Ру-ан-Y желудка обходного операции у крыс

1. Предоперационная уход

1. Удалить из пищи крысы ночь до операции.
2. Вызвать анестезии в камеру с 4-5% изофлуран и O2 потоке 2 л / мин.
3. Бритье живот от грудины до таза с использованием электрической бритвой.
4. Положите под наркозом крыса в положении лежа на изотермические грелку.
5. Применение глазной мази (Vitagel) прежде, чем поместить морду крысы в ​​головная часть.
6. Поддержание анестезии ИФ концентрации 2-3% и O2 потоке 2 л / мин.
7. Лечить коже Бетадин-решений.
8. Подтвердите глубины анестезии щипцами щепотку между пальцами задних ног.
9. Администрирование 5,7 мг / кг внутрибрюшинно Энрофлоксацин как периоперационной антибиотикопрофилактики и 1 мг / кг Flunixin для обезболивания.

2. Срединная лапаротомия

1. Выполните средней линии разрез скальпелем использования, начиная чуть ниже xyphoid процесс (Blade № 10).
2. Мобилизовать кожи окружности с Подчеркнутыйинь мышцы живота использованием Metzenbaum ножницами.
3. Открытие брюшной полости.
4. Установить преднатяжителями для облегчения наилучшего воздействия операционного поля.

3. Biliopancreatic и пищевая конечностей

1. Определите, двенадцатиперстной кишки или тощей кишки проксимальнее проходит под толстой кишки.
2. Секут тонкой кишки около 10 см спинной отсюда и перевязывать оба конца кишки (PDS 5-0).
3. Поместите проксимальной культи обоих концах в левом верхнем квадранте живота, как это будет позже использоваться для формирования конечностей biliopancreatic Ру-ан-Y реконструкции.
4. Поместите дистальной культи обоих концах в правом верхнем квадранте живота, как это будет позже использоваться для формирования пищевого конечностей Ру-ан-Y реконструкции.

4. Jejuno-эюностомия

1. Определить слепой кишки с ileocoecal клапана и подвздошной кишки.
2. Следуйте подвздошной кишки внутрь в течение примерно 25 см. Jejuno-эюностомия будут размещены здесь в качестве отправной точкиобщего канала Ру-ан-Y реконструкции.
3. Получить biliopancreatic конечности от левого верхнего квадранта живота и расположить его рядом с общим каналом, где вы планируете выполнять Jejuno-эюностомия.
4. Безопасные конечностей biliopancreatic и общий канал с сохранением стежка (PDS 6-0).
5. Надрезать и петли на приблизительно 10 мм с помощью микро-ножниц.
6. Создать Jejuno-эюностомия, выполняя из стороны в сторону использования анастомоза узловыми швами (PDS 6-0).
7. Первый полный спинной стороны, а затем брюшной стороне анастомоза.

5. Желудочный Чехол

1. Определить желудочно-пищеводного перехода.
2. Мобилизовать этой области рассечения желудочно-печеночную и желудочно-селезеночной связки использованием Metzenbaum ножницами.
3. Перемещение левой желудочной артерии и блуждающий волокна левого пара-пищевода пучка сбоку для предотвращения крупных кровотечений и блуждающего нервов, когда ущерб небольшой мешочек желудка создается.
4. Выставьте желудочно-пищеводного дзюемки, помещая ватный тампон, ретро-oesophageally.
5. Коагулируйте мелких сосудов фронтальной желудка с помощью коммерчески доступных устройств прижигания - также для предотвращения кровотечения.
6. Секут желудка приблизительно на 5 мм ниже желудочно-пищеводного перехода создания желудка сумку размером не более 2-3% от оригинального размера животе, используя тонкие, изогнутые ножницы.
7. Закрыть желудка остатки (PDS 5-0).

6. Желудочно-эюностомия

1. Получить пищевой конечностей с правом верхнем квадранте живота и поместите его рядом с желудочный мешок.
2. Создать желудочно-эюностомия выполняя конца в сторону анастомоза (PDS 7-0).
3. Первое полное стороны спины, а затем лицевой стороне анастомоза.

7. Брюшной закрытия

1. Уменьшить анестезии за счет снижения концентрации ИФ до 1,5%.
2. Закрыть мышечного слоя передней брюшной стенки с использованием непрерывного швов (PDS 4-0).
3. Администрирование 100 мкл 0,3 мг / млбупренорфин раствора подкожно для обезболивания.
4. Дальнейшее сокращение ИФ концентрации до 1%.
5. Закройте кожу с помощью узловыми швами (Викрил 4-0).

