供体角膜内皮角膜移植术的组织准备

Woodward, M. A., Titus, M., Mavin, K., Shtein, R. M. Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty. J. Vis. Exp. (64), e3847, doi:10.3791/3847 (2012).

在过去的十多年中，角膜移植手术技术都发生了革命性的变化^，1,2。公司自成立以来，一直是传统的全层角膜移植治疗恢复视力角膜疾病的限制。这种方法的一些缺点包括手术后散光的程度高，缺乏可预见的屈光结果，眼球表面的干扰。后弹力剥内皮角膜移植术（DSEK）移植后的角膜基质层，后弹力膜，和内皮细胞，发展已经极大地改变角膜内皮疾病的治疗。 DSEK通过一个小切口，其出血或驱逐的危险，这种技术避免了“开放天空”的手术，减少术后伤口裂开的发生率，减少不可预知的屈光结果，并可能会降低移植排斥反应率^3-6。

眼库已提供多年移植手术的全层角膜。眼库在2006年开始开发供内皮角膜移植术的预切的角膜组织的方法。随着角膜外科医生的输入，眼银行已经开发了彻底的协议，安全和有效地准备后的层状组织f或的DSAEK手术。这可以进行术前眼库。研究表明，没有任何组织或患者的治疗效果为DSAEK手术中使用眼库预切组织与外科医生准备组织^8,9质量方面的显着性差异。对于大多数角膜的外科医生，预切DSAEK角膜组织的可用性，节省了时间和金钱^10，减少了在手术室进行捐助角膜剥离的压力。因为眼库的能力，及时地提供高品质的后板层角膜的一部分，，DSAEK已成为手术治疗角膜内皮病变的护理标准。

我们所描述的程序，是准备后在眼库的层状角膜移植在DSAEK手术的（ 图1）。

1。设置：无菌技术¹¹

1. 打开层流罩（LFH）。
2. 打开氮气控制单元。确保软管控制台单元和氮气罐之间的连接。打开气。设置应设置燃气50-60 PSI稳压罐。汽轮机压力单位应改为3.3至3.4条。
3. 按测试按钮。大气压力会读在737-700和泵1和2应该是低于200。单位测试完成时，会发出蜂鸣声。唐面具保护眼睛，如适用，并盖。洗手和唐非无菌手套。 LFH和开放的包裹内放置无菌包，建立无菌区。
4. 将消毒药杯和一个既定的无菌场旁边的无菌纱布，无菌塑料脸盆。药杯倒入无菌异丙醇。用酒精棉球/垫和地方探头尖到药杯，测厚仪探头。探针尖端应为10 m的浸泡在异丙醇inutes。测厚仪探头浸泡10分钟后，从预充式注射器无菌水冲洗探头尖端去除酒精和地方探头在塑料盆。
5. 使用无菌技术，打开拖放到无菌区无菌物品（叶片，无菌手套，和角膜的观察室），除非已预制包的一部分。
6. 在保护媒体和内的LFH地方（ 图2）获取的角膜组织。
7. 打开小瓶（S）和生物危害到一个合适的插座盖（S）的处置。丢弃非无菌手套。
8. 戴上无菌手套。将预先包装的塑料盆地位于测厚仪领域的一面。输液线连接活塞和地方穗输液线年底油烟机的安全线，在这样一种方式，以防止外界的引擎盖线，从重返引擎盖和接触无菌领域之外。
9. 执行角膜组织转移。轻轻倒入组织和媒体，在SIngle议案，从现有的小瓶一个无菌观看室。务必保持血管内皮的一面向上。放置帽室。含无菌区的组织和媒体保持商会。将LFH小瓶（S）。取下并丢弃无菌手套。
10. 穗平衡盐溶液（BSS）瓶输液线。挂瓶的无菌的BSS约四个工作区域表面英尺。
11. 打开两对无菌手套和消毒用毛巾袍。
12. 执行六分钟的手术擦洗和干手器。
13. 放在无菌袍，然后双方对无菌手套。
14. 到无菌的领域，打开仪器箱和地方的内容。
15. 成金属盆或药杯免除10-20 CC BSS解决方案。无菌吸管填充BSS解决方案。活塞和输液线注入前房端口连接和与BSS冲洗，使少量活塞顶部可见。
16. 在LFH位置人工室返回纱布。降低活塞移植紧缩环逆时针转动。

