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Microfluidic Chips Controlled with Elastomeric Microvalve Arrays

Miniaturized microfluidic systems provide simple and effective solutions for low-cost point-of-care diagnostics and high-throughput biomedical assays.  ...

University of Washington

&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x79EF;&#x6781;&#x53C2;&#x52A0;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x3002;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#x662F;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x62CD;&#x6444;&#x57F9;&#x517B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76AE;&#x5C42;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F7F;&#x7528; DAF &#x8C03;&#x9891; (4-amino-5-methylamino-2&#39;,7&#39;-difluorofluorescein &#x918B;&#x9178;) &#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x751F;&#x7406;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC; Ca2 +-&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5728;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x7531;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x4F9B;&#x4F53;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5916;&#x90E8; Ca2 + &#x7684;&#x6D41;&#x5165;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x52A0;&#x6C14;&#x4E0E; Ca2 + &#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x5B58;&#x50A8;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x64CD;&#x7EB5;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x76D1;&#x89C6; Ca2 + &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x548C;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x5B58;&#x50A8;&#x3002;&#x6587;&#x5316;&#x4E0E; mag-&#x8367;&#x5149;-4 &#x548C; X-rhod-1 &#x5DEE;&#x5F02;&#x52A0;&#x8F7D;&#x5185;&#x90E8;&#x5B58;&#x50A8;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x88AB; coloaded&#x3002;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6E38;&#x79BB;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4ECE; IP3 &#x4F9D;&#x8D56; Ca2 + &#x4ECE;&#x91CA;&#x653E;&#x5185;&#x90E8;&#x5B58;&#x50A8;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; mag-&#x8367;&#x5149;-4 &#x540C;&#x65F6;&#x51CF;&#x5C11;&#x548C;&#x589E;&#x52A0; X-rhod-1 &#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x76D1;&#x89C6;&#x5B58;&#x50A8;&#x91CD;&#x586B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF; mag-&#x8367;&#x5149;-4 &#x8367;&#x5149; ATP &#x6458;&#x9664;&#x540E;&#x7684;&#x6062;&#x590D;&#x3002;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x65F6;&#x7531; 2-phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide &#x7684;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x6E05;&#x9053;&#x592B;&#x6216;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;-&#x5355;&#x7532;&#x916F; l-&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x8367;&#x5149;&#x6062;&#x590D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4FC3;&#x4F7F; Ca2 + &#x5728;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x53D1;&#x5C04;&#x673A;&#x5BFC;&#x81F4; Ca2 +-&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x523A;&#x6FC0; Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x5C31;&#x662F;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;Ca2 + &#x8D1F;&#x8D23;&#x52A0;&#x6C14;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x5B58;&#x50A8;&#x3002;

&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9499;&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x3001; &#x8C03;&#x8282;&#x52A0;&#x6C14;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x5546;&#x5E97;&#x3002;

The roles of nitric oxide are primarily undefined in astrocytes, cells that are active partners in synaptic transmission. Because nitric oxide synthases are present in astrocytes, we imaged the formation of nitric oxide in cultured murine cortical astrocytes using DAF-FM (4-amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate). We demonstrated that physiological concentrations of ATP induced a Ca2+-dependent production of nitric oxide. We then investigated the roles of nitric oxide in astrocytic Ca2+ signaling by exogenous application of a nitric oxide donor and found that nitric oxide induced an influx of external Ca2+. Because these observations raise the possibility that nitric oxide-dependent Ca2+ influx could lead to the refilling of internal stores with Ca2+, we directly monitored the Ca2+ levels of the cytosol and of internal stores while manipulating nitric oxide. Cultures were coloaded with mag-fluo-4 and X-rhod-1 to differentially load the internal stores and cytosol, respectively. ATP induced a cytosolic increase in Ca2+ that results from the IP3-dependent release of Ca2+ from internal stores, detected as a simultaneous reduction in mag-fluo-4 and an increase in X-rhod-1 fluorescence. To monitor store refilling, we measured the recovery of mag-fluo-4 fluorescence after removal of ATP. When nitric oxide signaling was blocked by the nitric oxide scavenger 2-phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide or by the nitric oxide synthase inhibitor NG-monomethyl-l-arginine, fluorescence recovery was significantly reduced. These data suggest that transmitters that induce Ca2+ signaling in astrocytes lead to the Ca2+-dependent synthesis of nitric oxide. This in turn stimulates a Ca2+ influx pathway that is, in part, responsible for the refilling of internal Ca2+ stores.

A calcium-induced calcium influx factor, nitric oxide, modulates the refilling of calcium stores in astrocytes.

Le r&ocirc;le du monoxyde d&#39;azote est principalement non d&eacute;fini dans les astrocytes, des cellules qui sont des partenaires actifs dans la transmission synaptique. Parce que l&#39;oxyde nitrique synth&eacute;tases sont pr&eacute;sents dans les astrocytes, nous avons mis en image la formation d&#39;oxyde nitrique dans les astrocytes corticaux murins cultiv&eacute;es, &agrave; l&#39;aide de DAF-FM (diac&eacute;tate de 4-amino-5-methylamino-2&#39;,7&#39;-difluorofluorescein). Nous avons d&eacute;montr&eacute; que des concentrations physiologiques de l&#39;ATP induit une Ca2 +-d&eacute;pendante production d&#39;oxyde nitrique. Ensuite, nous avons examin&eacute; les r&ocirc;les de l&#39;oxyde nitrique dans les astrocytes Ca2 + signalisation par application exog&egrave;ne d&#39;un donneur de monoxyde d&#39;azote et trouv&eacute; que l&#39;oxyde nitrique induit un afflux de Ca2 + externe. Parce que ces observations soul&egrave;vent la possibilit&eacute; que l&#39;influx de Ca2 + d&eacute;pendante de l&#39;oxyde nitrique pourrait conduire &agrave; la recharge des r&eacute;serves internes de Ca2 +, nous avons mesur&eacute; directement le taux de Ca2 + du cytosol et des r&eacute;serves internes lors de la manipulation de l&#39;oxyde nitrique. Cultures ont &eacute;t&eacute; coloaded avec mag-fluo-4 et X-Sasa-1 diff&eacute;rentiellement charger les r&eacute;serves internes et le cytosol, respectivement. ATP a provoqu&eacute; une augmentation cytosolique Ca2 + qui r&eacute;sulte de la lib&eacute;ration de IP3-d&eacute;pendante du Ca2 + des r&eacute;serves internes, d&eacute;tect&eacute;e comme une r&eacute;duction simultan&eacute;e de mag-fluo-4 et une augmentation de la fluorescence X-Sasa-1. Pour contr&ocirc;ler le remplissage du magasin, nous avons mesur&eacute; la r&eacute;cup&eacute;ration de la fluorescence de mag-fluo-4 apr&egrave;s le retrait de l&#39;ATP. Lors de la signalisation de l&#39;oxyde nitrique a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par le capteur de l&#39;oxyde nitrique 2-phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide ou de l&#39;inhibiteur de la monoxyde d&#39;azote synthase NG-monom&eacute;thyl-l-arginine, r&eacute;cup&eacute;ration de fluorescence a &eacute;t&eacute; significativement r&eacute;duite. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les &eacute;metteurs qui induisent la signalisation du Ca2 + dans les astrocytes conduisent &agrave; la Ca2 +-d&eacute;pendante synth&egrave;se du monoxyde d&#39;azote. Cela stimule &agrave; son tour une voie d&#39;afflux de Ca2 + qui est, en partie, responsable pour le remplissage d&#39;interne Ca2 + stocke.

Un facteur d&#39;influx calcique induite par le calcium, oxyde nitrique, module le remplissage des r&eacute;serves de calcium dans les astrocytes.

Ein Calcium-induzierte Calcium-Einstrom Faktor, Stickstoffmonoxid, moduliert das Nachf&#xFC;llen von Calcium-Filialen in Astrozyten.

