The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

,

Department of Molecular Biology, Princeton University

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 50.16.17.90, User IP: 50.16.17.90, User IP Hex: 839913818

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

Abstract: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

نقدم هنا تقنية بسيطة وسريعة ومرنة للغاية بالنسبة للتجميد والتصور من خلايا الخميرة تنمو بنسبة epifluorescence المجهري. هي مناسبة أيضا لرؤية هذه التقنية للسكان الخميرة ثابت ، أو الوقت تجارب دورات تصل إلى عشر ساعات في الطول. المجهري بلدي يحقق الميراث اللاجينية في مواضع التزاوج صامتة في البيرة س. هناك نوعان من التزاوج مواضع الصمت ، وHML HMR ، والتي عادة لا يعبر عنه وتغليفها في المغاير. في إسكات sir1 خلفية متحولة يضعف بحيث كل مكان يمكن أن يكون إما في الدولة أو إسكاته وأعرب اللاجينية ، وذلك في عدد السكان ككل هناك مزيج من خلايا جينية مختلفة من الدول على حد سواء وHML HMR. أظهر الفحص المجهري أرى أن هناك أي علاقة بين الدولة واللا جينية للHML HMR في زنزانة منفردة. sir1 خلايا جينية تبديل عشوائيا الدول ، ووضع في مكان إسكات أعرب سابقا ، أو تعبر عن موضع إسكات سابقا. مجنزرة المجهري بلدي دوام الفردية sir1 الخلايا وذريتهم ليسجل وتيرة كل من مفاتيح four اللاجينية ممكن ، وبالتالي على استقرار كل دولة من الدول جينية في خلايا sir1. انظر أيضا شو وآخرون ، مول. خلية 2006.

Protocol: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

  1. يجمد الخلايا للدوام epifluorescence المجهري. يرجى ملاحظة أن هذا البروتوكول هو الوحيد المفيد إذا كان الهدف من عدسات المجهر الخاص يقعون تحت المجهر المرحلة.

  2. خلايا في مكان التركيز المطلوب في وسائل الإعلام السائلة على ساترة طويلة (24x50mm تقريبا)

  3. خفض كتلة آغار من الحجم المطلوب من وسائل الإعلام لوحة الاصطناعية (وهذه أقل وتألق ذاتي) ووضع على الخلايا. مكان جانب كتلة آغار لم يتم التعامل معها بواسطة الملقط في اتصال مع الخلايا.

  4. لدورات زمنية أقصر (حتى 3 ساعات) ، وهذا هو ما يصل مجموعة كافية. إذا الخلايا تتحرك عندما تصور على المجهر ، وانخفاض حجم الخلايا أو زيادة مساحة كتلة آغار.

  5. لدورات زمنية أطول ، ضع قطرة من وسائل الاعلام السائل الطازج على رأس كتلة آغار ، ووضع شريحة زجاجية على رأس كتلة آغار. هذه الشريحة من خلال يقلل تبخر الجزء العلوي من كتلة آغار. إذا رغبت في ذلك ، يمكن أن تكون مختومة حواف كتلة أغار على اتصال مع انزلاق الغطاء مع الفازلين لخفض مزيد من الرطوبة. ولقد استخدمت هذا إعداد للأفلام يصل إلى 9 ساعات طويلة ، مع تقسيم الخلايا بمعدلات نوع البرية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

هذا هو الأسلوب السريع الذي يشل خلايا الخميرة في حين لا يزال يسمح النمو. لقد تابعنا نمو الخميرة لمدة تصل إلى عشر ساعات ، مع عرض الخميرة البرية معدلات تقسيم النوع في كافة مراحل التجربة. علما بأن هذا الإعداد يتطلب أن يكون الهدف عدسة تحت المجهر المرحلة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

Acknowledgements: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

نود أن نشكر بيت هيوستن وشو يوجينيا لما قدموه من مساعدة الجميع.

References: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

1. Xu E.Y., Zawadzki, K.A., and Broach, J.R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell 23, 219-229 (2006)

Ask the Author: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

1 Comment

This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

3

Reply

Posted by: KausikJune 13, 2009, 8:40 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter