The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Hebrew was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
1Department of Pediatric Oncology, Dana Farber Cancer Institute, 2Department of Neurobiology, Harvard Medical School
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 54.224.75.101, User IP: 54.224.75.101, User IP Hex: 920669029
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
F. Pazyra-Murphy, M., A. Segal, R. Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures. J. Vis. Exp. (20), e951, doi:10.3791/951 (2008).
נוירונים להאריך תהליכים axonal כי הם רחוקים בגוף התא innervate רקמות היעד, שם היעד הנגזרות גורמי גדילה נדרשים להישרדות תפקוד עצבי ו. Neurotrophins נדרשים במיוחד כדי לשמור על בידול של הישרדות innervating עצב סנסורי אבל השאלה כיצד אלה יעד הנגזרות neurotrophins לתקשר אל גוף התא של הנוירונים innervating כבר על שטח של מחקר פעיל במשך 30 שנים. המודל המקובל בדרך כלל של כמה אותות neurotrophin להגיע לגוף התא מציעה כי איתות endosomes לשאת אות retrogradely לאורך האקסון. כדי ללמוד התחבורה מדרדר, מערכת התרבות פותחה במקור על ידי רוברט Campenot, שבו גופי התא מבודדים האקסונים שלהם. הטכניקה של הכנת אלה מחולקים לתאי עבור culturing נוירונים משחזר את הגירוי החושי סלקטיבית של מסופי נוירון המתרחשת בעקבות שחרור vivo של יעד הנגזרות neurotrophins. אירועים איתות מדרדר הדורשים ארוכי טווח תחבורה תלויה microtubule מדרדר להיות השלכות חשובות בטיפול בהפרעות ניוון עצבי.
הכנה של ריאגנטים
הגדרת לתאי מחולקים (להתחיל את התהליך הזה 1-2 ימים לפני הניתוח)
נוירונים DRG שמירה בתרבויות מחולקים
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
בסרטון הזה, אנחנו הוכיחו כיצד להכין ולתחזק לתאי מחולקים לשימוש נוירונים DRG culturing. בוצע כהלכה, מערכת זו מאפשרת הפרדה בין גוף התא של האקסון כדי ללמוד על המנגנונים שבאמצעותם neurotrophins אותות מעבר אקסונים ארוכים. מאז יש בידוד fluidic בין התאים, היא מאפשרת גירוי טיפול סלקטיבי או של תא אחד ללא התאים האחרים להיות מושפע. תרבויות מחולקים קאמרית יכול לתמוך סוגי תאים אחרים, כולל נוירונים אוהדת בגרעיני צוואר הרחם מעולה, הנוירונים הגנגליון ברשתית, ועל נוירונים בקליפת המוח. הבנה מרחבית של הולכת אותות neurotrophin עשויה לספק תובנות לתוך הרומן טיפולים של הפרעות ניווניות. הפרעות ניווניות שונות, כולל מחלת אלצהיימר, מחלת הנטינגטון ומחלות הנוירון המוטורי, המשויכים פגמים תחבורה axonal. מחקרים שנעשו לאחרונה השתמשו בתאי microfluidic במקום אלה מחולקים לתאי. חדרי microfluidic 4,5 יש כמה יתרונות לניתוח הדמיה.
מחקרים קודמים בחנו את היכולת של תרבויות אלה כדי למנוע דיפוזיה בין האקסון לגוף התא תא 1,3,6. זה יכול בקלות להיות נבדק על ידי הוספת ריכוזים נמוכים של צבע כגון trypan כחול לתא אחד בלבד, ולחפש דיפוזיה של צבען. לא צריך להיות דיפוזיה קטנה או לא גלוי בתוך 24 שעות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
ברצוננו להודות קתרינה Cosker וסטפני Courchesne לדיונים מועילים.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher Scientific | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | PeproTech Inc | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | PeproTech Inc | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher Scientific | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma-Aldrich | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher Scientific | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-7035 |
1. Campenot, RB. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology 58 302-7, (1979).
2. Watson, FL., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience 4 981-88, (2001).
3. Heerssen, HM., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience 7 596-603, (2004).
4. Taylor, AM., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods 2 599-605, (2005).
5. Park JW., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4 2128-36, (2006).
6. Ure DR., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience 4 1282-90, (1997)
Hi
I have just watch your presentaion on the Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures and it was very impressive. I am intersted in the function of the methylcellulose, does it provide a space through which the axons can pass, do the cell bodies settle on the collagen surface.
Regards
Paul
1
ReplyPosted by: Paul MillnsNovember 19, 2008, 7:27 AM