The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 50.16.17.90, User IP: 50.16.17.90, User IP Hex: 839913818
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
Unable to load video. Please check your Internet connection and reload this page. If the problem continues, please let us know and we'll try to help.
An unexpected error occurred. Please check your Internet connection and reload this page. If the problem continues, please let us know and we'll try to help.
نقدم هنا تقنية بسيطة وسريعة ومرنة للغاية بالنسبة للتجميد والتصور من خلايا الخميرة تنمو بنسبة epifluorescence المجهري. هي مناسبة أيضا لرؤية هذه التقنية للسكان الخميرة ثابت ، أو الوقت تجارب دورات تصل إلى عشر ساعات في الطول. المجهري بلدي يحقق الميراث اللاجينية في مواضع التزاوج صامتة في البيرة س. هناك نوعان من التزاوج مواضع الصمت ، وHML HMR ، والتي عادة لا يعبر عنه وتغليفها في المغاير. في إسكات sir1 خلفية متحولة يضعف بحيث كل مكان يمكن أن يكون إما في الدولة أو إسكاته وأعرب اللاجينية ، وذلك في عدد السكان ككل هناك مزيج من خلايا جينية مختلفة من الدول على حد سواء وHML HMR. أظهر الفحص المجهري أرى أن هناك أي علاقة بين الدولة واللا جينية للHML HMR في زنزانة منفردة. sir1 خلايا جينية تبديل عشوائيا الدول ، ووضع في مكان إسكات أعرب سابقا ، أو تعبر عن موضع إسكات سابقا. مجنزرة المجهري بلدي دوام الفردية sir1 الخلايا وذريتهم ليسجل وتيرة كل من مفاتيح four اللاجينية ممكن ، وبالتالي على استقرار كل دولة من الدول جينية في خلايا sir1. انظر أيضا شو وآخرون ، مول. خلية 2006.
يجمد الخلايا للدوام epifluorescence المجهري. يرجى ملاحظة أن هذا البروتوكول هو الوحيد المفيد إذا كان الهدف من عدسات المجهر الخاص يقعون تحت المجهر المرحلة.
خلايا في مكان التركيز المطلوب في وسائل الإعلام السائلة على ساترة طويلة (24x50mm تقريبا)
خفض كتلة آغار من الحجم المطلوب من وسائل الإعلام لوحة الاصطناعية (وهذه أقل وتألق ذاتي) ووضع على الخلايا. مكان جانب كتلة آغار لم يتم التعامل معها بواسطة الملقط في اتصال مع الخلايا.
لدورات زمنية أقصر (حتى 3 ساعات) ، وهذا هو ما يصل مجموعة كافية. إذا الخلايا تتحرك عندما تصور على المجهر ، وانخفاض حجم الخلايا أو زيادة مساحة كتلة آغار.
لدورات زمنية أطول ، ضع قطرة من وسائل الاعلام السائل الطازج على رأس كتلة آغار ، ووضع شريحة زجاجية على رأس كتلة آغار. هذه الشريحة من خلال يقلل تبخر الجزء العلوي من كتلة آغار. إذا رغبت في ذلك ، يمكن أن تكون مختومة حواف كتلة أغار على اتصال مع انزلاق الغطاء مع الفازلين لخفض مزيد من الرطوبة. ولقد استخدمت هذا إعداد للأفلام يصل إلى 9 ساعات طويلة ، مع تقسيم الخلايا بمعدلات نوع البرية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
هذا هو الأسلوب السريع الذي يشل خلايا الخميرة في حين لا يزال يسمح النمو. لقد تابعنا نمو الخميرة لمدة تصل إلى عشر ساعات ، مع عرض الخميرة البرية معدلات تقسيم النوع في كافة مراحل التجربة. علما بأن هذا الإعداد يتطلب أن يكون الهدف عدسة تحت المجهر المرحلة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?
3
ReplyPosted by: KausikJune 13, 2009, 8:40 AM