结直肠癌原位小鼠模型

一，细胞制备

1. 大肠癌细胞生长在文化和收获时subconfluent。
2. 单细胞悬液，准备在磷酸盐缓冲液放在冰上。

二。肿瘤的制备

1. 鼠标与先前成立的皮下大肠肿瘤是安乐死。
2. 皮下肿瘤被删除使用无菌技术，并分为2-3毫米件
3. 肿瘤件保存在磷酸盐缓冲冰生理盐水。

三。鼠标的制备

注：在我们的实验室中，我们使用吸入异氟醚麻醉鼠标，另外，可以使用注射麻醉剂，以达到同样的效果

1. 用脚趾捏麻醉深度评估。应该没有退出与脚趾捏反射。
2. 在这一点上，可给予抗生素。
3. 麻醉的鼠标，这是以前剃光，是正确定位。
4. 腹部是prepped用优碘溶液。
5. 腹部手术部位的披在无菌的方式。

四。剖腹

1. 一个小缺口是在皮肤
2. 腹壁的肌肉组织是掌握和向上抬起
3. 进入腹腔和单个刀片的剪刀是用来推动腹内内容
4. 切口延长至2-3厘米

五，暴露盲肠

1. 盲肠盲目结束袋标识和exteriorized
2. 盲肠是孤立的鼠标使用一个预先切开，用无菌纱布休息
3. 使用温盐水，以保持盲肠湿润

六。盲肠壁细胞注射到

1. 27 G或更细的针是用来盲肠壁注入50μL的细胞体积
2. 取出针
3. 注射部位的检查，以确保不漏
4. 盲肠是返回到腹腔

七。盲肠肿瘤移植到

注：除了注入盲肠壁细胞，另一种方法是移植到盲肠肿瘤

1. 一个8针的数字被放在使用6-0或7-0大中型缝合盲肠
2. 盲肠壁轻微损坏
3. 然后，肿瘤定位片
4. 针绑
5. 盲肠是返回到腹腔

八。鼠标腹壁缝合和恢复

1. 鼠标腹壁使用三个使用中断3-0或4-0大中型缝合针封闭
2. 另外，可以用一个简单的运行针
3. 在这一点上，可给予手术后止痛药和流体静推
4. 鼠标是允许从麻醉中恢复。

注：随着吸入麻醉药，这通常需要30秒

九。结果 - 原发灶和肝转移

（三）原发肿瘤 - 原位（A）和新生血管形成的证据（二）; H＆E染色，肿瘤局部侵袭性

肝转移 - 显示体外（四）

虽然小鼠皮下肿瘤模型很容易的建立和监测，很显然，这种模式无法复制原大肠癌的解剖部位。由于在微环境的差异，皮肤下生长的大肠癌细胞已被证明改变自己的表型和几乎总是失败的^进展和转移1,2。事实上，肿瘤对治疗的反应可以相差很大，取决于是否有癌细胞植入宫外孕（皮下）与^原位位置3。结直肠癌原位小鼠模型，功能癌细胞生长在其自然位置，高保真复制人类疾病。这两种技术来建立这种模式具有独特的优势和劣势。注射到盲肠壁细胞悬液介绍先前已在体外环境中的大肠癌细胞，可以说是同质化。细胞可能具有减少文化中的几个段落后侵入或转移潜能。一块皮下肿瘤移植引入了一个更异构的人口已建立体内的癌症细胞。然而，肿瘤含有间质细胞，并经常有坏死的部分，这可能会影响这个模型的一致性（一菲德勒，个人通信，MD安德森）。从技术角度来看，我们的实验室已经发现，注射到盲肠壁细胞悬液是比较困难的，进行注射后腔内注射和泄漏的风险。有趣的是，直肠癌原位小鼠模型已被描述，不需要鼠标剖腹探查^4。小鼠是麻醉和直肠黏膜脱垂数字压力。体积小的单细胞悬液，大肠癌细胞注入submucosally。小学，侵入性直肠癌的发展早在一个星期注射后在小鼠体内，但是，没有发展的小鼠肝转移和作者没有发表评论肺metasases的频率。