8. Ведение послеоперационного периода

1. Стоп ИФ и продолжить O2.
2. Администрирование 5 мл теплой соленой для замены жидкости в трех депо подкожного.
3. Позиция крыс под красный свет до полного выздоровления.
4. Вернуться на главную крысу клетке.

9. Представитель Результаты

Животные и жилье

Мужской крыс Вистар (Харлан Лаборатории Inc, терн, Великобритания,. Elevage Жанвье, Ле-Genest-Санкт-острова, Франция), весом от 350 до 500 г по отдельности размещены в 12 ч / 12 ч свет-темнота цикла при комнатной температуре 21 ± 2 ° C. Вода и стандартным кормом были доступны без ограничений, если не указано иное. Все эксперименты проводились в соответствии с лицензией, выданной Министерством внутренних Offiсе, Великобритания (PL70-6669) или утвержденных ветеринарной службы кантона Цюрих, Швейцария. Все крысы были даны одной недели акклиматизации перед тем, рандомизированных на желудочное шунтирование или фиктивных-операции. После операции крысы получали жидкую диету в течение 3 дней, прежде чем доступ к нормальным чау была восстановлена.

Вес тела

Данные наших крыс обход желудка согласуются с предыдущими данными, что желудочное шунтирование является эффективным для снижения массы тела и, особенно, для поддержания массы тела (рис. 2). Средняя предоперационной массы тела крыс для желудочного шунтирования и притворство-операций была одинаковой (обман: 433,4 ± 8,3 г по сравнению с байпасом: 420,7 ± 8,4 г, р = 0,28). Через пять дней после операции фиктивный управлением контроля весил значительно больше, чем в желудке крыс обхода (обман: 422,2 ± 8,3 г по сравнению с байпасом: 374,7 ± 7,6 г, р <0,001). На день после операции 60, разница в весе почти 170 г (обман: 533,2 ± 8,1 г по сравнению с байпасом: 366,2 ± 10,8 г, р <0,001).

Прием пищи

Прием пищи следуют аналогичные модели, как масса тела и был сокращен в желудке крыс обход по сравнению с мнимой управлением вволю кормили крыс. На рисунке 3 показано среднесуточное потребление пищи в обеих группах (1-60 день после операции). Ежедневный прием пищи был постоянно ниже после желудочного шунтирования (обман: 29,9 ± 0,2 г против обхода: 25,7 ± 0,3 г, р <0,001).

Гут гормоны

Кровь из всех крыс были собраны в день исследования прекращении ^8,16. Животные были вволю доступа к продовольствию в ночь перед и были обезглавлены в начале светового цикла на день после операции 60. Кровь была получена, немедленно центрифугировали при 3000 оборотов в минуту в течение 10 минут при 4 ° С и хранят при температуре -20 ° C до образцов в дубликатах проводили в один проход. PYY, как иммунореактивности было измерениеизмерялась с помощью специфичных и чувствительных радиоиммунологического, который измеряет, как по всей длине (PYY1-36) и фрагмент (PYY3-36). GLP-1 измеряли установлены в доме радиоиммунного ^17,18. Различия в приеме пищи может быть частично объяснено повышенной постпрандиальной концентрации в плазме крови пептида YY (PYY) и глюкагон-подобный пептид 1 (GLP-1), желудка крыс обхода показали значительно более высокий уровень для PYY (обман: 26 ± 2 пмоль / л против . обхода: 141 ± 14 пмоль / л, р <0,001) и GLP-1 (обман: 40 ± 5 пмоль / л против обхода: 215 ± 23 пмоль / л, р <0,001; рис. 4).

Рисунок 1. Желудочный анатомии обхода. Схематическое изображение малого анатомии кишечника до (А) и после (б) операции шунтирования желудка. Различные оттенки красного примерно представлять соответствующие сегменты тонкого кишечника со средой красный представляющих кишки(Пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки проксимальнее тощей кишки), светло-красный представляющих кишки (проксимальных и средних тощей кишки, проксимального отдела подвздошной кишки) и темно-красный представляющих кишки (подвздошной кишки, слепой кишки).

Рисунок 2. . Массы тела после операции шунтирования желудка у крыс масса тела изменением представитель группы крыс после желудочного шунтирования (-) (п = 52) и фиктивный управляемых крысах (-) (п = 52) в течение всего периода наблюдения 60 дней. Данные были объединены с предыдущими публикациями ^6,8-10 и представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего (*** = р <0,001).

Рисунок 3. Среднее потребление пищи после операции шунтирования желудка у крыс. Средняя суточная доза пищи представитель группы крыс после желудочного шунтирования (черный, п = 52) и мнимого, оперированных крыс (белый, п = 52) в течениеПослеоперационный период в 60 дней. Данные были объединены с предыдущими публикациями ^6,8-10 и представлены в виде среднего значения ± SEM.

