La recogida y medición de mediadores inflamatorios y nociceptivos en las heridas quirúrgicas

Colección bioquímicos mediador inflamatorio y nociceptivo

1. El On-Q ® PainBuster ® sistema de alivio del dolor se inserta en la capa subcutánea por el equipo quirúrgico justo antes de cierre de la herida. El sistema proporciona continuamente una solución salina normal (o anestesia local) por vía subcutánea en la herida a una velocidad de 2 ml / h.
2. Una llave de tres vías se incorpora a este sistema para permitir la aspiración de exudado de la herida en los puntos de tiempo especificado.
3. En los puntos de tiempo especificado por el protocolo (por ejemplo, 1, 6, 24 y 48 horas después del parto por cesárea), 1 ml de exudado de la herida se retira en una taza de polietileno conteniendo 30 l de inhibidor de la proteasa.
4. Al mismo tiempo, los intervalos de 10 ml de sangre se recoge en un tubo superior verde de recogida de sangre que contiene heparina de litio. 300 l de inhibidor de la proteasa se añade a las muestras de sangre.
5. Dentro de 1 hora de la recolección, las muestras se colocan en hielo y se centrifuga a 3000 rpm durante 10 minutos.
6. El suero y supranate herida se elimina y el lugar en un tubo de microcentrífuga estándar y se almacenan a -20 ° C.

Ensayo de análisis

1. Una vez que las muestras sean tomadas, que se descongelan y se analizan al mismo tiempo.
2. Las citoquinas son medidos usando A17-multiplex placa cordón inmunoensayo matriz. Multiplex inmuno-ensayo tecnología permite ensayar hasta 100 analitos en las muestras de fluidos corporales como de pequeño volumen de 50 l, y producir resultados comparables con los obtenidos por ELISA. Esta placa es capaz de medir la interleucina 1ß (IL-1ß), la interleucina 2 (IL-2), la interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5), la interleucina 6 (IL-6), la interleuquina 7 (IL -7), la interleucina 8 (IL-8), la interleuquina (IL-10), la interleuquina 12 (IL-12), la interleuquina 13 (IL-13), la interleuquina 17 (IL-17), factor de necrosis tumoral α (TNF) , el interferón α (INFα), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), granulocitos y macrófagos factor estimulante de colonias (GM-CSF), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1) y la proteína inflamatoria de los macrófagos 1 (MIP-1β).
3. Factor de crecimiento nervioso se mide con el anticuerpo NGF DY256 añadiéndolo a la placa de 17 complejos con ayuda del kit de amina Bio-Plex de acoplamiento.
4. Cada medición se realiza por duplicado y de acuerdo a las especificaciones del fabricante. Las curvas de calibración para cada analito se generan mediante el uso de los analitos de referencia facilitada por los fabricantes en concentraciones de 0.20, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml más un cero estándar (solución salina normal solamente). Las curvas de calibración se incluyen en cada carrera y las concentraciones de la muestra se calculó con el software de Administrador de Bio-Plex.
5. La prostaglandina E2 y la sustancia P se miden con una gran sensibilidad kits de ELISA se lleva a cabo cada ensayo por duplicado, de acuerdo a las especificaciones del fabricante.
   
   
   
   
   Figura 1: Los niveles de exudado y el suero de diversas citoquinas pro-y anti-inflamatorios (interleucina 1ß (IL-1ß), la interleucina 2 (IL-2), la interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5), la interleucina 6 (IL-6), la interleuquina 7 (IL-7), la interleucina 8 (IL-8), la interleuquina (IL-10), la interleuquina 12 (IL-12), la interleuquina 13 (IL-13), la interleuquina 17 (IL -17), factor de necrosis tumoral α (TNF-α), interferón γ (INFγ), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), granulocitos y macrófagos factor estimulante de colonias (GM-CSF), la proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1 ) y la proteína inflamatoria de los macrófagos 1 (MIP-1ß), factor de crecimiento nervioso (NGF), la prostaglandina E2 (PG-E2) y la sustancia P (SP) niveles (pg / mL) medidos al inicio, 6 y 24 horas post-parto por cesárea .

El On-Q ® PainBuster Dolor ® Sistema de seguridad deben ser insertados a través de toda la incisión en la capa subcutánea justo antes de cierre de la herida. Esto facilita la aspiración a través de la llave de tres vías en los intervalos de tiempo especificados. El On-Q ® sistema de forma continua proporciona una solución salina normal por vía subcutánea en la herida a una velocidad de 2 ml / h. Esto evita que el catéter de la coagulación y mejora la fiabilidad del sistema para producir muestras de exudado. Si la aspiración de exudado es difícil (aproximadamente el 5% de los casos), considere cambiar la posición del sujeto (por ejemplo, sentarse al paciente o acostada a plano), presionando suavemente sobre la herida, con un 0,5-1ml de solución salina normal o retirar el catéter 1-2 cm.