The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Dutch was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 54.234.231.49, User IP: 54.234.231.49, User IP Hex: 921364273
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).
Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +. Dit protocol wordt gebruikt in combinatie met het protocol Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen gepubliceerd in nummer 7 van Jupiter, voor het zuiveren van T-cellen en andere celtypes te adoptief dragen voor de beeldvorming doeleinden. Hoewel we FACS-analyse niet aan te tonen in dit protocol video, is het sterk aanbevolen om de totale zuiverheid van de geïsoleerde cellen met behulp van de juiste antilichamen via FACS te controleren. Daarnaast tonen we de niet-steriele methode van T-cel isolatie. Als steriele cellen nodig zijn voor uw specifieke end-user applicatie, moet u alle van de aangetoonde procedures in de weefselkweek kap doen onder standaard steriele omstandigheden. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw eigen experimenten!
Lees en volg het protocol opgenomen in de Miltenyi kit of online op http://www.miltenyibiotec.com/ .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +. Hoewel we FACS-analyse niet aan te tonen in dit protocol video, is het sterk aanbevolen om de totale zuiverheid van de geïsoleerde cellen met behulp van de juiste antilichamen via FACS te controleren. Daarnaast tonen we de niet-steriele methode van T-cel isolatie. Als steriele cellen nodig zijn voor uw specifieke end-user applicatie, moet u alle van de aangetoonde procedures in de weefselkweek kap doen onder standaard steriele omstandigheden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
We willen Rebecca Paquett bedanken voor de bereiding van MACS buffer.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| MACS Buffer | Reagent | None | None | Prepare as described by Miltenyi. |
| CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-090-860 | For use with the Miltenyi system. |
| Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Reagent | For use in the preparation of MACS buffer. | ||
| Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish | Other | Corning | 430588 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 70 micron Cell Strainer | Tool | BD Biosciences | 352350 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 6 mL Syringe | Tool | Tyco Healthcare, Covidien | 8881516051 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Reagent | Invitrogen | 14200-075 | For use in RBC lysis. |
| Sterile Water | Reagent | Sigma-Aldrich | W4502 | For use in RBC lysis. |
1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D. & Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A 101, 998-1003 (2004).
2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A. & Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol 179, 2261-9 (2007).
Comment: Typo in water lysis portion of the protocol. Font for microliters translated as mL instead of uL. Use 900 uL of ddH20 and 100 uL of 10x PBS.
1
ReplyPosted by: Melanie M.August 13, 2008, 12:54 AM