I ruoli di ossido nitrico sono principalmente definiti negli astrociti, le cellule che sono partner attivi nella trasmissione sinaptica. Poich&eacute; l&#39;ossido nitrico synthases sono presenti negli astrociti, abbiamo ripreso la formazione di ossido nitrico in cultured murini astrociti corticali usando DAF-FM (4-amino-5-methylamino-2&#39;,7&#39;-difluorofluorescein Diacetato). Abbiamo dimostrato che concentrazioni fisiologiche di ATP induce un Ca2 +-dipendente dalla produzione di ossido nitrico. Poi abbiamo indagato il ruolo dell&#39;ossido nitrico in astrocitari Ca2 + segnalazione di applicazione esogena di un donatore di ossido nitrico e trovato che l&#39;ossido nitrico indotto da un afflusso di Ca2 + esterno. Perch&eacute; queste osservazioni aumentare la possibilit&agrave; che potrebbe portare afflusso Ca2 + ossido nitrico-dipendente per il rifornimento dei negozi interni con Ca2 +, abbiamo monitorato direttamente i livelli Ca2 + nel citosol e negozi interni durante la manipolazione di ossido nitrico. Le culture sono state coloaded con mag-fluo-4 e 1-X-rhod differenzialmente caricare i negozi interni e citosol, rispettivamente. ATP induce un aumento citosolico in Ca2 + che risulta dal rilascio di IP3-dipendenti di Ca2 + dai depositi interni, riconosciuto come una simultanea riduzione mag-fluo-4 e un aumento della fluorescenza X-rhod-1. Per monitorare il negozio rabbocco, abbiamo misurato il recupero di mag-fluo-4 fluorescenza dopo la rimozione del trifosfato di Adenosina. Quando l&#39;ossido nitrico di segnalazione &egrave; stato bloccato tramite l&#39;ossido nitrico scavenger 2-phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide o l&#39;ossido nitrico sintasi inhibitor NG-monometil-l-arginina, recupero di fluorescenza &egrave; stato ridotto significativamente. Questi dati suggeriscono che i trasmettitori che inducono Ca2 + segnalazione negli astrociti portano a Ca2 +-dipendente dalla sintesi di ossido nitrico. Questo a sua volta stimola un percorso di afflusso di Ca2 +, che &egrave;, in parte, responsabile per il riempimento dell&#39;interno Ca2 + negozi.

Un fattore di afflusso di calcio indotto da calcio, l&#39;ossido nitrico, modula il reintegro dei depositi di calcio negli astrociti.

&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x4E3B;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;DAF-FM &#xFF08;4-amino-5-methylamino-2&#39;,7&#39;-difluorofluorescein &#x4E8C;&#x9162;&#x9178;) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x57F9;&#x990A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E; ATP &#x8A98;&#x5C0E; ca 2 + &#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;-&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3002;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; ca 2 + &#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7A92;&#x7D20;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x8A98;&#x8D77;&#x306E;&#x5916;&#x90E8; ca 2 + &#x6D41;&#x5165;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; ca 2 + &#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3068; ca 2 + &#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x5E97;&#x8217;&#x3092;&#x88DC;&#x5145;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x76F4;&#x63A5;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x306E; ca 2 + &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x5E97;&#x8217;&#x306E;&#x76E3;&#x8996;&#x3002;&#x6587;&#x5316;&#x30DE;&#x30B0; fluo 4 &#x3068; X-&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-1 &#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x305F;&#x3081;&#x306B; coloaded &#x3044;&#x305F;&#x3002;ATP &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x540C;&#x6642;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x30DE;&#x30B0; fluo 4 &#x3068; X-&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-1 &#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x5E97;&#x8217;&#x304B;&#x3089;&#x306E; ca 2 + IP3 &#x4F9D;&#x5B58;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089; ca 2 + &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x88DC;&#x5145;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30B0; fluo 4 &#x86CD;&#x5149; ATP &#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2-Phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide &#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; NG-&#x30E2;&#x30CE;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-l-&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x56DE;&#x5FA9;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092; ca 2 + &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30BF; ca 2 + &#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;-&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B; ca 2 + &#x6D41;&#x5165;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3064;&#x307E;&#x308A;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;, &#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x88DC;&#x5145;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53; ca 2 + &#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x4FC2;&#x6570;, &#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;, &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5E97;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x88DC;&#x5145;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC774;&#xB2E4;, &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xD65C;&#xC131; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xC140; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;. &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; synthases &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAD50;&#xC591; murine &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC774;&#xB2E4; DAF-FM (4-amino-5-methylamino-2&#39;,7&#39;-difluorofluorescein diacetate)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB18D;&#xB3C4; ATP&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Ca2 + &#xC2DC;&#xC5F0;-&#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; exogenous &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xB97C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638; astrocytic Ca2 +&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xC678;&#xBD80; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xC720;&#xC785; Ca2 + &#xB0B4;&#xBD80; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC44;&#xC6B0;&#xB294; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;, &#xC778;&#xC0C1; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C;&#xB97C; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Ca2 + &#xB808;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xB294; cytosol&#xC758; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;. &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xAE30;-fluo-4&#xC640; X-&#xB85C;&#xB4DC;-1 &#xCD08;&#xC744; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC01;&#xAC01; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC0C1;&#xC810;&#xACFC; cytosol, &#xCC28;&#xB3D9; &#xB85C;&#xB4DC; coloaded &#xD588;&#xB2E4;. ATP&#xC5D0; Ca2 + &#xD0C4; &#xCC3D;-fluo-4&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xB85C;&#xB4DC; x1 &#xD615;&#xAD11; &#xC99D;&#xAC00; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC0C1;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 +&#xC758; i p 3 &#xC885;&#xC18D; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xACB0;&#xACFC;&#xC778; cytosolic &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xBC1C;. &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC44;&#xC6B0;&#xB294;, ATP&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xD6C4; &#xB9E4;&#xAE30;-fluo-4 &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2-Phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; &#xD3D0;&#xD488; &#xB610;&#xB294; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; synthase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; NG-monomethyl-l-&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC2E0;&#xD638; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD615;&#xAD11; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC5D0; Ca2 + &#xB9AC;&#xB4DC; &#xC81C;&#xC548;-&#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xD569;&#xC131;. &#xC774; &#xCC28;&#xB840; &#xC989;, &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC790;&#xADF9;, Ca2 + &#xC0C1;&#xC810; &#xB0B4;&#xBD80; &#xCDA9; &#xC9C4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;.

&#xCE7C;&#xC298;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785; &#xC694;&#xC18C;, &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;, &#xCE7C;&#xC298; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC44;&#xC6B0;&#xB294; &#xBCC0;&#xC870;.

El papel del &oacute;xido n&iacute;trico es principalmente indefinido en los astrocitos, c&eacute;lulas que son socios activos en la transmisi&oacute;n sin&aacute;ptica. Porque el &oacute;xido n&iacute;trico Sintasas est&aacute;n presentes en los astrocitos, nos va a examinar la formaci&oacute;n de &oacute;xido n&iacute;trico en los astrocitos corticales murinos cultivados utilizando DAF-FM (diacetato de 4-amino-5-methylamino-2&#39;,7&#39;-difluorofluorescein). Hemos demostrado que concentraciones fisiol&oacute;gicas de ATP inducida a Ca2 +-dependiente producci&oacute;n de &oacute;xido n&iacute;trico. Luego investigamos el papel del &oacute;xido n&iacute;trico astroc&iacute;ticos Ca2 + por aplicaci&oacute;n ex&oacute;gena de un donante de &oacute;xido n&iacute;trico y encontr&oacute; que el &oacute;xido n&iacute;trico inducido por un influjo de Ca2 + externos. Porque estas observaciones aumentar la posibilidad de que el &oacute;xido n&iacute;trico-dependiente Ca2 + afluencia podr&iacute;a conducir a la recarga de almacenes internos con Ca2 +, directamente supervisamos los Ca2 + niveles del citosol y de interiores tiendas mientras manipula el &oacute;xido n&iacute;trico. Culturas fueron coloaded con mag-fluo-4 y X-rhod-1 cargar diferencialmente las tiendas internas y citosol, respectivamente. ATP indujo un aumento citos&oacute;lico Ca2 + que resulta de la liberaci&oacute;n de IP3-dependiente de Ca2 + de almacenes internos, detectado como una reducci&oacute;n simult&aacute;nea en mag-fluo-4 y un incremento en la fluorescencia X-rhod-1. Para supervisar la tienda rellenado, medimos la recuperaci&oacute;n de fluorescencia de mag-fluo-4 despu&eacute;s del retiro del ATP. Cuando el &oacute;xido n&iacute;trico se&ntilde;alizaci&oacute;n fue bloqueado por el limpiador de &oacute;xido n&iacute;trico 2-phenyl-4,4,5,5-ketramethyl-imidazoline-1-oxyl-3-oxide o por el inhibidor de la sintetasa de &oacute;xido n&iacute;trico NG-monometil-l-arginina, recuperaci&oacute;n de fluorescencia se redujo significativamente. Estos datos sugieren que los transmisores que inducen Ca2 + se&ntilde;alizaci&oacute;n en astrocitos llevan al Ca2 +-dependiente s&iacute;ntesis de &oacute;xido n&iacute;trico. Esto a su vez estimula una v&iacute;a de entrada de Ca2 + es, en parte, responsable de la recarga de internos Ca2 + tiendas.

Un factor de influjo de calcio inducida por calcio, &oacute;xido n&iacute;trico, modula la recarga de tiendas de calcio en los astrocitos.

&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x51B3;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x9700;&#x8981;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x91CA;&#x653E;&#x673A;&#x7406;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x533A;&#x57DF;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x57F9;&#x517B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x56CA;&#x6CE1;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x586B;&#x5145;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x819C;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x591A;&#x91CD; pcr &#x53CD;&#x5411;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x5176;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x5185;&#x65B0;&#x9C9C;&#x5206;&#x79BB;&#x6D77;&#x9A6C;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x7535;&#x955C;&#x6280;&#x672F;&#x6F14;&#x793A; VGLUT1 &#x5728;&#x6D77;&#x9A6C;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x9499;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x9677;&#x9631;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684; synaptobrevin II&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x5F62;&#x6210;&#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E3A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x6C34;&#x75B1;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x5BB9;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E;&#x589E;&#x52A0;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x5BB9;&#xFF0C;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x4E0E;&#x91CD;&#x5408;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x539F;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5FC5;&#x8981;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x9012;&#x8D28;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x586B;&#x5145;&#x6C34;&#x6CE1;&#x6CE1;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x56CA;&#x6CE1;&#x6216;&#x878D;&#x5408;&#x76F8;&#x5173;&#x673A;&#x5236;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;

&#x878D;&#x5408;&#x6709;&#x5173;&#x91CA;&#x653E;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Although cell culture studies have implicated the presence of vesicle proteins in mediating the release of glutamate from astrocytes, definitive proof requires the identification of the glutamate release mechanism and the localization of this mechanism in astrocytes at synaptic locales. In cultured murine astrocytes we show an array of vesicle proteins, including SNARE proteins, and vesicular glutamate transporters that are required to fill vesicles with glutamate. Using immunocytochemistry and single-cell multiplex reverse transcription-PCR we demonstrate the presence of these proteins and their transcripts within astrocytes freshly isolated from the hippocampus. Moreover, immunoelectron microscopy demonstrates the presence of VGLUT1 in processes of astrocytes of the hippocampus. To determine whether calcium-dependent glutamate release is mediated by exocytosis, we expressed the SNARE motif of synaptobrevin II to prevent the formation of SNARE complexes, which reduces glutamate release from astrocytes. To further determine whether vesicular exocytosis mediates calcium-dependent glutamate release from astrocytes, we performed whole cell capacitance measurements from individual astrocytes and demonstrate an increase in whole cell capacitance, coincident with glutamate release. Together, these data allow us to conclude that astrocytes in situ express vesicle proteins necessary for filling vesicles with the chemical transmitter glutamate and that astrocytes release glutamate through a vesicle- or fusion-related mechanism.

Fusion-related release of glutamate from astrocytes.

Bien que les &eacute;tudes sur la culture cellulaire ont mis en cause la pr&eacute;sence de prot&eacute;ines des v&eacute;sicules dans la m&eacute;diation de la lib&eacute;ration de glutamate par les astrocytes, preuve d&eacute;finitive n&eacute;cessite l&#39;identification du m&eacute;canisme du glutamate et la localisation de ce m&eacute;canisme dans les astrocytes &agrave; locales synaptiques. Dans les astrocytes de souris cultiv&eacute;es, nous montrons un tableau des prot&eacute;ines de la v&eacute;sicule, y compris des prot&eacute;ines SNARE et transporteurs de glutamate v&eacute;siculaire qui sont tenus de remplir des v&eacute;sicules de glutamate. &Agrave; l&#39;aide d&#39;immunocytochimie et monocellulaires reverse transcription-PCR multiplex que nous d&eacute;montrent la pr&eacute;sence de ces prot&eacute;ines et leurs transcriptions dans les astrocytes fra&icirc;chement isol&eacute;es de l&#39;hippocampe. En outre, immunomicroscopie &eacute;lectronique d&eacute;montre la pr&eacute;sence de VGLUT1 dans les processus d&#39;astrocytes de l&#39;hippocampe. Pour d&eacute;terminer si la lib&eacute;ration de glutamate de calcium-d&eacute;pendante est m&eacute;di&eacute;e par exocytose, nous avons exprim&eacute; le motif SNARE synaptobr&eacute;vine II pour &eacute;viter la formation de complexes de caisse claire, qui r&eacute;duit la lib&eacute;ration de glutamate d&#39;astrocytes. Pour d&eacute;terminer que si l&#39;exocytose v&eacute;siculaire intervient dans la lib&eacute;ration de glutamate de calcium-d&eacute;pendante des astrocytes, nous r&eacute;alis&eacute;e mesure de capacit&eacute; de cellules enti&egrave;res d&#39;astrocytes individuels et d&eacute;montrent une augmentation de la capacit&eacute; de cellules enti&egrave;res, qui co&iuml;ncide avec la lib&eacute;ration de glutamate. Ensemble, ces donn&eacute;es nous permettent de conclure que les astrocytes in situs expriment des prot&eacute;ines v&eacute;sicule n&eacute;cessaires pour le remplissage des v&eacute;sicules avec le glutamate transmetteur chimique et que les astrocytes lib&egrave;rent glutamate par un m&eacute;canisme li&eacute; &agrave; la v&eacute;sicule ou &agrave; la fusion.

Li&eacute;es &agrave; la fusion lib&eacute;ration du glutamate astrocytes.

Zusammenhang mit der Kernfusion Freisetzung von Glutamat aus Astrozyten.

Sebbene gli studi di coltura delle cellule hanno implicato la presenza delle proteine della vescicola nel mediare il rilascio di glutammato da astrociti, prova definitiva richiede l&#39;identificazione del meccanismo di rilascio di glutammato e la localizzazione di questo meccanismo negli astrociti a synaptic locales. Negli astrociti murini colti mostriamo una matrice di proteine vescicola, tra cui le proteine SNARE e i trasportatori di glutammato vescicolare che sono necessari per riempire le vescicole con glutammato. Usando immunocitochimica e a cella singola inversa trascrizione-PCR della multisala che ci dimostrano la presenza di queste proteine e loro trascrizioni entro gli astrociti appena isolati dall&#39;ippocampo. Inoltre, immunoelectron microscopy dimostra la presenza di VGLUT1 nei processi di astrociti dell&#39;ippocampo. Per determinare se il rilascio di glutammato di calcio-dipendente &egrave; mediato da esocitosi, abbiamo espresso il motivo SNARE della sinaptobrevina II per prevenire la formazione di complessi SNARE, che riduce il rilascio di glutammato da astrociti. Per determinare ulteriormente se esocitosi vescicolare da intermediario rilascio di glutammato di calcio-dipendente da astrociti, abbiamo eseguito le misure di capacit&agrave; cella intera da astrociti individuali e dimostrano un aumento della capacitanza intera cellula, coincida con il rilascio di glutammato. Insieme, questi dati ci permettono di concludere che gli astrociti in situ esprimono proteine vescicola necessarie per il riempimento delle vescicole con il trasmettitore chimico glutammato e che gli astrociti rilasciano glutammato attraverso un meccanismo relativi vescicola o fusione.

Rilascio correlati a fusione di glutammato da astrociti.

&#x57F9;&#x990A;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x30ED;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; SNARE &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x57CB;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x591A;&#x91CD;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199; - &#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x305F;&#x3066;&#x5B64;&#x7ACB;&#x304B;&#x3089;&#x6D77;&#x99AC;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059; PCR &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;, &#x514D;&#x75AB;&#x96FB;&#x9855;&#x6D77;&#x99AC;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; VGLUT1 &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x306F;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; &#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D3;&#x30F3; &#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x4F4E;&#x6E1B; SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B; II &#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x5168;&#x4F53;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D1;&#x30B7;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x5168;&#x4F53;&#x30BB;&#x30EB;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; in situ &#x5316;&#x5B66;&#x7269;&#x8CEA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x57CB;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6838;&#x878D;&#x5408;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;

&#x6838;&#x878D;&#x5408;&#x95A2;&#x9023;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

&#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xC758; &#xC11D;&#xBC29;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xAE30; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB294;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB85C;&#xCF00;&#xC77C;&#xC5D0; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD50;&#xC591; murine &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB4F1; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xC640; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC791;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xAE30; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Immunocytochemistry &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xB2E4;&#xC911; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC804;&#xC0AC;-PCR&#xC774;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4; &#xD574; &#xB9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC13; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB610;&#xD55C;, immunoelectron &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xB2E4; &#xD574; &#xB9C8;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; vglut1&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; exocytosis &#xC911;&#xC7AC; &#xC5EC;&#xBD80; &#xD655;&#xC778; synaptobrevin &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; glutamate &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; II&#xC758; &#xC62C; &#xBB34; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;. &#xCD94;&#xAC00; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; exocytosis &#xC911;&#xC7AC; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815;, &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC774;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC628; &#xC140; &#xC815;&#xC804; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4;, &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC774;&#xB2E4; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAE30; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD654;&#xD559; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xC640; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC791;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD45C;&#xD604; &#xC774;&#xB2E4; &#xAE30; &#xB610;&#xB294; &#xC735;&#xD569; &#xAD00;&#xB828; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xB97C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xACB0;&#xB860; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC735;&#xD569; &#xAD00;&#xB828; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC;&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC774;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Aunque estudios en cultivos celulares han implicado la presencia de prote&iacute;nas de la ves&iacute;cula en mediar la liberaci&oacute;n de glutamato de astrocitos, prueba definitiva requiere la identificaci&oacute;n de los mecanismo de liberaci&oacute;n de glutamato y la localizaci&oacute;n de este mecanismo en los astrocitos en locales sin&aacute;pticas. En astrocitos murinos cultivados se muestra una matriz de prote&iacute;nas de la ves&iacute;cula, incluyendo prote&iacute;nas SNARE y transportadores de glutamato vesicular que se requieren para llenar las ves&iacute;culas con glutamato. Mediante inmunocitoqu&iacute;mica y unicelulares inversa transcripci&oacute;n-PCR m&uacute;ltiplex que demostramos la presencia de estas prote&iacute;nas y sus transcripciones en astrocitos reci&eacute;n aislados de hipocampo. Por otra parte, la microscopia de immunoelectron demuestra la presencia de VGLUT1 en procesos de astrocitos del hipocampo. Para determinar si la liberaci&oacute;n de glutamato dependiente de calcio est&aacute; mediada por exocitosis, expresamos el motivo de la trampa de synaptobrevin II para evitar la formaci&oacute;n de complejos de la trampa, que reduce la liberaci&oacute;n de glutamato de astrocitos. Para determinar que si vesicular exocitosis interviene en la liberaci&oacute;n de glutamato de calcio dependiente de astrocitos, realizamos mediciones de capacitancia de c&eacute;lulas enteras de astrocitos individuales y demuestran un aumento en la capacidad de c&eacute;lulas enteras, coincidente con la liberaci&oacute;n de glutamato. Juntos, estos datos nos permiten concluir que los astrocitos in situ expresan prote&iacute;nas de ves&iacute;cula necesarias para el llenado de las ves&iacute;culas con el transmisor qu&iacute;mico glutamato y que los astrocitos liberan glutamato a trav&eacute;s de un mecanismo relacionado con la fusi&oacute;n o la ves&iacute;cula.