Рисунок 4. Постпрандиальной PYY и GLP-1 сыворотке крови после операции шунтирования желудка у крыс. Постпрандиальной PYY и GLP-1 в сыворотке крови крыс при язве желудка обхода (черный, п = 18) и мнимого, оперированных крыс (белый, п = 22). Данные были объединены с предыдущими публикациями ^8,16 и показано, как средние значения ± SEM.

Ру-ан-Y желудка обойти процедуры у человека был впервые описан в 1967 году Мейсон и изменение в его нынешнем виде на Торреса в 1983 году ^19. В настоящее время процедура состоит из небольшой мешочек желудка и обход проксимальных отделах тонкого кишечника. Схематическое изображение пред-и послеоперационной анатомия приведена на рис 1.

Желудочного шунтирования у людей вызывает и поддерживает тело потеря веса около 15-30% ^2. Большая часть массы тела теряется в первые месяцы после операции, частично за счет снижения потребления пищи, изменение предпочтения пищи и, возможно, увеличить расход энергии ^4-6,8-10. Точно так же к тому, что наблюдается у людей, наш желудочный модель крысы обхода вызывает значительное сокращение приема пищи и массой тела. В отличие от желудка модели обход других отображения постоянного веса восстановить параллельно веса тела фиктивный управлением контроля сразу после желудкаобход с разницы в приеме пищи между мнимой управлением и желудочного шунтирования работать крыс ^20.

Послеоперационные изменения в ходе массы тела и потребления пищи между опубликованными модели крысы может быть отчасти связано с различиями в размерах желудка сумке. Большие размеры сумки, как сообщается, причиной недостаточной потери веса или восстановить у людей ^21. Создание небольшой мешочек желудка у крыс технически требовательный, но возможно и различные методы были описаны ^15. Сумка размер желудка модели обхода у крыс литературы колеблется от <5% до более чем 20% от начального размера желудка ^15. В то время как мы используем изогнутые ножницы микрохирургических, большинство авторов секут желудка с помощью человеческого устройства степлер в результате сохранился желудка сумке, по крайней мере 20% от первоначального объема желудка ^{7,15,20,22-24.} Это в отличие от того, как процедура обхода желудка является usuaLLY выполняются на людях, где не менее 90% желудка обходится ²⁵ и многие хирурги сообщают, что только 1-2% от желудка остается смежный с тонкой кишке ^26. Наша крыса модели желудочного шунтирования поэтому точно имитирует хирургические процедуры, используемые в людях, создавая очень маленький мешочек желудка, состоящий из <5% от первоначального объема желудка ^27. Таким образом, в нашей модели крысы и человека пациентов, питание подается непосредственно в тощую кишку, а не разводят в сумке от другой пищи и жидкости, прежде чем она становится более медленно переносятся в тощую кишку. Таким образом, если оставить слишком большой, желудочный мешок может сохранить некоторую емкость, следовательно, приводит к различным физиологическим состоянием человека по сравнению с обхода желудка. Соответственно, желудка крыс обход с сумка размером 20% и более от исходного размера желудка было показано, что по-прежнему сохраняют попадании контрастного вещества в сумке долгое время после приема остановил ^7. Интересно, что ди-fferences в желудочном размер сумке также было показано, что влияет на потерю веса у людей ^21. Таким образом, различия в размерах желудка сумке может повлиять на время прохождения пищи в тонком кишечнике, которая, в свою очередь, может повлиять на рацион питания и пищевые предпочтения после желудочного шунтирования.

Измененные уровни гормонов кишечника после желудочного шунтирования у человека последовательно продемонстрировали ^4,5,28, в то время как некоторые, но не все опубликованные крыса модели желудочного шунтирования сообщил изменения в кишечнике уровня гормонов ^15. Если расследование, повышенный уровень PYY и GLP-1 были обнаружены и в посте и кормили крыс после желудочного шунтирования ^15, которая находится в согласии с выводами, содержащимися в нашем желудке модели обхода ^8,16,27. Повышенные уровни PYY и GLP-1, ранее продемонстрировали увеличение насыщения и сокращения голода в части опосредовано действия на гипоталамус и ядра дугообразные паравентрикулярного ядра, соответственно, ^{29 <}/ Sup>, а также частично за счет блуждающего афферентов ^30. Тем не менее, остается неясным, минуя гормонально-активных двенадцатиперстной кишке и проксимальных тощей кишки или увеличения поставки неразбавленный желчи и непереваренной пищи в дистальной тонкой кишки, или обоих, стимулируют enteroendocrine L-клетки вырабатывать больше кишечник гормонов, таких как PYY и GLP -1 после желудочного шунтирования ^31,32. Действие желудочного шунтирования на уровень гормонов кишечника, систематически рассматривались в другой ^33.

