The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Swedish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 107.21.156.140, User IP: 107.21.156.140, User IP Hex: 1796578444
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).
Isolering av celler från den primära källan är ett nödvändigt steg i många mer komplexa protokoll. Miltenyi offers kit att isolera celler från flera olika organismer, inklusive människor, icke-mänskliga primater, råtta och som vi beskriver här, möss. Magnetisk pärla-baserade cellseparation tillåter antingen positiv selektion (eller cellbristen) samt negativt urval. Här visar vi negativt urval av orörda eller Na har CD4 + hjälpar T-celler. Med denna standardprotokoll vi normalt renar celler som är ≥ 96% ren CD4 + / CD3 +. Det här protokollet används tillsammans med det protokoll Dissection och 2-Photon Imaging för perifera lymfkörtlar på möss publicerades i nummer 7 av Jove, för rening av T-celler och andra typer cell till adoptively överföring för avbildning ändamål. Även om vi inte visade FACS analys i detta protokoll videon, är det starkt rekommenderas att kontrollera den totala renheten i isolerade celler med hjälp av lämpliga antikroppar via FACS. Dessutom visar vi den icke-steril metod för T-cell isolering. Om sterila celler behövs för just din tillämpning hos slutanvändarna, se till att göra allt de visat förfaranden inom vävnadsodling huven under normala sterila förhållanden. Tack för att titta på och lycka till med dina egna experiment!
Läs och följ protokoll som ingår i Miltenyi kit eller online på http://www.miltenyibiotec.com/ .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Isolering av celler från den primära källan är ett nödvändigt steg i många mer komplexa protokoll. Miltenyi offers kit att isolera celler från flera olika organismer, inklusive människor, icke-mänskliga primater, råtta och som vi beskriver här, möss. Magnetisk pärla-baserade cellseparation tillåter antingen positiv selektion (eller cellbristen) samt negativt urval. Här visar vi negativt urval av orörda eller Na har CD4 + hjälpar T-celler. Med denna standardprotokoll vi normalt renar celler som är ≥ 96% ren CD4 + / CD3 +. Även om vi inte visade FACS analys i detta protokoll videon, är det starkt rekommenderas att kontrollera den totala renheten i isolerade celler med hjälp av lämpliga antikroppar via FACS. Dessutom visar vi den icke-steril metod för T-cell isolering. Om sterila celler behövs för just din tillämpning hos slutanvändarna, se till att göra allt de visat förfaranden inom vävnadsodling huven under normala sterila förhållanden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Vi vill tacka Rebecca Paquett för beredning av MACS buffert.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| MACS Buffer | Reagent | None | None | Prepare as described by Miltenyi. |
| CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-090-860 | For use with the Miltenyi system. |
| Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Reagent | For use in the preparation of MACS buffer. | ||
| Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish | Other | Corning | 430588 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 70 micron Cell Strainer | Tool | BD Biosciences | 352350 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 6 mL Syringe | Tool | Tyco Healthcare, Covidien | 8881516051 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Reagent | Invitrogen | 14200-075 | For use in RBC lysis. |
| Sterile Water | Reagent | Sigma-Aldrich | W4502 | For use in RBC lysis. |
1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D. & Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A 101, 998-1003 (2004).
2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A. & Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol 179, 2261-9 (2007).
Comment: Typo in water lysis portion of the protocol. Font for microliters translated as mL instead of uL. Use 900 uL of ddH20 and 100 uL of 10x PBS.
1
ReplyPosted by: Melanie M.August 13, 2008, 12:54 AM