The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Max Plank Institute for Molecular Cell Biology and Genetics, Dresden
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Bucholtz, F. Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology. J. Vis. Exp. (15), e718, doi:10.3791/718 (2008).
Site-specific recombinase tecnologia (SSR) permite a manipulação da estrutura dos genes para explorar a função do gene e se tornou uma ferramenta integrante da biologia molecular. Site-specific recombinases são proteínas que se ligam a seqüências de DNA-alvo distintos. O sistema Cre / lox foi descrita pela primeira vez em bacteriófagos durante a década de 1980. Cre recombinase é uma topoisomerase tipo I que catalisa site-specific recombinação de DNA entre dois loxP (locus de X-over P1) sites. O sistema Cre / lox não requer cofatores. Seqüências distintas LoxP contêm sítios de ligação para recombinases Cre que envolvem uma seqüência núcleo direcional onde a recombinação e rearranjo ocorre. Quando as células contêm sites loxP e expressar a recombinase Cre, um evento de recombinação ocorre. Dupla fita de DNA é cortada em ambos os locais loxP pelo Cre recombinase, reorganizados, e ligados ("tesoura e cola"). Produtos do evento de recombinação depende da orientação relativa das seqüências assimétrica.
Tecnologia SSR é freqüentemente usado como uma ferramenta para explorar a função do gene. Aqui, o gene de interesse é flanqueado com Cre-alvo locais loxP ("floxed"). Os animais são então cruzados com animais expressando a recombinase Cre sob o controle de um promotor de tecidos específicos. Nos tecidos que expressam a recombinase Cre se liga a seqüências alvo e extirpa o gene floxed. Deleção do gene controlado permite a investigação da função dos genes em tecidos específicos e em momentos distintos. Análise da função do gene empregando tecnologia SSR --- mutagênese condicional - tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock-outs onde deleção do gene é freqüentemente letal.
Hi.
The presentation was good and substantial. It would much good if the delicate concepts of selection are also included.
Thank you.
Cheers,
Lopez Gilsinia Gilroy
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ReplyPosted by: Lopez Gilsinia GilroyMay 31, 2008, 5:54 AM