The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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1Department of Pediatric Oncology, Dana Farber Cancer Institute, 2Department of Neurobiology, Harvard Medical School
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F. Pazyra-Murphy, M., A. Segal, R. Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures. J. Vis. Exp. (20), e951, doi:10.3791/951 (2008).
뉴런은 멀리 대상 - 파생 성장 요소의 연결을 생존과 기능에 필요한 대상 조직을 신경을 분포시키다하는 세포 본체에서 제거됩니다 axonal 프로세스를 확장합니다. Neurotrophins은 특히 감각 뉴런을 innervating의 생존과 분화를 유지하기 위해 필요하지만, 이러한 목표 - 파생 neurotrophins은 innervating 뉴런의 세포 기관에 의사 소통 방법의 문제는 30 년 넘게 적극적인 연구 영역을했습니다. neurotrophin 신호가 세포 신체에 도달하는 방법 중 가장 일반적으로 인정 모델은 신호가 축삭을 따라 retrogradely이 신호를 운반 endosomes 것을 제안합니다. 역행 수송을 연구하기 위해, 문화 시스템은 원래 세포 시신은 axons으로부터 격리하는 로버트 Campenot에 의해 고안되었다. culturing 감각 뉴런의 recapitulates 대상 - 파생 neurotrophins의 생체내 다음 릴리스에서 발생하는 신경 세포 단말기의 선택적 자극에 대해 이러한 compartmented 회의소 준비의 기술. 장거리 미세 소관에 의존 역행 수송을 필요로 역행 신호 이벤트가 neurodegenerative 장애의 치료에 중요한 의미를했습니다.
시약의 준비
(해부하기 전에 1-2일이 과정을 시작합니다) compartmented 회의소 설정
compartmented 문화의 유지 DRG 뉴런
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이 비디오에서는, 우리는 culturing의 DRG의 뉴런에 사용하기 위해 compartmented 회의소를 준비하고 유지하는 방법을 증명하고있다. 제대로 완료,이 시스템은 neurotrophins 오래 axons에 걸쳐 신호를하는 메커니즘을 연구하기 위해 축삭에서 세포 기관의 분리 수 있습니다. 구획 사이에 유체 절연이 있기 때문에, 그것은 다른 구획에 영향을받지 않고 한 구역의 선택적 자극이나 치료 수 있습니다. Compartmented 챔버 문화는 우수 자궁 경부 신경, 망막 신경절의 뉴런과 뉴런에서 대뇌 피질의 교감 신경 등 다른 세포 유형을 지원할 수 있습니다. neurotrophin 신호 전달의 공간적 이해 neurodegenerative 장애의 치료에 새로운 통찰력을 제공할 수 있습니다. 알츠하이머 병, 헌팅턴의 질환과 운동 신경 질환을 포함한 몇몇 neurodegenerative 장애는, axonal 교통의 결함과 관련 있습니다. 최근 연구 microfluidic 챔버 대신 이러한 compartmented 회의소를 사용했습니다. 4,5 microfluidic 챔버 스는 이미지 분석을위한 몇 가지 장점이 있습니다.
이전 연구는 축삭과 세포 바디 구획 1,3,6 사이의 확산을 방지하기 위해 이들 문화의 능력을 테스트했습니다. 이것은 쉽게 하나의 구획 이러한 trypan 파란색으로 염색의 낮은 농도를 추가하고, 염료의 확산 찾는하여 테스트할 수 있습니다. 24 시간 이내에 볼 수 거의 또는 전혀 보급이 있어야합니다.
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우리는 도움이 토론 Katharina Cosker과 스테파니 코세인 감사하고 싶습니다.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher Scientific | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | PeproTech Inc | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | PeproTech Inc | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher Scientific | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma-Aldrich | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher Scientific | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-7035 |
1. Campenot, RB. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology 58 302-7, (1979).
2. Watson, FL., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience 4 981-88, (2001).
3. Heerssen, HM., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience 7 596-603, (2004).
4. Taylor, AM., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods 2 599-605, (2005).
5. Park JW., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4 2128-36, (2006).
6. Ure DR., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience 4 1282-90, (1997)
Hi
I have just watch your presentaion on the Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures and it was very impressive. I am intersted in the function of the methylcellulose, does it provide a space through which the axons can pass, do the cell bodies settle on the collagen surface.
Regards
Paul
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ReplyPosted by: Paul MillnsNovember 19, 2008, 7:27 AM