2。程序

1. 使用镊子，轻轻抓住角膜巩膜轮辋。打开活塞冲洗BSS系统的同时，认真围绕角膜内皮方活塞顶部下来。如果气泡下方的角膜可见，继续与BSS注入及角膜轻微移动，删除它们。气泡一旦被删除，停止输液。确保角膜中心活塞（ 图3a）。
2. 前房盖基地锁紧环的位置，使基地空地盖适合的标签。锁定转化基地盖盖顺时针旋转15°转动。提高活塞和完全拧紧（ 图3b）。
3. 用无菌手套的手指，轻触角膜上，以确保有足够的压力来执行程序。
4. 检查表面O探头放在测厚仪f角膜获得厚度读数（ 图4）。标准偏差必须小于10。如果没有，重新夺回测量。随着无菌手套的手，没有被用来执行测厚仪，通过涡轮软管手进行测厚仪和涡轮软管拧到控制单元。有协助技术员纪录测厚仪阅读。
5. 脱去污染的手套。
6. 使用无菌标记笔，画出向角膜中心（或不标记，如果医生喜欢没有标记）从4毫米缘线。使用吸管放置在角膜上五滴的BSS。
7. 除非是由医生提供的具体说明，预先切开的角膜厚度测量，如果是小于600微米，300微米切割头将。如果超过600微米，350微米切割头将被使用。
8. 对你和数量朝上面临与线程，加载到角膜头部右侧的刀片，首先指出年底，避免接触无线网络TH的刀片。
9. 持头，每边拧到涡轮头。人工室用手指拧紧。
10. 涡轮软管拧到涡轮机。
11. 测试真空踏板一次，按5秒，淹没在无菌水切割头和脉冲涡轮叶片振荡。
12. 重新拧紧活塞。
13. 安装后，并在五点钟的位置上，基地的地方角膜。按住涡轮踏板振荡刀片（ 图5a）。
14. 用食指和拇指，保持角膜之间的中间基地和涡轮机的顶部。转动手腕使平稳，甚至穿过整个角膜。推出涡轮踏板和直客单位解除角膜。按真空踏板，关闭真空（ 图5b）。
15. 戴上无菌手套和复检后角膜帽测厚仪阅读被删除放置在角膜表面的探头获得第二厚度读数注意到，该组织是非常薄，很容易损坏。脱掉污染的手套。有协助技术员纪录第二测厚仪阅读。
16. 使用无菌记号笔，放置一个标志，如果按医生的要求，在人工腔残余基质床中旬外围边缘。残余基质床放置到无菌的BSS几滴。
17. 删除从角膜前角膜帽（ 图6），并取代人工前房角膜在角膜上，然后删除它。第应集中在角膜周边标志着以正确对齐帽，如果适用。使用拭子矛轻轻地定位在角膜上的帽。使用新鲜的矛吸收前盖下方任何的BSS。
18. 打开活塞，转腔倒够慢下活塞，以防止变形角膜。解锁基地，并允许从BSS流量的压力，以推动基地的人工腔杯。用钳子，轻轻拉T的角膜在9轮辋，12日和3点钟位置，松开杯。一旦松动，在12点钟位置使用镊子取出角膜。观看室，内 ​​皮朝上（ 图7）放置在角膜。放置在观看室的盖子。取出无菌手套。
19. 观看室盖拧紧。
20. 执行后切裂隙灯角膜和记录结果的评价和反射镜。
21. 地方商会（S）在适当的冰箱节。
22. 以外科医生为运输包装（ 图8）。

