The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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1Medical Sciences Program, McMaster University, 2Centre for Gene Therapeutics, McMaster University, 3Department of Chemical Engineering, University of Waterloo
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Boudreau, J., Koshy, S., Cummings, D., Wan, Y. Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors. J. Vis. Exp. (17), e769, doi:10.3791/769 (2008).
이 프로토콜은 루츠 외에서 맞게되었습니다 1.
수확 및 골수 처리
돌기 세포의 문화
미디어 (3 일) 추가
미디어를 새로 고치려면, 40 NG / ML GM - CSF와 보충 신선한 미디어의 총 볼륨의 절반을 추가합니다.
하나 미디어의 세번째 (6 일)과 성숙을 교체
미디어를 새로 고치려면 신중하게 미디어의 총 볼륨의 3 분의 1을 제거하고 문화 6 일 40 NG / ML GM - CSF와 보충 신선한 DC 미디어와 함께 볼륨을 교체하십시오.
원하는 경우, 돌기 세포는 크린 시토킨 또는 수신자 같은 수용체의 리간드를 사용하여 성숙을 위해 자극 수 있습니다. 동영상에서 DC가 5 NG / ML CPG와 하룻밤 자극에 의해 성숙되었다.
돌기 세포의 수확
DC 문화는 (그림 2) 완료됩니다. 세포 현탁액에서 느슨하게 번호판을 준수 둘 것입니다. 준수 세포는 조직 문화 스크레이퍼와 함께 요리 근근이 살아가고하고 PBS로 rinsing하여 제거할 수 있습니다. 세포의 총수는 주일 동안 문화와 차별화 기간 동안 5-8 배 증가합니다, 따라서 1-1.6 X 10 6 세포 / ML을 수확 예정입니다. 
그림 2
시약
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DC가이 타고난과 적응 면역의 상호 작용 연구에 유용하며, 백신 벡터로 고용하실 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 체외에서 골수를 분리하고 골수양 돌기 세포를 구별하는 단계를 증명하고있다. 문화 시대에 따라, 이들 세포는 미세 모두 자기편으로 자주 dendrites을 가지고 세포, 및 비 점착 성의 원형 세포를 시각하실 수 있습니다. DC가가 더욱 항원과 pulsing에 의해 항원 프레 젠 테이션에 대한 조작이나 크린 시토킨 및 / 또는 수신자 같은 수용체 리간드를 (검토, 길보아 2008 (2) 참조)를 사용 시토킨 생산 및 costimulatory 분자 upregulation 위해 자극 수 있습니다.
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JB는 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC)에서 studentships에 의해 지원됩니다. 이 프로젝트에 대한 지원은 그랜트가 걸레 - 67066, 건강 연구의 캐나다 연구소에 의해 제공되었습니다.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| recombinant murine GM-CSF | Reagent | Peptrotech | 315-03 |
1. Lutz, M.B., Kukutsch, N., Ogilvie, A.L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N. & Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223. 77-92 (1999).
2. Gilboa, E. DC-based cancer vaccines. J. Clin. Invest. 117. 1195-1203 (2007).
Adherent cells are macrophages not DCs. They are >95% F4/80 positive macrophages.
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ReplyPosted by: Bijaya ParidaDecember 12, 2008, 1:21 PM