Dissectie van larvale CNS in Drosophila melanogaster

1. Ontleden 3 ^e instar larven, waardoor CNS aan de cuticula. Plaats in een 1.5 ml buis.
2. Fix in PBS (1x) met 2% formaldehyde gedurende 40 min met schommelen. ; Gebruik 250ul voor elke 5-10 ontleed CNS.
3. Verwijder de formaldehyde en in het kort drie keer wassen met PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Gebruik een fijn getrokken Pasteur pipet om het verlies van weefsel te voorkomen.
4. Blokkeer niet-specifieke eiwit binding sites en permeabilize celmembranen door het incuberen van weefsel 1-8 uur in PBST + 5% BSA, rocken bij 4 ° C.
5. Incubeer in primair antilichaam verdund in PBST + 5% BSA rocken bij 4 ° C gedurende de nacht. Optimale antilichaamverdunning zal variëren voor verschillende antilichamen.
6. Spoel 3x in PBST gevolgd door twee 30min wassen bij 4 ° C.
7. Incubeer in secundair antilichaam verdund in PBST + 5% BSA gedurende 1-3 uur rocken bij 4 ° C. Spoel 3x in PBST gevolgd door twee 30min wassen bij 4 ° C. Als de secundaire is geconjugeerd aan een lichtgevoelige stof, wikkel de buis in aluminiumfolie.
8. Ontleden weefsel verder (indien nodig) en op dia's.

Deze video laat zien hoe ontleden de CNS uit derde instar Drosophila larven. Na de dissectie, kan het centrale zenuwstelsel worden gekleurd met behulp van een standaard protocol immunohistochemie. Op dit moment, veel is nog onbekend hoe de volwassen zenuwstelsel is en opgewekt als hoe het slaat en stuurt de gegevens. Studies van de zich ontwikkelende Drosophila larven CNS moeten versterken onze kennis van het zenuwstelsel bedrading en functie.

Drosophila larven vertonen een aantal stereotpyed gedrag, zoals een reactie op omgevingsfactoren. Hoe worden deze gedragingen geleerd en opgeslagen in het zenuwstelsel? Studies van het zenuwstelsel tijdens de larvale ontwikkeling zal helpen om deze vraag te beantwoorden.

In dit stadium van Drosophila ontwikkeling, is het organisme bereidt zich voor de grote morfologische veranderingen die optreden tijdens de verpopping ondergaan. Gedurende deze tijd, enorme verbouwing van het neuromusculaire systeem zich voordoet als de organsim overgangen van een kruipende worm tot een volwassen vlieg. Het zal interessant zijn om te bepalen hoe neuronen veranderen tijdens deze fase van ontwikkeling en als het hetzelfde type gedrag kan worden waargenomen in de neuronen van hogere dieren.