Влияние различных кишечных длины конечностей с точки зрения массы тела у людей до сих пор спорно обсуждался ^34-36, а также есть значительные различия в длине конечностей по доступным моделям обход желудка крыс при длине пищевого конечностей колеблется от 10 см и 50 см, длина конечностей biliopancreatic в диапазоне от 10 см и 40 см, а общий канал между 18 см и 34 см ^15. Относительно короткие сommon канала 25-30 см характеризует нашу модель желудка обхода чего можно предположить, что наблюдаемая потеря массы тела может частично быть результатом всасывания калорий, однако мы считаем, что калорийность всасывания не является основным механизмом снижения массы тела крысы в ​​нашей модели потому что бомба калориметрии продемонстрировали никаких различий в свежих фекальных масс и калорийность между желудочного шунтирования и притворство-контрольными крысами, когда кормили нормальной обезжиренные чау ^6. Тем не менее, другие сообщили о небольшой степени всасывания жиров в желудке модели обхода с более общим каналом (~ 50 см), когда крысам давали высоким содержанием жиров ^7. Таким образом, калорийность мальабсорбции может в большей степени связаны с диетическими содержание жира, чем длины конечности.

На сегодняшний день актуальность блуждающего нерва для тела потеря веса после желудочного шунтирования не полностью понятны. Поэтому мы выборочно отделить и перевязывать левую сосудов желудка в нашем желудке модели обхода по двум причинам: во-первых,для предотвращения крупных кровотечений и, во-вторых, сохранить блуждающего нерва волокна в спинной блуждающего ствола. Нам удалось показать, что это выборочный метод приводит к большим и более стойкое снижение массы тела в желудке крыс обход предположить, что сохранение блуждающего волокон спинного блуждающего ствола во время операции обхода желудка могут быть важны ^27. Это наблюдение согласуется с предыдущими докладами показывает, что удаление блуждающего нерва, ствола мозга, гипоталамуса пути ослабляет неблагоприятное воздействие PYY и GLP-1 от приема пищи ³⁰ и конкретной блуждающего деафферентации отменяет есть тормозящее действие внутрибрюшинно вводили GLP-1 ³⁷ . Однако, в то время как менее вмешательство в живот, предположительно, вызывает меньший ущерб блуждающего нерва, в какой степени блуждающего афферентов повреждены моделями с большей желудка сумке, чем наша модель остается явно испытания ^27.

Желудочного шунтирования связанных Натюрмортlity нашей модели составляет приблизительно 15% ^27. Смертность после операции желудочного шунтирования в крыс редко указывают авторы, но, кажется, в диапазоне от 0 до 35% ^15. В наших руках смертность преимущественно за счет утечки или стеноз желудочно-тощей кишки анастомоз, кровотечение после рассечения желудка, осложнения раны, анестезиологических инцидентов и стойких чрезмерной потерей веса приводит к угрозой животных ^15.

Мы отдаем себе отчет в том, что наша модель желудка обхода осуществляет различные ограничения. Во-первых, хотя мы решительно выступаем за формирование небольшой мешочек желудка, никаких официальных доказательств того, сумка все еще содержит слизистой оболочки желудка еще не принято. Кроме того, фактическое воздействие желудочного размер сумки в одной переменной, не были проанализированы. Во-вторых, высокие технические требования небольшой мешочек техники в нашей модели по сравнению с степлер техника, используемая как другие могут ограничить безрезультатноВозможность исследовательских групп, которые имеют надлежащим образом подготовленных и квалифицированных операторов при их наличии. В-третьих, многие исследовательские группы сосредоточиться на изменениях в гомеостаза глюкозы после желудочного шунтирования. Тем не менее, до сих пор мы не использовали нашу модель для исследования послеоперационного глюкозы или липидного профиля, следовательно, соответствие нашей модели, чтобы ответить на такие вопросы, остается неизвестным. Наконец, большинство наших эксперименты проводились на животных кормили стандартной обезжиренной диете чау.

В заключение, существует большое разнообразие моделей желудка крыс обхода. Несколько компонентов, действующих совместно приводят к наблюдаемому физиологические изменения после желудочного шунтирования, но относительный вклад этих компонентов и их взаимодействия остается неизвестным. Разнообразие в опубликованном крыса модели желудочного шунтирования затрудняет определение конкретных физиологических механизмов, участвующих в массы тела после желудочного шунтирования. Таким образом, есть новые потребности в стандартизации процедурыchieve последовательных и сопоставимых данных. До сих пор нет никаких доказательств того, что любой из моделей лучше.