Relacionadas con la fusi&oacute;n liberaci&oacute;n de glutamato de astrocitos.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5F7B;&#x5E95;&#x6539;&#x53D8;&#x4E86;&#x5047;&#x8BBE;&#x68C0;&#x9A8C;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x836F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x548C;&#x6BD2;&#x7406;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x6807;&#x51C6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x65B9;&#x6CD5;--&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x7EC4;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5747;&#x5300;&#x6D41;&#x4F53;&#x4ECB;&#x8D28; &mdash; &mdash; &#x4E2D;&#x5927;&#x4EBA;&#x53E3;&#x6D78;&#x6CE1;&#x7684;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x5730;&#x9650;&#x5236;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6;&#x6765;&#x770B; &#xFF08;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x88AB;&#x5305;&#x56F4;&#x590D;&#x6742;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#xFF09; &#x548C;&#x4ECE;&#x5B9E;&#x7528;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6;&#x6765;&#x770B;&#xFF0C;&#xFF08;&#x5411;&#x4E0A;&#x6269;&#x5C55;&#x6D41;&#x4F53;&#x5904;&#x7406;&#x6B65;&#x9AA4;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4F53;&#x5916;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7814;&#x7A76;&#x6781;&#x5176;&#x6602;&#x8D35;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#xFF09;&#x3002;&#x5FAE;&#x7EC6;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6280;&#x672F;&#x5DF2;&#x4F7F;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x5458;&#x80FD;&#x591F;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3001; &#x4E0E;&#x6D4B;&#x5FAE;&#x4EEA;&#x63A7;&#x5236;&#x3001; &#x751F;&#x5316;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x57FA;&#x6750;&#x3001; &#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x7684;&#x6210;&#x5206;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x76F8;&#x90BB;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x6982;&#x5FF5;&#x4E0A;&#x5F88;&#x9002;&#x5408;&#x53D1;&#x5C55;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x4F4E;&#x6210;&#x672C;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5FAE;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x5404;&#x79CD;&#x5FAE;&#x7EC6;&#x52A0;&#x5DE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x5404;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x751F;&#x7269;&#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#x7684;&#xFF1A; &#x5FAE;&#x7EC6;&#x52A0;&#x5DE5;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;

The ability to culture cells in vitro has revolutionized hypothesis testing in basic cell and molecular biology research and has become a standard methodology in drug screening and toxicology assays. However, the traditional cell culture methodology--consisting essentially of the immersion of a large population of cells in a homogeneous fluid medium--has become increasingly limiting, both from a fundamental point of view (cells in vivo are surrounded by complex spatiotemporal microenvironments) and from a practical perspective (scaling up the number of fluid handling steps and cell manipulations for high-throughput studies in vitro is prohibitively expensive). Microfabrication technologies have enabled researchers to design, with micrometer control, the biochemical composition and topology of the substrate, the medium composition, as well as the type of neighboring cells surrounding the microenvironment of the cell. In addition, microtechnology is conceptually well suited for the development of fast, low-cost in vitro systems that allow for high-throughput culturing and analysis of cells under large numbers of conditions. Here we review a variety of applications of microfabrication in cell culture studies, with an emphasis on the biology of various cell types.

Biology on a chip: microfabrication for studying the behavior of cultured cells.

La capacit&#xE9; de cellules en culture in vitro a r&#xE9;volutionn&#xE9; le test d&#x26;#39;hypoth&#xE8;se dans la cellule de base et la recherche en biologie mol&#xE9;culaire et est devenu une m&#xE9;thode standard dans le d&#xE9;pistage des drogues et des tests de toxicologie. Cependant, la m&#xE9;thodologie de cellules de la culture traditionnelle - consistant essentiellement en l&#x26;#39;immersion d&#x26;#39;une grande population de cellules dans un milieu fluide homog&#xE8;ne - est devenue de plus en plus de limiter, tant d&#x26;#39;un point de vue fondamental (cellules in vivo sont entour&#xE9;s par des micro-environnements complexes spatio-temporelles) et &#xE0; partir d&#x26;#39;un point de vue pratique (intensification du nombre d&#x26;#39;&#xE9;tapes de traitement des fluides et des manipulations de cellules &#xE0; haut d&#xE9;bit pour des &#xE9;tudes in vitro est prohibitif). Technologies de microfabrication ont permis aux chercheurs de concevoir, avec le contr&#xF4;le du microm&#xE8;tre, la composition biochimique et de la topologie du substrat, la composition du milieu, ainsi que le type de cellules voisines entourant le microenvironnement de la cellule. En outre, la microtechnique est conceptuellement bien adapt&#xE9; pour le d&#xE9;veloppement de rapide, &#xE0; faible co&#xFB;t dans les syst&#xE8;mes in vitro qui permettent &#xE0; haut d&#xE9;bit culture et l&#x26;#39;analyse des cellules sous un grand nombre de conditions. Ici nous passons en revue une vari&#xE9;t&#xE9; d&#x26;#39;applications de microfabrication dans les &#xE9;tudes de culture cellulaire, en mettant l&#x26;#39;accent sur la biologie des divers types de cellules.

Biologie sur une puce: microfabrication pour &#xE9;tudier le comportement des cellules en culture

Biologie auf einem Chip: Mikrofabrikation f&#xFC;r das Studium des Verhaltens von kultivierten Zellen.

La capacit&agrave; di cellule di coltura in vitro ha rivoluzionato ipotesi test nella ricerca di base delle cellule e biologia molecolare ed &egrave; diventata una metodologia standard di screening di stupefacenti e dosaggi di tossicologia. Tuttavia, la cella tradizionale cultura metodologia - costituiti essenzialmente di immersione di una grande popolazione di cellule in un mezzo omogeneo e fluido - &egrave; diventato sempre pi&ugrave; limitanti, sia da un punto di vista fondamentale (cellule in vivo sono circondate da complessi microambienti spatiotemporal) sia dal punto di vista pratico (scalabilit&agrave; del numero di fluido gestione passaggi e manipolazioni di cella per high-throughput studi in vitro &egrave; proibitivamente costoso). Microfabbricazione tecnologie hanno permesso ai ricercatori di progettare, con controllo di micrometro, la composizione biochimica e topologia del substrato, la composizione media, cos&igrave; come il tipo di cellule adiacenti che circonda il microambiente della cella. Inoltre, la microtecnologia &egrave; concettualmente adatto per lo sviluppo di sistemi in vitro veloci e a basso costo che permettono per la coltura di alto-rendimento e l&#39;analisi delle cellule sotto un gran numero di condizioni. Qui esaminiamo una variet&agrave; di applicazioni di microfabbricazione negli studi di coltura cellulare, con un&#39;enfasi sulla biologia di vari tipi di cellule.

