबकि अंश kinesin-1 के लिए समृद्ध है, वहाँ संभवतः अन्य kinesins और अन्य मोटर प्रोटीन सहित संभावना contaminants, कर रहे हैं. हम निस्पंदन द्वारा छोटे contaminants की एक किस्म हटा दिया. जहाँ तक जो आकार से अकेले नहीं किया जा सकता है अन्य मोटर्स को हटाने के रूप में, शोधन क्या दूसरों के द्वारा किया गया अध्ययन kinesin 7 समान है, और हमें विश्वास है कि सक्रिय मोटर के बहुमत kinesin-1 है, लेकिन और अधिक परिष्कृत शोधन की अनुमति होगी इस तरह के रूप में संभावित मोटर contaminants, हटाने कोल एट 8 अल और Saxton एट अल द्वारा किया गया था 9. kinesin की processivity द्वारा इन विट्रो में एक अणु microtubule के बंधन परख के रूप में मोटर प्रोटीन के लिए गतिशीलता परख "10 ​​हकदार Scholey द्वारा पुस्तक में और अधिक विस्तार में वर्णित में मूल्यांकन किया गया था. संक्षेप में, एक एकल सक्रिय मोटर के साथ योग्य polystyrene मनकों microtubule के साथ संपर्क में लाया गया saturating की उपस्थिति एटीपी (1 मिमी) में है. मोटर microtubule से जुड़ा है, और लेजर जाल के केंद्र से दूर चलने शुरू कर दिया. लेजर बीम शक्ति जाल केंद्र (100 एनएम) से एक पूर्व निर्धारित मनका के विस्थापन पर स्वचालित रूप से बंद कर दिया गया था, मोटर मीट्रिक टन के साथ कोई बोझ के अंतर्गत चलने के लिए अनुमति देता है. फिल्म एक 500 एनएम एकल kinesin मीट्रिक टन के साथ चलने के साथ मनका व्यास से पता चलता है. वीडियो स्क्रीन की लंबाई 20 माइक्रोन से मेल खाती है चित्रा 3 रन की लंबाई के एक पूर्ण लंबाई ड्रोसोफिला kinesin अणुओं के लिए मापा वितरण का प्रतिनिधित्व करता है, यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल के अनुसार शुद्ध. exponentiअल वितरण के लिए फिट की एकल kinesin 1.55 औसत runlength ± 0.1 माइक्रोन और 1.28 ± 0.12 फ़िल्टर्ड और अनफ़िल्टर्ड नमूना के लिए माइक्रोन क्रमशः प्रदान करता है.

चित्रा 1
चित्रा 1 चांदी शुद्ध भिन्न की सना हुआ जेल: प्रत्येक अंश से नमूने एक 10% की जेल में चलाए जा रहे थे. प्रोटीन के 10 μg प्रत्येक लेन में भरी हुई थी. 3 लेन, लेन 2, 1 लेन स्पष्टीकरण के बाद उच्च गति सतह पर तैरनेवाला (2.5 कदम) का एक नमूना है स्पष्टीकरण के बाद गोली का एक नमूना है sucrose के तकिया के साथ पहले अवसादन (4.1 कदम) के बाद सतह पर तैरनेवाला का एक नमूना है, 4 लेन गली 7, 6 लेन, गोली का एक नमूना पहली अवसादन के बाद, 5 लेन दूसरी अवसादन (4.3 कदम) के बाद सतह पर तैरनेवाला के एक नमूना है दूसरे अवसादन के बाद गोली का एक नमूना है की गोली का एक नमूना है अंतिम अवसादन (4.5 कदम), 8 लेन शुद्ध kinesin हैनमूना, 9 लेन फ़िल्टर 100 केडी कटौती बंद Amicon अति 0.5 मिलीग्राम केन्द्रापसारक फिल्टर (Millipore, संयुक्त राज्य अमेरिका) का उपयोग कर kinesin है. नीले तीर प्रोटीन मात्रा कम है और लाल तीर kinesin की केन्द्रापसारक निस्पंदन इस प्रोटोकॉल में प्रयोग किया जाता कदम के कारण एकाग्रता से संकेत मिलता है जिसका संकेत मिलता है.

चित्रा 2
. चित्रा 2 शुद्ध KHC अंश के विरोधी kinesin के एंटीबॉडी के खिलाफ मिट: kinesin नमूना शुद्ध जेल वैद्युतकणसंचलन के अधीन था और प्राथमिक एंटीबॉडी के खिलाफ मिट nitrocellulose झिल्ली में AKINO1 1 घंटे के लिए (1:1,000 TBST में) कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के बाद कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए में गधा विरोधी खरगोश एंटीबॉडी (1:10,000 TBST में). एक ईसीएल किट (chemiluminescent) के लिए ऊपर दिखाए kinesin के संकेत का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया था.

चित्रा 3
चित्रा 3. ड्रोसोफिला पूर्ण लंबाई kinesin के वेग: (ए) और (ख) है और kinesin नमूना फ़िल्टर के Runlength और वेग. (सी) और (डी) और अनफ़िल्टर्ड kinesin के नमूने Runlength वेग.

चित्रा 4 kinesin गतिशीलता की वीडियो. यहाँ क्लिक करें वीडियो देखने के लिए .

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Discussion: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

गोजातीय मस्तिष्क सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल शुरू 11 सामग्री के लिए पूर्ण लंबाई kinesin शुद्ध है, हालांकि murine मस्तिष्क के रूप में 12 अच्छी तरह से इस्तेमाल किया गया है. Kinesin के स्रोत के रूप में गोजातीय मस्तिष्क का उपयोग कर के एक बड़े नुकसान ताजा सामग्री शुरू की उपलब्धता है: बूचड़खाने आम तौर पर कर रहे हैं दुर्गम है, और मस्तिष्क अत्यंत ताजा हो क्रम में सक्रिय kinesin को प्राप्त करना चाहिए. इसके अलावा, केवल युवा गायों के दिमाग प्रभावी हैं. अंत में, वर्तमान में गायों की आनुवंशिक हेरफेर एक व्यवहार्य विकल्प नहीं है, तो केवल जंगली प्रकार के प्रोटीन का अध्ययन किया जा सकता है.

