ライブ固定化酵母細胞の可視化のための高速手法

1. 時間の経過落射蛍光顕微鏡のための固定化細胞。顕微鏡の対物レンズが顕微鏡ステージの下にある場合は、このプロトコルにのみ、有効であることに注意してください。
   
   
2. 長いカバースリップ上に液体培地で所望の濃度で、場所細胞（およそ24x50mm）
   
   
3. 合成培地プレート（これらは低い自家蛍光を持っている）と細胞上の場所から目的のサイズの寒天ブロックをカット。細胞と接触してピンセットで処理されない寒天ブロックの側に置きます。
   
   
4. 短い時間のコース（最大3時間）の場合は、このセットは、最大で十分です。顕微鏡で可視化するときに細胞が移動している場合は、セルまたは寒天ブロックの増加領域の体積を減少させる。
   
   
5. 長い時間のコースの場合は、寒天ブロックの上に新鮮な液体培地のドロップを配置し、寒天ブロックの上にスライドガラスを配置。このスライドは、寒天ブロックの上部から蒸発が減少します。必要に応じて、カバースリップと接触寒天ブロックのエッジがさらに水分を減らすためにワセリンでシールすることができます。私は、野生型の速度で分裂する細胞で、長い9時間に映画のためにこのセットを使い切っている。

これはまだ成長を可能にしながら酵母細胞を固定化する急速な技術です。我々は、酵母は、実験を通して、野生型の分裂速度を表示すると、最大10時間まで酵母の成長を続けている。このセットアップは、顕微鏡ステージの下に対物レンズが必要であることに注意してください。