Deshielo de un stock congelado:

1. Antes de descongelar las células de colores, asegurarse de que la placa MEF ya ha preparado adecuadamente es plateado y en buenas condiciones. NO trate de utilizar una placa de menos deseables, o uno que tiene más de tres días. Se recomienda que antes de la etiqueta de todos los tubos cónicos y los pozos que se utiliza.
   
   
2. Pre-cálidos tonos medios de comunicación a 37 ° C. HUES medios alícuota en un tubo estéril cónica para cada línea. Quitar HUES vial / s de -80 e inmediatamente sumergir la parte inferior del tubo en un baño de agua 37 ° C. Se debe tener unos 45-60 segundos antes de que las células son del 80% descongelado (pequeña porción de helado a la izquierda).
   
   
3. Llevar rápidamente el tubo a la campana de flujo laminar, rocíe con el 70% de alcohol, y suavemente la transferencia de células a la de pre-calentado los medios de comunicación. Girar el tubo, retire el material, y resuspender en un volumen adecuado de agua dulce, previamente calentada medios tonos.
   
   
4. Aspirar fuera de los medios de comunicación MEF como de muchos pozos que se le deshielo en. Rápidamente, alícuota precalentado medios HUES de nuevo en cada pocillo de la placa, teniendo cuidado de no molestar a los adjuntos MEFs. Ajuste el plato a un lado de la campana. Al igual que con MEFs, mejores resultados se obtienen si las gotas se distribuyen uniformemente sobre la placa. Cuidadosamente la placa de retorno a una incubadora a 37 ° C durante la noche para permitir que las células tonalidades para sembrar el MEFs. Cambiar los medios de comunicación ~ 48 horas después de la descongelación, en sustitución de los medios de comunicación HUES fresco.

En este vídeo, se muestra cómo nuestro laboratorio de rutina establece un HUES madre embrionarias humanas de cultivo de células de una masa congelada. Este proceso es susceptible de uso general en cualquier célula de mamífero si es congelado en una solución de DMSO. Descongelación eficiente es esencial para establecer una nueva cultura de las células de tonalidades de un stock congelado, y es importante para la consistencia experimental.