Ontdooi een bevroren voorraad:

1. Voordat ontdooien TINTEN cellen, ervoor zorgen dat de MEF plaat die je al hebt voorbereid correct is verguld en in goede conditie. Probeer NIET een minder dan wenselijk plaat, of een die ouder is dan drie dagen te gebruiken. Het wordt aanbevolen om pre-label alle conische buizen en putten worden gebruikt.
   
   
2. Pre-warme tinten media tot 37 ° C. Aliquot TINTEN media in een steriele conische buis voor elke lijn. Verwijder TINTEN flacon / s van -80 en onmiddellijk onder water de onderste helft van de buis in een 37 ° C waterbad. Het duurt ongeveer 45-60 seconden voordat de cellen zijn 80% ontdooid (klein links diepvries gedeelte).
   
   
3. Snel de buis te brengen om de laminaire flow kap, spray neer met 70% alcohol, en zachtjes cellen over te dragen aan de van de voorverwarmde media. Draai de buis, verwijder de media, en resuspendeer in een geschikt volume van verse, voorverwarmde TINTEN media.
   
   
4. Aspireren uit de MEF media van zoveel putten als je wordt ontdooien in. Snel, aliquot voorverwarmde TINTEN media terug in elk putje van de plaat, zorg dat u de bijgevoegde MEFs verstoren. Zet de plaat in de motorkap. Net als bij MEF, zijn beste resultaat verkregen als de druppels zijn gelijkmatig verdeeld over de plaat. Voorzichtig de plaat 's nachts terug te keren naar een 37 ° C incubator, zodat de tinten cellen om het zaad van de MEFs. Verandering media ~ 48 uur na ontdooien, ter vervanging van verse TINTEN media.

In deze video laten we zien hoe ons laboratorium routinematig een TINTEN menselijke embryonale stamcellen cultuur voorziet van een bevroren voorraad. Dit proces is vatbaar voor algemeen gebruik met een zoogdiercellen als bevroren in een DMSO oplossing. Efficiënte ontdooien is essentieel voor de oprichting van een nieuwe cultuur van tinten cellen van een ingevroren voorraad, en is belangrijk voor experimentele consistentie.