Ортотопическая мышиной модели колоректального рака

I. Подготовка сотовый

1. Колоректальный раковые клетки выращиваются в культуре и собираться после subconfluent.
2. Суспензии отдельных клеток готовят в фосфатном буферном растворе и держал на льду.

II. Опухоль подготовка

1. Мышь с ранее установленной опухоли подкожной колоректального является эвтаназии.
2. Опухоль подкожной удаляется с использованием стерильной техники и разделен на части 2-3 мм
3. Опухоль части хранятся в фосфатном буферном растворе на льду.

III. Мышь Подготовка

Примечание: В нашей лаборатории мы используем вдыхании изофлуран на анестезию мыши; альтернативно, можно использовать инъекционного наркоза, чтобы достичь того же эффекта

1. Глубины анестезии оценивается с помощью ног крайнем случае. Там должно быть никаких снять рефлекс с ног крайнем случае.
2. Антибиотики могут быть даны в этой точке.
3. Наркозом мыши, которая ранее была выбрита, правильно расположен.
4. Живот нацелен с бетадин решение.
5. Брюшной полости и хирургические сайта завернуто в стерильных моды.

IV. Лапаротомия

1. Небольшой ник выполнен в коже
2. Брюшная мускулатура стены схватил и поднял
3. Брюшную полость вводится и одного лезвия ножниц используется для передачи внутрибрюшного содержимого от
4. Разрез продлен до 2-3 см.

В. Воздействие Слепая кишка

1. Слепая кишка с ее слепой мешок окончание выявлены и экстериоризируется
2. Слепая кишка изолированы от остальной части мыши, используя нарезанные, стерильные марлевые
3. Теплые солевые используется для хранения влажного слепой кишки

VI. Введение клеток в слепой кишки стены

1. 27 G или тоньше игла для инъекций 50 мкл объема клеток в слепой кишки стену
2. Игла удаляется
3. Место инъекции осматривается, чтобы убедиться в отсутствии утечки
4. Слепая кишка возвращается в брюшную полость

VII. Трансплантация опухоли на Слепая кишка

Примечание: В дополнение к инъекционным клеток в слепой кишки стены, Альтернативный подход заключается в трансплантации опухоли на слепой кишки

1. Фигура 8 стежка помещается на слепой кишки использованием 6-0 или 7-0 размера шва
2. Слепой кишки стены слегка поврежденных
3. Затем опухоль кусок позиционируется
4. Стежка увязла
5. Слепая кишка возвращается в брюшную полость

VIII. Мышь брюшной Закрытие стены и восстановление

1. Мышь брюшной стенки закрыта с помощью трех прервал стежки использованием 3-0 или 4-0 размера шва
2. Кроме того, можно использовать простой работает стежка
3. Послеоперационные анальгетики и жидкости болюсно может быть дана в этом пункте
4. Мышь, допускается, чтобы оправиться от наркоза.

Примечание: При ингаляционных анестетиков это обычно занимает 30 секунд

IX. Результаты - Первичная опухоль и метастазы печени

Первичные опухоли - показано на месте () и с признаками неоваскуляризации (B), с окрашиванием H & E, опухолях локально инвазивной (С)

Метастазами в печень - показал бывший естественных условиях (D)

Хотя мышиные модели подкожной опухоли легко установить и контролировать, то ясно, что эта модель не может воспроизвести оригинальную анатомических сайт колоректального рака. Из-за разницы в микросреде, толстой кишки раковые клетки растущего под кожей, как было показано изменение их фенотипа и почти всегда терпят неудачу на пути прогресса и метастазировать ^1,2. На самом деле, ответ опухоли на лечение может значительно варьироваться в зависимости от того, раковые клетки имплантируются в внематочной (подкожно) по сравнению с ортотопической месте ^3. Ортотопическая модели мыши колоректального рака, особенностью которой раковые клетки растут в их естественном месте, копировать человеческие заболевания с высокой точностью. Два метода создания этой модели имеют уникальные преимущества и недостатки. Введение суспензии клеток в слепой кишки стены вводит клеток колоректального рака, которые были ранее растет в среду в пробирке и, возможно, являются однородными. Ячейки могут сократили инвазивных или метастатический потенциал после нескольких пассажей в культуре. Трансплантация часть опухоли подкожной вводит более гетерогенной популяции раковых клеток, которые были созданы в естественных условиях. Тем не менее, опухоли содержат стромальных клеток и часто имеют некротические части, которые могут повлиять на соответствие этой модели (личное сообщение, И. Фидлер, MD Anderson). С технической точки зрения, наша лаборатория обнаружили, что инъекции клеточной суспензии в слепой кишки стены труднее и несет риски внутрипросветный инъекции и утечки после инъекции. Интересно, что ортотопической мышиной модели рака прямой кишки был описан, которая не требует мыши лапаротомия ^4. Мыши наркоз и слизистой оболочки ректальной является выпадение с цифровыми давления. Небольшой объем клеток колоректального рака в суспензии отдельных клеток, вводят подслизистый слой. Первичная, инвазивные прямой кишки развиваются в мышах уже через неделю после инъекции, однако ни одна из мышей развиваться метастазы в печень, и авторы не стали комментировать частота легких metasases.