Biologia su un chip: microfabrication per studiare il comportamento delle cellule in coltura.

in vitro&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x691C;&#x5B9A;&#x306B;&#x9769;&#x547D;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5275;&#x85AC;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6BD2;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x65B9;&#x6CD5; - &#x5747;&#x8CEA;&#x6DB2;&#x4F53;&#x57F9;&#x5730;&#x4E2D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x6D78;&#x304B;&#x3089;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x306B;&#x306F; - &#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x5236;&#x9650;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#xFF08;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x56F2;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF09;&#x3068;&#x5B9F;&#x7528;&#x7684;&#x306A;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#xFF08;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6D41;&#x4F53;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x6CD5;&#x5916;&#x306B;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x3067;&#x3059;&#xFF09;&#x3002;&#x5FAE;&#x7D30;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7D44;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x3001;&#x57F9;&#x5730;&#x7D44;&#x6210;&#x3001;&#x306A;&#x3089;&#x3073;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x96A3;&#x63A5;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6982;&#x5FF5;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x57F9;&#x990A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;in vitro&#x306E;&#x7CFB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x3067;&#x4F4E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x91CD;&#x70B9;&#x3092;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x5FAE;&#x7D30;&#x52A0;&#x5DE5;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xCCB4; &#xC678; &#xBC30;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xC218; &#xAC00;&#xC124; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xD601;&#xBA85;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xADF9;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC900; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC140; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;-&#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xBB38;&#xD654; &#xADE0;&#xC9C8; &#xC561;&#xCCB4; &#xB9E4;&#xCCB4;-&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD070; &#xC778;&#xAD6C; &#xC9D1;&#xC911;&#xC758; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xC81C;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xC140; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; spatiotemporal microenvironments &#xB458;&#xB7EC;&#xC2F8;&#xC5EC;)&#xC640; (&#xC720;&#xCCB4; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC140; &#xC870;&#xC791;&#xC744; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC5C4;&#xCCAD;&#xB098;&#xAC8C; &#xBE44;&#xC2FC; &#xC218; &#xC2A4;&#xCF00;&#xC77C;&#xB9C1;) &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC791; &#xAE30;&#xC220; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC6D0; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xD130; &#xC81C;&#xC5B4;, &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC131;&#xBD84; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD310;, &#xC911;&#xAC04; &#xAD6C;&#xC131; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC778;&#xC811; &#xC140;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC; &#xC140;&#xC758; microenvironment&#xC758; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC124;&#xC815;&#xD55C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, microtechnology&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xACBD;&#xC791;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBE60;&#xB978;, &#xC800;&#xAC00; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xB9CE;&#xC740; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC1C;&#xB150;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xC911;&#xC810;&#xC744; &#xB450;&#xACE0; &#xC81C;&#xC791;&#xC758; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC80;&#xD1A0;.

&#xCE69;&#xC5D0;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;: &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC791;.

La capacidad de las c&#xE9;lulas de cultivo in vitro ha revolucionado la comprobaci&#xF3;n de hip&#xF3;tesis en la c&#xE9;lula b&#xE1;sica y la investigaci&#xF3;n en biolog&#xED;a molecular y se ha convertido en una metodolog&#xED;a est&#xE1;ndar en la detecci&#xF3;n de drogas y los ensayos de toxicolog&#xED;a. Sin embargo, la metodolog&#xED;a de cultivo celular tradicional - que consiste esencialmente en la inmersi&#xF3;n de una gran poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas en un medio fluido homog&#xE9;neo - ha vuelto cada vez m&#xE1;s limitante, tanto desde un punto de vista fundamental (c&#xE9;lulas in vivo est&#xE1;n rodeados por complejos microambientes espacio-temporales) y desde una perspectiva pr&#xE1;ctica (ampliaci&#xF3;n del n&#xFA;mero de etapas de manipulaci&#xF3;n de fluidos y la manipulaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de alto rendimiento estudios in vitro es muy caro). Tecnolog&#xED;as de microfabricaci&#xF3;n han permitido a los investigadores de dise&#xF1;o, con control micr&#xF3;metro, la composici&#xF3;n bioqu&#xED;mica y la topolog&#xED;a del sustrato, la composici&#xF3;n del medio, as&#xED; como el tipo de c&#xE9;lulas vecinas que rodean el microambiente de la c&#xE9;lula. Adem&#xE1;s, microtecnolog&#xED;a es conceptualmente muy adecuado para el desarrollo de r&#xE1;pido, de bajo costo en sistemas in vitro que permiten el cultivo de alto rendimiento y el an&#xE1;lisis de c&#xE9;lulas en un gran n&#xFA;mero de condiciones. Aqu&#xED; hacemos una revisi&#xF3;n de una variedad de aplicaciones de microfabricaci&#xF3;n en estudios de cultivos celulares, con un &#xE9;nfasis en la biolog&#xED;a de los diversos tipos de c&#xE9;lulas.

Biolog&#xED;a en un chip: microfabricaci&#xF3;n para estudiar el comportamiento de las c&#xE9;lulas cultivadas

&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x8F74;&#x7A81;&#x5BFC;&#x5411;&#x5206;&#x5B50;&#x5DF2;&#x542F;&#x7528;&#x5BF9;&#x8BB8;&#x591A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x6307;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50;&#x68AF;&#x5EA6;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D7;&#x5230;&#x8D8B;&#x5316;&#x6E10;&#x53D8;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x8BB0;&#x5F55;&#x7684;&#x624B;&#x52A8;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x63D0;&#x793A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x7167;&#x7247;&#x3002;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6570;&#x636E;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#x9700;&#x8981;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5728;&#x5BC6;&#x96C6;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#x4F7F;&#x7528;&#x5EF6;&#x65F6;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5B89;&#x88C5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF09; &#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x624B;&#x52A8;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x53D8;&#x5F97;&#x65E5;&#x76CA;&#x4E0D;&#x5207;&#x5B9E;&#x9645;&#x8BB0;&#x5F55;&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#x4E3A;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x548C;/&#x6216;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x81EA;&#x52A8;&#x8BC6;&#x522B;&#x5E76;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5EF6;&#x65F6;&#x6700;&#x5C11;&#x7684;&#x7528;&#x6237;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7CFB;&#x5217;&#x4E2D;&#x76F8;&#x886C;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x63D0;&#x793A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x8F93;&#x51FA;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x63AA;&#x65BD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x7528;&#x6237;&#x5F00;&#x53D1;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x6E38;&#x79BB; E13 &#x5C0F;&#x9F20;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x901F;&#x5EA6;&#x793A;&#x4F8B;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0;&#x9891;&#x7E41;&#x7684;&#x6269;&#x5C55;&#x548C;&#x9000;&#x7F29;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x4E0E; 0.05 + /-0.14 microm &#x5206;&#x949F;&#x624B;&#x52A8;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x63D0;&#x793A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x662F;&#x4E24;&#x6837;&#xFF0C;&#x719F;&#x7EC3;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7528;&#x6237;&#x8BC6;&#x522B;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x8F74;&#x7A81;&#x63D0;&#x793A;&#x804C;&#x4F4D;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5E73;&#x5747;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;

&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x5EF6;&#x65F6;&#x56FE;&#x50CF;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x3002;

The isolation and purification of axon guidance molecules has enabled in vitro studies of the effects of axon guidance molecule gradients on numerous neuronal cell types. In a typical experiment, cultured neurons are exposed to a chemotactic gradient and their growth is recorded by manual identification of the axon tip position from two or more micrographs. Detailed and statistically valid quantification of axon growth requires evaluation of a large number of neurons at closely spaced time points (e.g. using a time-lapse microscopy setup). However, manual tracing becomes increasingly impractical for recording axon growth as the number of time points and/or neurons increases. We present a software tool that automatically identifies and records the axon tip position in each phase-contrast image of a time-lapse series with minimal user involvement. The software outputs several quantitative measures of axon growth, and allows users to develop custom measurements. For, example analysis of growth velocity for a dissociated E13 mouse cortical neuron revealed frequent extension and retraction events with an average growth velocity of 0.05 +/- 0.14 microm/min. Comparison of software-identified axon tip positions with manually identified axon tip positions shows that the software's performance is indistinguishable from that of skilled human users.

Automated identification of axonal growth cones in time-lapse image sequences.

L&#x26;#39;isolement et la purification de mol&#xE9;cules de guidage axonal a permis des &#xE9;tudes in vitro sur les effets des gradients de mol&#xE9;cules de guidage axonal sur de nombreux types de cellules neuronales. Dans une exp&#xE9;rience typique, des neurones en culture sont expos&#xE9;s &#xE0; un gradient chimiotactique et leur croissance est enregistr&#xE9;e par l&#x26;#39;identification manuelle de la position de la pointe axone &#xE0; partir de deux ou plusieurs micrographies. Quantification d&#xE9;taill&#xE9;e et statistiquement valide de la croissance axonale exige une &#xE9;valuation d&#x26;#39;un grand nombre de neurones &#xE0; des moments rapproch&#xE9;s (par exemple en utilisant une configuration de microscopie time-lapse). Toutefois, manuel tra&#xE7;age devient de plus en plus impraticable pour l&#x26;#39;enregistrement de la croissance axonale que le nombre de points dans le temps et / ou des augmentations des neurones. Nous pr&#xE9;sentons un outil logiciel qui identifie et enregistre automatiquement la position de la pointe des axones dans chaque image en contraste de phase d&#x26;#39;une s&#xE9;rie time-lapse avec la participation minimale de l&#x26;#39;utilisateur. Le logiciel g&#xE9;n&#xE8;re plusieurs mesures quantitatives de la croissance axonale, et permet aux utilisateurs d&#x26;#39;&#xE9;laborer des mesures personnalis&#xE9;es. Pour, par exemple l&#x26;#39;analyse de la vitesse de croissance pour un neurone dissoci&#xE9; E13 souris corticale a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; l&#x26;#39;extension fr&#xE9;quente et les &#xE9;v&#xE9;nements de r&#xE9;traction avec une vitesse de croissance moyen de 0,05 + / - 0,14 microm&#xE8;tre / min. Comparaison des logiciels &#xE0; identifier les positions de pointe avec l&#x26;#39;axone manuellement identifi&#xE9;s positions de pointe axone montre que les performances du logiciel ne se distingue pas de celle de qualifi&#xE9;s des utilisateurs humains.