3。代表结果

适当的机械角膜光滑，均匀的层状角膜供体组织捐献角膜的结果清扫。这是光学相干断层扫描（OCT）图像截面的角膜（ 图9）所示。最后后的角膜组织，应该是足够的厚度由pachymet测量RY。在密歇根州的眼库在过去6个月，平均处理前角膜厚度为558微米，后处理后的角膜组织的厚度为158微米。 87％的100-200微米之间，10.9％计算> 200微米，2.1％计算<100微米的角膜，解剖捐助测量组织。

后的角膜组织，必须保留内皮细胞高密度（ECD）提供改善血管内皮功能的移植。反射镜是用来衡量幼儿。在过去6个月内，所有被视为资格来自密歇根州的眼库内皮角膜移植术的角膜组织幼儿> 2200细胞/毫米^2。九十九％的预切DSAEK组织后处理幼儿> 2400细胞/毫米^2，和19％的幼儿> 3000细胞/ mm ^2。在预先处理后幼儿的平均变化是微不足道的1.2％（P = 0.0003，配对双尾t检​​验）。在手术过程中可能发生的并发症包括亏损的压力，非对称夹层，和显着的组织压痕造成角膜内皮细胞丢失。不当的夹层也可以导致组织穿孔。

图1。内皮角膜移植术图1a至1E角膜组织制备的总体方案截面表示捐献角膜的准备。 图1F 1I DSAEK手术移植的角膜截面交涉。

1. 捐献角膜是安装在一个人工前房解剖角膜头。
2. 组织剥离后，两片层是独立的，但前薄板（帽）的位置上保持角膜床运输医生。
3. 在手术室，外科医生使用环钻角膜组织中央垂直穿过前部和后部的鳞片。
4. 周边捐献角膜环钻切割后，从外地被删除。
5. 后瓣前瓣用锅铲轻轻取出。捐助后瓣（DSAEK组织）取代收件人的角膜病变（1I）的一部分。
6. 病人患病后角膜被删除。
7. 病后角膜人工仪器在一个大直径的圆（反向Sinsky钩）与取得。
8. 进球后的角膜病变，角膜后膜被删除。
9. 捐助后瓣（DSAEK组织）被放置在收件人的眼睛。

图2。在媒体的角膜组织。角膜组织后，房委会在保护媒体rvesting来自捐助国。

图3。前房人工角膜组织。

1. 角膜组织被装上人工前房事先基地锁紧环或组织清扫。
2. 锁定基地组织在密封环安装到人工前房角膜组织。

图4。角膜组织厚度检查。检查角膜厚度，角膜表面上使用超声波测厚仪探头。

图5。角膜组织解剖。

1. 角膜刀片的基础上安装后，并在五点钟的位置。
2. 角膜通过角膜层状剥离。

图6。解剖后的角膜。前角膜帽是免费的角膜剥离后的前盖是完整的。

图7。解剖查看商会角膜剥离完成后，角膜返回运输观看室。

图8。在运输包装的角膜。在观看室的角膜，然后安全地包装运输的外科医生。

图9。华侨城华侨城外观角膜。最后解剖角膜（截面）显示，角膜被分裂成两部分。接口是更强烈的反射比周围组织，如箭头所示。

最里面层，角膜内皮细胞，维持角膜脱水，保持角膜的光学清晰度。许多疾病状态，特别包括营养不良，感染，炎症过程和退化，影响角膜内皮细胞的健康和活力。直到最近，角膜移植，以取代病变的角膜内皮细胞所需的全层角膜移植。在过去十年中，有针对性地更换后的角膜偏厚的角膜移植，DSAEK手术，已经能够用更短的恢复时间，以达到同样的目标。无论技术，移植的组织必须保持一个健康的角膜内皮细胞移植角膜的光学清晰度保持作为一个结果，所有的组织处理技术，具有额外的步骤，以保护角膜内皮。

自动角膜剥离是目前日e标准内皮角膜移植术的角膜组织准备。使用的角膜，以减少捐助组织穿孔，加快视力恢复相比手动清扫^5。 DSAEK最初介绍，一些医生购买角膜设备和手术室在手术开始进行供体层状剥离。如果组织准备失败，手术将被取消造成不便和费用的病人和医生。眼库在2006年开始执行角膜的解剖“场外”的前一天手术¹²眼库实验室的受控条件下。如果在此设置的组织准备失败，有时间来执行另一个新鲜组织解剖。

捐助后板层角膜组织角膜剥离需要温柔和精确的技术，以尽量减少并发症。必须放置在角膜gentlY对人工前房（AAC），以避免任何微妙的内皮细胞的损伤。一旦角膜安装和对齐的AAC，必须定位和锁紧环，一个密封室内保持高的压力和减少组织崩溃的机会，在角膜剥离调整。以确保统一清扫，角膜头应该是一个常数，顺利地旋转。组织剥离后，必须再次进行审慎处理，以减少内皮细胞的损伤。此外，它是至关重要的确认，以确保后的鳞片将是适合于使用在手术¹³层状切割中心和完整。

角膜捐赠穿孔此过程是可怕的并发症，它用丰富的经验变得越来越频繁。如果反复穿孔发生在角膜的推移，它是重要的检查过程中的多个步骤。玉米EA必须正确安装和对准的AAC。应事先获得一个密封和高压到角膜通，并保持整个过程。有时，存在残余结膜巩膜缘和需要安装前被解剖。角膜刀片应锋利，无缺口。估计角膜厚度的基础上，应选择正确角膜头厚度。角膜头必须正确振荡前通。随着这一技术的进一步问题，咨询角膜的供应商，以确认所有设备工作正常。

即使完全执行时，也有一些这种技术的局限性。角膜头可切割不同厚度的角膜组织，然而，提供广泛的最终组织厚度，角膜头，最后组织厚度的关系是同一头不精确^7。此外，在准备一个重要的学习曲线exists和并发症的新用户更频繁。在眼库设置执行的层状剥离，允许执行此过程，每天多次训练有素的技术人员，以优化他们的技术，从而最大限度地减少并发症，由于缺乏经验。

辅助角膜角膜内皮角膜移植存在夹层的技术修改。有些人喜欢使用上提供增强保护角膜内皮细胞的意图前房人工角膜按钮下方的粘弹性材料或角膜的存储介质，而不是平衡盐溶液。在角膜切口应发起位置的确定方法也有变化。不同眼的银行和不同的角膜外科医生可能有特别的喜好，如何识别标记角膜角膜前盖或后板层的方向。应当指出，制造商在本协议所使用的类似设备。无论使用哪种设备，应遵循的特定制造商的指示。

解剖DSAEK手术的角膜组织的银行准备可靠的眼睛一直有利于这个相对较新的手术技术的广泛接受。一旦医生成为眼银行执行的“第一步”，在角膜移植中的信心 - 即组织准备，许多实际的限制DSAEK得到缓解。眼库已经能够可靠地保持与捐助组织供应安全，有效，及时的处理与组织的需求。高品质DSAEK组织现在可以责令提前和手术室的时间和组织准备并发症减少^9，14-15。

本协议描述的preparati从眼睛的角膜供体组织的银行处理的角度DSAEK移植;然而，这种技术是直接适用于外科医生在准备自己的角膜板层捐助组织以及感兴趣的兴趣角膜板层上执行基于实验室或临床研究移植。

角膜板层准备未来的发展方向，包括组织处理，利用飞秒激光创造“超薄”DSAEK角膜组织，或准备弹力膜内皮角膜移植术（DMEK）手术治疗角膜内皮滚动。内皮角膜移植术是在进化过程中的手术视野和眼库和角膜外科医生之间的共生关系，将继续改变外科技术进行了优化。

博士。伍德沃德和Shtein没有透露。中西部眼银行员工，先生Mavin泰特斯先生。

由NIH /的聂EY01​​7885（RMS）的部分支持。

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