Dissection z larw CNS na Drosophila melanogaster

1. Dissect 3 larwy ^III stadium, pozostawiając CNS dołączone do naskórka. Miejsce w 1,5 ml probówce.
2. Fix w PBS (1x) zawierający 2% formaldehydu do 40 min z biegunach. ; Użyj 250ul za co 5-10 CNS rozcięta.
3. Usuń formaldehydu i krótko przemyć 3 razy PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Użyj drobno wyciągnął pipety Pasteura, aby uniknąć utraty tkanki.
4. Blok niespecyficzne białka wiążącego strony i permeabilize błon komórkowych przez inkubację tkanki 08/01 godzin w PBST + 5% BSA, kołysanie w temperaturze 4 ° C.
5. Inkubować w pierwszym przeciwciałem rozcieńczony w PBST + 5% BSA kołysanie w temperaturze 4 ° C przez noc. Optymalnego rozcieńczenia przeciwciał będzie różny dla różnych przeciwciał.
6. Spłukać 3x w PBST przez dwie 30min zmywa w temperaturze 4 ° C.
7. Inkubować w drugim przeciwciałem rozcieńczony w PBST + 5% BSA na 1-3 godziny kołysania w 4 ° C. Spłukać 3x w PBST przez dwie 30min zmywa w temperaturze 4 ° C. Jeśli drugi jest sprzężony wrażliwy na światło związek, zawinąć w folię aluminiową rurę.
8. Dissect tkanki dalej (w razie potrzeby) i zamontować na slajdach.

Ten film pokazuje, jak wnikliwie CNS z państw larw Drosophila stadium. Po sekcji zwłok, OUN może być barwiony przy użyciu standardowego protokołu immunohistochemiczne. Obecnie wiele jest jeszcze znany, jak dla dorosłych układu nerwowego jest generowany, a także w jaki sposób przechowuje i przesyła informacje. Badania rozwoju Drosophila CNS larwy powinny poszerzyć naszą wiedzę na okablowanie systemu nerwowego i funkcji.

Larw Drosophila wykazują szereg stereotpyed zachowania, takie jak reakcja na bodźce środowiska. Jak dowiedział się tych zachowań i przechowywane w układzie nerwowym? Badania układu nerwowego w trakcie rozwoju larwalnego pomoże odpowiedzieć na to pytanie.

Na tym etapie rozwoju Drosophila, organizm przygotowuje się do poddania się ogromne zmiany morfologiczne, które występują podczas przepoczwarzenie. W tym czasie ogromne przebudowy układu nerwowo-mięśniowego występuje jako organsim przejścia z maggot wpełza dorosłych latać. To będzie interesujące, aby określić jak neurony zmiany na tym etapie rozwoju, a jeśli ten sam typ zachowania można zaobserwować w neuronach wyższych zwierząt.