Automatis&#xE9; d&#x26;#39;identification des c&#xF4;nes croissance axonale dans des s&#xE9;quences d&#x26;#39;images time-lapse

Die Isolierung und Reinigung von Axon Guidance Molek&uuml;le hat in-vitro-Untersuchungen &uuml;ber die Auswirkungen der Axon Guidance Molek&uuml;l Steigungen auf zahlreichen neuronalen Zelltypen aktiviert. In einem typischen Experiment kultivierte Neuronen eine chemotaktische Gradienten ausgesetzt sind, und ihr Wachstum wird durch manuelle Identifizierung der Axon Tipp-Position mindestens zwei Aufnahmen aufgezeichnet. Detaillierte und statistisch valide Quantifizierung der Axon Wachstum erfordert Auswertung einer gro&szlig;en Anzahl von Neuronen zu eng beieinander Zeitpunkten (z.B. mit eine Zeitraffer Mikroskopie-Setup). Jedoch manuelle Ablaufverfolgung wird zunehmend unpraktisch f&uuml;r die Aufzeichnung von Axon Wachstum als die Anzahl der Zeitpunkte bzw. Neuronen erh&ouml;ht. Wir pr&auml;sentieren eine Softwaretool, die automatisch erkennt und speichert die Axon Tipp Position in jedem Phasenkontrast Bild ein Zeitraffer-Serie mit minimale Benutzerbeteiligung. Die Software gibt verschiedene quantitative Ma&szlig;nahmen Axon Wachstum und erlaubt Benutzern, benutzerdefinierte Messungen zu entwickeln. F&uuml;r ergab die Analyse der Beispiel der Wachstums-Geschwindigkeit f&uuml;r einen getrennten E13 Maus kortikale Neuronen h&auml;ufige aus- und einfahren Ereignisse mit einem durchschnittlichen Wachstum Geschwindigkeit von 0,05 +/-0,14 Microm/min. Vergleich der Software identifiziert Axon Tipp Positionen mit manuell identifizierten Axon Tipp Positionen zeigt, dass die Software die Leistung nicht von erfahrenen menschlichen Benutzer zu unterscheiden ist.

Automatisierte Identifikation von Axonales Wachstum Kegeln im Zeitraffer Bildsequenzen.

L&#39;isolamento e la purificazione di molecole guida assone ha abilitato gli studi in vitro degli effetti di gradienti di molecola guida assone su numerosi tipi di cellule neuronali. In un tipico esperimento, neuroni coltivati sono esposti a un gradiente chemiotattico e loro crescita viene registrata da manuale identificazione della posizione di punta assone dalle micrografie due o pi&ugrave;. Quantificazione dettagliata e statisticamente valido di crescita axon richiede la valutazione di un gran numero di neuroni in punti temporali ravvicinati (ad esempio utilizzando una configurazione di time-lapse microscopy). Tuttavia, tracciatura manuale diventa sempre pi&ugrave; impraticabile per la registrazione di crescita axon come il numero di punti temporali e/o neuroni aumenta. Vi presentiamo un tool software che automaticamente identifica e registra la posizione della punta assone in ogni immagine a contrasto di fase di una serie di time-lapse con minimo coinvolgimento. Il software uscite diverse misure quantitative di crescita axon e permette agli utenti di sviluppare misure personalizzate. Per, esempio analisi della velocit&agrave; di crescita per un dissociato neurone corticale del mouse E13 rivelato frequenti eventi estensione e retrazione con una velocit&agrave; di crescita media 0.05 + /-0,14 microm/min confronto delle posizioni di punta assone software identificato con assone manualmente identificati punta posizioni dimostra che le prestazioni del software sono indistinguibile da quella di abili utilizzatori umani.

Identificazione automatica dei coni di crescita assonale in sequenze di immagini time-lapse.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5358;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x5B50;&#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;in vitro&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x52FE;&#x914D;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x304C;&#x4E8C;&#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5199;&#x771F;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x624B;&#x52D5;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EF8;&#x7D22;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3068;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x9593;&#x9694;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#xFF09;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x624B;&#x52D5;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x6642;&#x70B9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5897;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x975E;&#x73FE;&#x5B9F;&#x7684;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x81EA;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3068;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x753B;&#x50CF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x5BFE;&#x7B56;&#x3092;&#x51FA;&#x529B;&#x3057;&#x3001;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x304C;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 0.05&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x6210;&#x9577;&#x901F;&#x5EA6;&#x3068;&#x306E;&#x983B;&#x7E41;&#x306A;&#x62E1;&#x5F35;&#x3068;&#x53CE;&#x7E2E;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x89E3;&#x96E2;E13&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x4F8B;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;+ /  -  0.14&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;/&#x5206;&#x3002;&#x624B;&#x52D5;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x8B58;&#x5225;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x306E;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x719F;&#x7DF4;&#x3057;&#x305F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30E6;&#x30FC;&#x30B6;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x533A;&#x5225;&#x304C;&#x3064;&#x304B;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; axonal &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El aislamiento y purificaci&#xF3;n de mol&#xE9;culas de orientaci&#xF3;n ax&#xF3;n ha permitido en los estudios in vitro de los efectos de los gradientes ax&#xF3;n mol&#xE9;cula de orientaci&#xF3;n sobre numerosos tipos de c&#xE9;lulas neuronales. En un experimento t&#xED;pico, las neuronas cultivadas est&#xE1;n expuestos a un gradiente quimiot&#xE1;ctico y su crecimiento se registra por la identificaci&#xF3;n manual de la posici&#xF3;n de la punta del ax&#xF3;n a partir de dos o m&#xE1;s micrograf&#xED;as. La cuantificaci&#xF3;n detallada y estad&#xED;sticamente v&#xE1;lida de crecimiento axonal requiere la evaluaci&#xF3;n de un gran n&#xFA;mero de neuronas en los puntos de tiempo muy pr&#xF3;ximas entre s&#xED; (por ejemplo, utilizando una configuraci&#xF3;n de la microscop&#xED;a de lapso de tiempo). Sin embargo, manual de rastreo se vuelve cada vez m&#xE1;s pr&#xE1;ctico para registrar el crecimiento axonal como el n&#xFA;mero de puntos de tiempo y / o aumentos neuronas. Se presenta una herramienta de software que autom&#xE1;ticamente identifica y registra la posici&#xF3;n de la punta del ax&#xF3;n en cada imagen de contraste de fase de una serie de lapso de tiempo con la participaci&#xF3;n m&#xED;nima del usuario. El software emite una serie de medidas cuantitativas de crecimiento de los axones, y permite a los usuarios para desarrollar medidas personalizadas. En efecto, el an&#xE1;lisis de ejemplo de la velocidad de crecimiento de una neurona cortical del rat&#xF3;n disociado E13 revel&#xF3; la extensi&#xF3;n frecuente y eventos de retracci&#xF3;n con una velocidad de crecimiento promedio de 0,05 + / - 0,14 micras / min. Comparativa de software identificada con las posiciones de punta del ax&#xF3;n identificados manualmente las posiciones de punta del ax&#xF3;n muestra que el rendimiento del software es indistinguible de la de los usuarios expertos humanos.

