Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Swedish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

,

Department of Molecular Biology, Princeton University

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.234.126.92, User IP: 54.234.126.92, User IP Hex: 921337436

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

Abstract: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

Vi presenterar här en enkel, snabb och extremt flexibel teknik för immobilisering och visualisering av växande jästceller av epifluorescence mikroskopi. Tekniken passar lika bra för visualisering av statisk jäst populationer eller tidsförlopp experiment upp till tio timmar långa. Min mikroskopi undersöker epigenetiska arv vid den tysta parning loci i S. cerevisiae. Det finns två tysta parning loci, HML och HMR, som normalt inte uttrycks som de är förpackade i heterochromatin. I sir1 muterade bakgrunden ljuddämpning är försvagad så att varje lokus antingen kan vara i uttrycks eller tystade epigenetiska tillstånd, så i befolkningen som helhet finns en blandning av celler av olika epigenetiska stater för både HML och HMR. Min mikroskopi visade att det inte finns något samband mellan den epigenetiska tillstånd HML och HMR i en enskild cell. sir1 celler växla stokastiskt epigenetiska tillstånd, inrättande tysta vid ett tidigare uttryckt locus eller uttrycker en tidigare tystade lokus. Min tid naturligtvis mikroskopi spåras enskilda sir1 celler och deras avkomma att göra poäng frekvensen i varje av de fyra möjliga epigenetiska strömbrytare, och därmed stabiliteten i varje epigenetiska stater i sir1 celler. Se även Xu et al. Mol. Cell 2006.

Protocol: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

  1. Immobiliserade celler för tidsförloppet epifluorescence mikroskopi. Observera att detta protokoll är bara användbar om syftet linserna på din mikroskop är under mikroskop scenen.

  2. Placera celler vid önskad koncentration i flytande medier på en lång täckglas (ungefär 24x50mm)

  3. Skär en agar-block av önskad storlek från ett syntetiskt media platta (dessa har lägre autofluorescens) och placera över cellerna. Placera sidan av agar blockerar inte hanteras av pincett i kontakt med cellerna.

  4. För kortare kurser (upp till 3 timmar), är detta inrättas tillräckligt. Om celler går när visualiseras på mikroskop, minska volymen av celler eller öka område på agar blocket.

  5. För längre tidsförlopp, placera en droppe av färska flytande medier på toppen av agar blocket, och placera en glasskiva ovanpå agar blocket. Denna bild minskar avdunstningen genom toppen av agar blocket. Om så önskas kan kanterna på agar blocket i kontakt med täckglas förseglas med vaselin för att ytterligare minska fukt. Jag har använt detta inrättat för filmer upp till 9 timmar lång, med cellerna att dela på vild typ priser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

Detta är en snabb teknik som immobilizes jästceller samtidigt tillåta tillväxt. Vi har följt jäst tillväxt för upp till tio timmar, med jästen som visar vilda priser typ divisionen under hela försöksperioden. Observera att denna inställning kräver att objektivet ligga under mikroskop scenen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

Acknowledgements: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

Vi vill tacka Pete Houston och Eugenia Xu för all hjälp.

References: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

1. Xu E.Y., Zawadzki, K.A., and Broach, J.R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell 23, 219-229 (2006)

Ask the Author: En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

1 Comment

This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

3

Reply

Posted by: KausikJune 13, 2009, 8:40 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter