The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Genes and Environment Laboratory, University of California, Berkeley
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Ji, Z., Zhang, L. Chromosomics: Detection of Numerical and Structural Alterations in All 24 Human Chromosomes Simultaneously Using a Novel OctoChrome FISH Assay. J. Vis. Exp. (60), e3619, doi:10.3791/3619 (2012).
1. नमूना स्लाइड तैयारी
2. एक स्वचालित प्रणाली का उपयोग metaphases का स्थानीयकरण
3. संकरण
4. बढ़ते और परिणाम के दृश्य
5. प्रतिनिधि परिणाम
Figuफिर 3A 2 स्क्वायर में एक सामान्य मेटाफ़ेज़ सेल से पता चलता है. (1) - (3): 8 गुणसूत्रों, 21 और 12 लाल, हरे, और नीले रंग में रंगा गया था, और एक टेक्सास लाल, FITC, और DEAC फिल्टर, क्रमशः के माध्यम से कल्पना की जाती है, (4): एक DAPI / / FITC के माध्यम से विज़ुअलाइज़ेशन टेक्सास लाल ट्रिपल फिल्टर. आम तौर पर, गुणसूत्रों नीले रंग के साथ चित्रित ट्रिपल फिल्टर के माध्यम से स्पष्ट नहीं कर रहे हैं और लिए विशिष्ट DEAC फिल्टर के तहत देखा जा जरूरत है.
चित्रा 3B लेकिमिया विशिष्ट गुणसूत्र स्थानान्तरण और aneuploidy के साथ प्रतिनिधि असामान्य कोशिकाओं को दर्शाता है. (1): टी (8, 21), तीव्र myeloid लेकिमिया में एक आम गुणसूत्र स्थानान्तरण, (2): 21 Trisomy, 21 गुणसूत्र, लेकिमिया में एक आम aneuploidy की तीन प्रतियां.
चित्रा 1 OctoChrome डिवाइस और उम्मीद गुणसूत्र चित्रकला परिणाम पर गुणसूत्र संयोजन की व्यवस्था.
![चित्रा 2]("Files/ftp_upload/3619/3619fig2.jpg)
चित्रा 2 OctoChrome डिवाइस पर नमूना स्लाइड के पोजिशनिंग.
चित्रा 3 प्रतिनिधि परिणाम.OctoChrome मछली (2 स्क्वायर) से प्राप्त है.
चित्रा 3A 8 गुणसूत्रों, 12, 21 2 स्क्वायर में चित्रित के साथ एक सामान्य कोशिका.
चित्रा 3B. लेकिमिया विशिष्ट गुणसूत्र और 2 स्क्वायर में स्थानान्तरण aneuploidy के साथ प्रतिनिधि असामान्य कोशिकाओं.
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यह उपन्यास परख OctoChrome मछली के साथ ही एक स्लाइड पर एक संकरण में सभी 24 मानव गुणसूत्रों की जांच करने के लिए अनुमति देता है. 8 वर्गों पर गुणसूत्र संयोजन की व्यवस्था के लिए सबसे आम ल्यूकेमिया और lymphomas में गैर यादृच्छिक गुणसूत्र rearrangements की पहचान की सुविधा के लिए बनाया गया है. इस प्रकार, परख (aneuploidy) संख्यात्मक रूप में के रूप में अच्छी तरह से संरचनात्मक (ट्रांसलोकेशन) गुणसूत्र परिवर्तन समवर्ती का पता लगा सकते हैं.
इस परख में सबसे महत्वपूर्ण कदम नहाने के पानी में चल कक्ष में रात में संकरण के दौरान नमी को नियंत्रित करना है. मछली और जांच संकरण बफर को आसानी से बाहर सूखी अगर नमी कम है, या बन भी बहुत अधिक नमी को अवशोषित कर पतला अगर नमी ज्यादा है. या तो परिणाम पर प्रतिकूल परिणाम पर प्रभाव पड़ सकता है. इस चुनौती पर काबू पाने के लिए एक संभव संशोधन के लिए टेप के साथ OctoChrome युक्ति और नमूना स्लाइड सील और एक 37 ° पर संकरणअंधेरे रात में सी hotplate.
नमूना स्लाइड है कि बहुत अधिक आयु वर्ग के है यह सीधे परख में उपयोग के लिए अनुपयुक्त हो सकता है. जबकि पेप्सिन साथ इस तरह के नमूने पचाने संकरण में सुधार करने के लिए, एक नाइट्रोजन वातावरण में -20 में तैयार नमूना स्लाइड भंडारण डिग्री सेल्सियस दृढ़ता से उम्र बढ़ने कम से कम की सिफारिश की है.
OctoChrome मछली ल्यूकेमिया और लिम्फोमा के नैदानिक निदान के लिए एक आशाजनक तकनीक है. यह भी सबसे विशिष्ट गुणसूत्र rearrangements संभावित leukemogens और lymphomagens उजागर करने के लिए आबादी में और aneuploidy एक गुणसूत्र व्यापक तरीके में रसायनों के उत्प्रेरण प्रभावों के अध्ययन के लिए मानव ल्यूकेमिया और लिम्फोमा के लिए संबंधित जांच के लिए बहुत उपयोगी है. हमारे पिछले CWAS इस तकनीक का उपयोग अध्ययन दिखा दिया कि कुछ क्रोमोसोम अधिक 8,10 बेंजीन, एक प्राथमिक औद्योगिक रसायन और एक देशव्यापी पर्यावरणीय प्रदूषक कि मानव लेकिमिया 14 का कारण बनता है के लिए जोखिम से दूसरों की तुलना में प्रभावित हो सकता है.अन्य रासायनिक CWAS का उपयोग कर जोखिम में "चयनात्मक aneuploidy" की इस घटना का पता लगाया जा सकता है.
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हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
लेखकों गंभीर पढ़ने और पांडुलिपि संपादन के लिए डॉ. Cliona एम. McHale धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम पर्यावरणीय स्वास्थ्य विज्ञान, राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान R01ES017452 के एल जांग संस्थान के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| OctoChrome Kit | Cytocell Ltd. | PMP 803 | |
| phytohaemagglutinin (PHA) | Invitrogen | 10576-015 | |
| Colcemid | Invitrogen | 15212-012 | |
| Carnoy’s fixative | Methanol : glacial acetic acid = 3: 1 | ||
| Fluorescence microscope | Equipped with filters to view DAPI, Texas Red, FITC, and Coumarin spectra individually and a DAPI/FITC/Texas Red triple filter to view different colors simultaneously | ||
| Metafer software | MetaSystems, Altlussheim, Germany | Facilitate to locate all metaphases and to re-evaluate the abnormalities |