Identificaci&#xF3;n autom&#xE1;tica de conos de crecimiento axonal en secuencias de im&#xE1;genes Time-lapse

&#x4FBF;&#x643A;&#x5F0F;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E3A;&#x4F4E;&#x6210;&#x672C;&#x70B9;&#x7684;&#x62A4;&#x7406;&#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x68C0;&#x6D4B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7B80;&#x5355;&#x800C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x8981;&#x6C42;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x6D41;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x5C04;&#x6D41;&#x5377;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x5355;&#x7247;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7; (PDMS) microdevice&#xFF0C;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B58;&#x50A8;&#x548C;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x6DF7;&#x5408;&#x6BD4;&#x4F8B; subnanoliter &#x5377;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E24;&#x4E2A;&#x96C6;&#x6210;&#x7684;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5FAE;&#x578B;&#x9600;&#x6570;&#x7EC4;&#x63A7;&#x5236;&#x704C;&#x88C5;&#x548C;&#x6DF7;&#x5408;&#x3002;&#x7531;&#x5149;&#x523B;&#x5B8C;&#x5168;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684; microchambers &#x5377;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x4FBF;&#x4ECE; picoliter &#x5230;&#x65B0;&#x578B;&#x7EB3;&#x5347;&#x7EA7;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x5377;&#x80FD;&#x5236;&#x5907;&#x9AD8;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; microvalves &#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x80FD;&#x6E90;&#x6295;&#x5165;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x6301;&#x5173;&#x95ED;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x6DB2;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B58;&#x50A8;&#x5728;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FBF;&#x643A;&#x65F6;&#x5C1A;&#x597D;&#x51E0;&#x5929;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x8BA4;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x53EF;&#x9884;&#x6D4B;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8367;&#x5149;&#x9499;&#x6307;&#x6807;&#x68C0;&#x5B9A;&#x88C5;&#x7F6E;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8BBE;&#x5907;&#x4F1A;&#x5728;&#x5C0F;&#x578B;&#x5316;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

&#x5E73;&#x884C;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684; photolithographically &#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x7EB3;&#x5347;&#x7EA7;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x5377;&#x4F7F;&#x7528;&#x5F39;&#x6027;&#x5FAE;&#x578B;&#x9600;&#x6570;&#x7EC4;&#x3002;

Portable microfluidic systems provide simple and effective solutions for low-cost point-of-care diagnostics and high-throughput biomedical assays. Robust flow control and precise fluidic volumes are two critical requirements for these applications. We have developed a monolithic polydimethylsiloxane (PDMS) microdevice that allows for storing and mixing subnanoliter volumes of aqueous solutions at various mixing ratios. Filling and mixing is controlled via two integrated PDMS microvalve arrays. The volumes of the microchambers are entirely defined by photolithography, hence volumes from picoliter to nanoliter can be fabricated with high precision. Because the microvalves do not require an energy input to stay closed, fluid can be stored in a highly portable fashion for several days. We have confirmed the mixing precision and predictability using fluorescence microscopy. We also demonstrate the application of the device for calibrating fluorescent calcium indicators. Due to the biocompatibility of PDMS, the device will have broad applications in miniaturized diagnostic assays as well as basic biological studies.

Parallel mixing of photolithographically defined nanoliter volumes using elastomeric microvalve arrays.

Portable syst&#xE8;mes microfluidiques fournir des solutions simples et efficaces &#xE0; faible co&#xFB;t au point de diagnostics et de soins de tests &#xE0; haut d&#xE9;bit biom&#xE9;dicales. Contr&#xF4;le de flux robuste et pr&#xE9;cis des volumes fluidiques sont deux conditions essentielles pour ces applications. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un monolithe polydim&#xE9;thylsiloxane (PDMS) microdispositif qui permet de stocker et m&#xE9;langer des volumes subnanoliter de solutions aqueuses &#xE0; diff&#xE9;rents rapports de m&#xE9;lange. Remplissage et de m&#xE9;lange est contr&#xF4;l&#xE9; par deux tableaux int&#xE9;gr&#xE9;s Microvalve PDMS. Les volumes des microchambres sont enti&#xE8;rement d&#xE9;finies par photolithographie, par cons&#xE9;quent, les volumes de picolitres pour nanolitre peuvent &#xEA;tre fabriqu&#xE9;s avec une grande pr&#xE9;cision. Parce que les microvannes ne n&#xE9;cessitent pas un apport d&#x26;#39;&#xE9;nergie pour rester ferm&#xE9;e, le liquide peut &#xEA;tre stock&#xE9; dans un mode ultra-portable pendant plusieurs jours. Nous avons confirm&#xE9; la pr&#xE9;cision et la pr&#xE9;visibilit&#xE9; de m&#xE9;lange en utilisant la microscopie &#xE0; fluorescence. Nous d&#xE9;montrons &#xE9;galement l&#x26;#39;application du dispositif pour l&#x26;#39;&#xE9;talonnage des indicateurs de calcium fluorescentes. En raison de la biocompatibilit&#xE9; des PDMS, le dispositif aura de vastes applications dans des tests de diagnostic miniaturis&#xE9;s ainsi que des &#xE9;tudes biologiques de base.

Parall&#xE8;lement M&#xE9;lange de volumes nanolitre photolithographie d&#xE9;finies &#xE0; l&#x26;#39;aide de tableaux Microvalve &#xE9;lastom&#xE8;res

Portable mikrofluidische Systeme bieten einfache und effektive L&ouml;sungen f&uuml;r kosteng&uuml;nstige Point-of-Care Diagnostik und hohem Durchsatz biomedizinische Assays. Robuste Flusssteuerung und pr&auml;zise fluidische Volumes sind zwei wichtige Anforderungen f&uuml;r diese Anwendungen. Wir haben eine monolithische Polydimethylsiloxan (PDMS) Microdevice entwickelt, die f&uuml;r die Speicherung und mischen Subnanoliter Mengen von w&auml;ssrigen L&ouml;sungen bei verschiedenen mischende Verh&auml;ltnisse erm&ouml;glicht. Abf&uuml;ll- und mischen wird &uuml;ber zwei integrierte PDMS Mikroventil Arrays gesteuert. Die B&auml;nde der Microchambers sind vollst&auml;ndig definiert durch Fotolithografie, daher k&ouml;nnen Volumina von Picoliter bis Nanoliter mit hoher Pr&auml;zision hergestellt werden. Da die Mikroventile eine Energieaufnahme geschlossen bleiben nicht ben&ouml;tigen, kann Fl&uuml;ssigkeit in hohem Grade bewegliche Weise f&uuml;r mehrere Tage gespeichert werden. Wir haben die mischenden Pr&auml;zision und Vorhersagbarkeit mit Fluoreszenzmikroskopie best&auml;tigt. Wir zeigen auch die Anwendung des Ger&auml;ts f&uuml;r die Kalibrierung von fluoreszierenden Kalzium-Indikatoren. Aufgrund der Biokompatibilit&auml;t von PDMS wird das Ger&auml;t breite Anwendungen in miniaturisierten diagnostischen Proben sowie grundlegende biologische Studien haben.

Parallele Mischen von photolithographically definierten Nanoliter Volumes mithilfe von Elastomer Mikroventil Arrays.

Sistemi microfluidici portatili offrono soluzioni semplici ed efficaci per diagnostica point-of-care di basso costo e ad alta velocit&agrave; biomedical assays. Controllo di flusso robusto e precisi volumi fluidici sono due requisiti critici per queste applicazioni. Abbiamo sviluppato un microdevice monolitico polidimetilsilossano (PDMS) che permette di memorizzare e miscelazione subnanoliter volumi di soluzioni acquose a vari rapporti di miscelazione. Riempimento e la miscelazione &egrave; controllato tramite due matrici di microelettrovalvola PDMS integrate. I volumi del microchambers sono interamente definiti dalla fotolitografia, quindi volumi da picolitri al nanolitro possono essere fabbricate con altissima precisione. Perch&eacute; le Microvalvole non richiedono un&#39;energia di input a rimanere chiusi, fluido pu&ograve; essere memorizzato in maniera altamente portatile per diversi giorni. Abbiamo confermato la miscelazione precisione e prevedibilit&agrave; utilizzando la microscopia di fluorescenza. Abbiamo anche dimostrare l&#39;applicazione del dispositivo per calibrare gli indicatori fluorescenti calcio. A causa della biocompatibilit&agrave; di PDMS, il dispositivo avr&agrave; ampia applicazioni in saggi diagnostici miniaturizzati, nonch&eacute; studi biologici di base.

Parallelo di miscelazione di photolithographically definito nanolitro volumi utilizzando matrici microelettrovalvola elastomerica.

&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D6;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30AA;&#x30D6;&#x30B1;&#x30A2;&#x8A3A;&#x65AD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6D41;&#x4F53;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x4EF6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x6DF7;&#x5408;&#x6BD4;&#x3067;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x306E;subnanoliter&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x683C;&#x7D0D;&#x3057;&#x3001;&#x6DF7;&#x5408;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30CE;&#x30EA;&#x30B7;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#xFF08;PDMS&#xFF09;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5145;&#x586B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6DF7;&#x5408;&#x306F;2&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;PDMS&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D6;&#xB7;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30D4;&#x30B3;&#x304B;&#x3089;&#x30CA;&#x30CE;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x9AD8;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D6;&#x306F;&#x9589;&#x3058;&#x6EDE;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x5165;&#x529B;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6D41;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x6570;&#x65E5;&#x9593;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x79FB;&#x690D;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x683C;&#x7D0D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6DF7;&#x5408;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x6821;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PDMS&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x9069;&#x5408;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x5C0F;&#x578B;&#x5316;&#x3001;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D0;&#x30EB;&#x30D6;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CA;&#x30CE;&#x30EA;&#x30C3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4E26;&#x5217;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;