चूहे और अधिक सुलभ हैं, लेकिन murine मस्तिष्क कटाई कुछ हद तक कठिन और समय लेने के रूप में शोधन 50 से अधिक दिमाग की आवश्यकता होती है सकते हैं. इसके अलावा, एक माउस कॉलोनी को बनाए रखने के काफी महंगा हो सकता है.

गोजातीय या murine स्रोतों के विपरीत, ड्रोसोफिला लाभ का एक नंबर है. सबसे पहले, मक्खियों को आसानी से कम से कम पूंजी के साथ प्रयोगशाला में कर सकते हैं बाहर विकसित किया जारखना, और कर रहे हैं इस तरह आसानी से सुलभ. ड्रोसोफिला विपुल भ्रूण, जो आसानी से harvested रहे हैं के रूप में यहाँ वर्णित करना. क्योंकि ड्रोसोफिला जीनोम, चालाकी से किया जा सकता है और वास्तव में कई उत्परिवर्ती मक्खियों को आसानी से प्राप्त कर रहे हैं, दोनों प्रकार के जंगली और उत्परिवर्ती प्रोटीन, शुद्ध किया जा सकता है और आनुवंशिक जोड़तोड़ और एक छोटी पीढ़ी अवधि के संयोजन के कारण, अधिक म्यूटेंट अलग किया जा सकता है. हालांकि, यह नोट किया जाना चाहिए, क्योंकि kinesin समारोह का पूरा नुकसान घातक है, और भ्रूण में प्रोटीन मुख्य रूप से प्रदान की जाती है माता के रूप में, यह संभव शुद्ध kinesin म्यूटेंट है कि नाटकीय रूप से प्रभावित कर रहे हैं शुद्ध नहीं है. बहरहाल, यह संभव है के विषमयुग्मजी भ्रूण (परिजन - mut + /) से शुद्ध प्रोटीन, और मिश्रित आबादी का समारोह विशेषताएँ, और तब संभवतः जानवर में phenotypes समारोह में इस तरह के बदलाव से संबंधित है.

परिवर्तन या परिवहन की हानि करने के लिए कई neurodegenerative रोगों आबाद होता है, तथापि, यंत्रवत लिंकऔर एकल अणु समारोह के कारण या तो परिवर्तन करने के लिए या एक बदल संकेत पर्यावरण () की बीमारी परिवर्तन के बीच स्पष्ट नहीं है. प्रोटीन शुद्धि यहाँ विकसित परख इस समझ को आगे बढ़ाने में एक महत्वपूर्ण उपकरण है, क्योंकि एकल अणु assays मोटर्स समारोह का निर्धारण किया जा सकता है चाहिए. साथ इस तरह के अध्ययन phenotypes के vivo लक्षण वर्णन में, संयोजन और मॉडलिंग द्वारा सहायता प्राप्त करने के द्वारा, इस फेरबदल विशिष्ट एकल आणविक गुण और / विकास प्रगति (रोग के बीच संबंध के प्रत्यक्ष निर्धारण की अनुमति देता है एक उदाहरण के रूप में बदल एकल अणु dynein और समारोह के बीच लिंक देखें बिगड़ा neuronal 13 में) परिवहन.

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Disclosures: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgements: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

िईद्भस Ngai जेसन डेल रियो और उनके समर्थन और इस परियोजना में सहायता के लिए विशेष धन्यवाद. यह काम RO1 एसपीजी के लिए GM070676 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

Materials: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

Name Company Catalog Number Comments
Agar (Granulated) Fisher Scientific 1423-500
Dextrose (D-Glucose) Anhydrous Fisher Scientific D16-3
Petri Dishes BD Biosciences 35 1007 60x15mm Style
(Polyester) 20/bag
Drosophila Culture Vials UCI
Tricorn beaker Econo Lab Inc. B700-100 Volume:100ml,
size: 58x72mm
Yeast Red Star 2751
Nylon Mesh Genesee Scientific 57-102 120 micron pore size
Nylon Mesh Small Parts, Inc. 06-350/35
Pipes Sigma-Aldrich 108321-27-3
Pipes Sigma-Aldrich 108321-27-3
Glycerol Fisher Scientific 56-81-5
EGTA Sigma-Aldrich 67-42-5
MgS04(Anhydrous) Fisher Scientific 7487-88-9
PMSF Sigma-Aldrich 329-98-6
Leupeptin Sigma-Aldrich 103476-89-7
Aprotonin Sigma-Aldrich 9087-70-1
TAME Sigma-Aldrich 178403-8
STI Calbiochem 65635
GTP Sigma-Aldrich 36051-31-7
Taxol Sigma-Aldrich 33069-62-4
ATP analog 5’-adenylyl imidodiphosphate Sigma-Aldrich 3605-31-7
NaCl Mallinckrodt Baker Inc. 7647-14-5
ATP Sigma-Aldrich 74804-12-9
Amicon Ultra Centrifugal Filters: .5 mL, 100kD cut off, 8 pack EMD Millipore UFC510008

References: अलगाव और kinesin के शोधन से ड्रोसोफिला भ्रूण

  1. Ashburner, M. & Thompson, J.N. "The laboratory culture of Drosophila." In: The genetics and biology of Drosophila. 2A., Ashburner, M. & Wright, TRF., eds. Academic Press., 1-81 (1978).
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