Dissekering av Larvernas CNS i Drosophila melanogaster

1. Dissekera 3: ^e INSTAR larver, lämnar CNS knuten till nagelbanden. Placera i ett 1,5 ml rör.
2. Fix i PBS (1x) innehållande 2% formaldehyd i 40 min med gungande. ; Använd 250ul för varje dissekeras 5-10 CNS.
3. Ta bort formaldehyd och kort tvätta tre gånger med PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Använd ett fint dras pasteurpipett att undvika förlust av vävnad.
4. Blockera icke-specifik proteinbindning webbplatser och permeabilize cellmembranen genom att inkubera vävnaden 1-8 timmar i PBST + 5% BSA, gunga vid 4 ° C.
5. Inkubera i primära antikroppen späds i PBST + 5% BSA gunga vid 4 ° C över natten. Optimal antikropp utspädning kommer att variera för olika antikroppar.
6. Skölj 3x PBST följt av två 30min tvättar vid 4 ° C.
7. Inkubera i sekundära antikroppen späds i PBST + 5% BSA för 1-3 timmar gunga vid 4 ° C. Skölj 3x PBST följt av två 30min tvättar vid 4 ° C. Om den sekundära är konjugerat till en ljuskänslig förening, linda röret i aluminiumfolie.
8. Dissekera vävnad vidare (om det behövs) och montera på bilder.

Denna video visar hur du dissekera CNS från tredje INSTAR Drosophila larver. Efter dissektion kan CNS färgas med en vanlig immunohistokemi protokoll. För närvarande mycket är fortfarande okänt om hur vuxna nervsystemet skapas samt hur den lagrar och överför information. Studier av utvecklingen av Drosophila larver CNS bör öka vår kunskap om nervsystemets ledningar och funktion.

Drosophila larver uppvisar ett antal stereotpyed beteenden, som ett svar på miljö-signaler. Hur är dessa beteenden lärda och lagras i nervsystemet? Studier av nervsystemet under larvernas utveckling bidrar till att besvara denna fråga.

I detta skede i Drosophila utveckling, organismens förbereder sig för att genomgå den stora morfologiska förändringar som sker under pupation. Under denna tid sker stora omdaning av den neuromuskulära systemet som organsim övergångar från en krypande maggot till en vuxen fluga. Det ska bli intressant att se hur nervceller förändras under detta skede av utvecklingen, och om samma typ av beteenden kan observeras i de nervceller i högre djur.