&#xD734;&#xB300;&#xC6A9; &#xBBF8;&#xC138; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC800;&#xAC00; &#xCF00;&#xC5B4; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD750;&#xB984; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xC815;&#xBC00;&#xD55C; &#xC720;&#xCCB4; &#xBCFC;&#xB968;&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;. &#xC800;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD63C;&#xD569; &#xBE44;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC131; &#xD574;&#xACB0;&#xCC45;&#xC758; subnanoliter &#xBCFC;&#xB968;&#xC744; &#xD63C;&#xD569; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB2E8;&#xC77C; polydimethylsiloxane (PDMS) microdevice&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC44;&#xC6B0;&#xAE30; &#xBC0F; &#xD63C;&#xD569; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569; &#xB41C; PDMS microvalve &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Microchambers&#xC758; &#xBCFC;&#xB968; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC18C; &#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBCFC;&#xB968; picoliter&#xC5D0;&#xC11C; nanoliter &#xB192;&#xC740; &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB0A0;&#xC870; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. Microvalves &#xC785;&#xB825;&#xC774; &#xB2EB;&#xD600; &#xC788;&#xC5B4; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBA87; &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD734;&#xB300;&#xC6A9; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; &#xC561;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC800;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD63C;&#xD569; &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC608;&#xCE21; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC131; &#xCE7C;&#xC298; &#xC9C0;&#xD45C; &#xBCF4;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. PDMS&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC801;&#xD569;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC18C;&#xD615;&#xB41C; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

Photolithographically&#xC758; &#xBCD1;&#xB82C; &#xD63C;&#xD569; nanoliter &#xBCFC;&#xB968; &#xD0C4;&#xC131; microvalve &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sistemas port&#xE1;tiles de microfluidos ofrecer soluciones sencillas y eficaces de bajo costo en el punto de atenci&#xF3;n de diagn&#xF3;stico y de alto rendimiento ensayos biom&#xE9;dicos. Control de flujo robusto y precisos vol&#xFA;menes de fluidos son dos requisitos fundamentales para estas aplicaciones. Hemos desarrollado un monol&#xED;tico polidimetilsiloxano (PDMS) microdispositivo que permite almacenar y mezclando vol&#xFA;menes subnanoliter de soluciones acuosas a diferentes relaciones de mezcla. El llenado y la mezcla se controla a trav&#xE9;s de dos conjuntos integrados microv&#xE1;lvula PDMS. Los vol&#xFA;menes de las microc&#xE1;maras est&#xE1;n completamente definida por fotolitograf&#xED;a, por lo tanto, los vol&#xFA;menes de picolitros a nanolitros puede ser fabricado con alta precisi&#xF3;n. Debido a que los microv&#xE1;lvulas no requieren un aporte de energ&#xED;a para permanecer cerrada, el l&#xED;quido puede ser almacenado en una forma altamente port&#xE1;til para varios d&#xED;as. Hemos confirmado la precisi&#xF3;n de mezcla y la previsibilidad mediante microscop&#xED;a de fluorescencia. Tambi&#xE9;n demuestran la aplicaci&#xF3;n del dispositivo para calibrar indicadores fluorescentes de calcio. Debido a la biocompatibilidad de PDMS, el dispositivo tiene amplias aplicaciones en ensayos de diagn&#xF3;stico miniaturizados, as&#xED; como estudios biol&#xF3;gicos b&#xE1;sicos.

Paralelamente mezcla de los vol&#xFA;menes nanoliter fotolitogr&#xE1;ficamente definidos utilizando matrices elastom&#xE9;ricas microv&#xE1;lvula

&#x80DA;&#x80CE;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x80B2;&#x3001; &#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x63D0;&#x793A; (&quot;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&quot;&#xFF09; &#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x52A8;&#x6001;&#x4E09;&#x7EF4; (3-D) &#x666F;&#x89C2;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x540E;&#x56E0;&#x7D20;&#x5E76;&#x7531;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#xFF0C;&#x589E;&#x957F;&#x7EB5;&#x5BB9;&#x6216;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x63D0;&#x793A;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x3001; &#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5B83;&#x4E00;&#x76F4;&#x96BE;&#x4EE5;&#x5728;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5BFC;&#x822A;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x4E8C;&#x7EF4; (2-d) &#x57FA;&#x677F;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x54CD;&#x5E94;&#x591A;&#x4E2A;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x63D0;&#x793A;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x641C;&#x7D22;&#x7B97;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F53;&#x5916;&#x7814;&#x7A76;&#x73B0;&#x72B6;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x8111;&#x76AE;&#x8D28;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x9762;&#x4E34;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x4E0E;&#x7ADE;&#x4E89;&#x5BF9;&#x624B;&#x589E;&#x957F;&#x9009;&#x9879;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x653E;&#x7EB5;&#x548C;&#x5FAE;&#x89C2;&#x5F62;&#x8C8C;&#x7279;&#x5F81;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x57FA;&#x8D28;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E09;&#x7EF4;&#x57FA;&#x677F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x591A;&#x805A;-D-&#x8D56;&#x6C28;&#x9178; (PDL) &#x6D82;&#x6599;&#x8D85;&#x5FAE;&#x578B;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7; (PDMS) &#x6240;&#x91C7;&#x53D6;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x548C; Matrigel &#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x663E;&#x793A;&#x9996;&#x9009;&#x9879;&#xFF0C;Matrigel &#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x4E13;&#x7EBF;&#x548C;&#x7F57;&#x5BBE;&#x8DEF;&#x5F84;&#x8DDD;&#x79BB;&#x7B26;&#x5408;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x63A2;&#x7D22;&#x6027;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x3002;&#x5F53;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9996;&#x9009;&#x9879;&#x5728;&#x51B2;&#x7A81;&#x65F6;&#xFF0C;&#x8F74;&#x7A81;&#x9009;&#x62E9;&#x76F4;&#x957F;&#x6210; Matrigel &#xFF1B;&#x5F53;&#x76F4;&#x7EBF;&#x8DEF;&#x5F84;&#x662F;&#x4E0D;&#x5BBD;&#x5BB9;&#xFF0C;&#x8F74;&#x7A81;&#x4F1A;&#x53D8;&#x4E3A;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F2F;&#x89D2;&#x5EA6;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x4F5C;&#x51FA;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5BFC;&#x822A;&#x51B3;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x96C6;&#x6210;&#x7684;&#x653E;&#x7EB5;&#x548C;&#x5730;&#x5F62;&#x63D0;&#x793A;&#x3002;

&#x7531;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x5730;&#x5F62;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x63D0;&#x793A;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x578B;&#x4E09;&#x7EF4;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x751F;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x96C6;&#x6210;&#x3002;

During embryonic neural development, axon tips ("growth cones") are guided through a dynamic three-dimensional (3-D) landscape by soluble chemotropic factors and by immobilized, growth-permissive or growth-inhibiting contact cues present in the extracellular matrix and on the surface of surrounding cells. It has been difficult to probe the search algorithms of growth cones in response to multiple contact cues during 3-D navigation using traditional two-dimensional (2-D) substrates. Here, we present an in vitro study in which the axons of murine embryonic cortical neurons are challenged with competing growth options, using 3-D substrates that feature variations in permissiveness and microtopography. As 3-D substrates, we used poly-D-lysine (PDL) coatings on microfabricated steps of polydimethylsiloxane (PDMS) and complementary features of Matrigel. We found that axons display a preference for PDL over Matrigel and for the straightest path within a distance consistent with the exploratory range of the growth cone. When these two preferences are in conflict, axons choose to grow straight into Matrigel; when the straight path is not permissive, the axon turns in the direction that minimizes the turning angle. These results suggest that growth cones make 3-D navigation decisions by integrating permissiveness and topographical cues.

Integration of topographical and biochemical cues by axons during growth on microfabricated 3-D substrates.

Au cours du d&#xE9;veloppement neuronal embryonnaire, axone conseils (&#x26;quot;c&#xF4;nes de croissance&#x26;quot;) sont guid&#xE9;s &#xE0; travers une dynamique en trois dimensions (3-D) du paysage par des facteurs solubles chimiotactique et par immobilis&#xE9;s, les indices de contact sur la croissance permissives ou inhibant la croissance pr&#xE9;sents dans la matrice extracellulaire et sur la surface des cellules environnantes. Il a &#xE9;t&#xE9; difficile de sonder les algorithmes de recherche de c&#xF4;nes de croissance en r&#xE9;ponse aux signaux de contact multiples au cours de 3-D de navigation en utilisant des substrats traditionnels &#xE0; deux dimensions (2-D). Ici, nous pr&#xE9;sentons une &#xE9;tude in vitro dans lequel les axones de souris embryonnaires neurones corticaux sont mis au d&#xE9;fi avec des options de croissance concurrents, en utilisant des substrats en 3-D que les variations de fond dans la permissivit&#xE9; et de la microtopographie. Comme 3-D substrats, nous avons utilis&#xE9; la poly-D-lysine (PDL) rev&#xEA;tements sur les mesures microfabriqu&#xE9;s de polydim&#xE9;thylsiloxane (PDMS) et les caract&#xE9;ristiques compl&#xE9;mentaires de Matrigel. Nous avons constat&#xE9; que les axones montrent une pr&#xE9;f&#xE9;rence pour PDL plus Matrigel et pour le chemin le plus direct &#xE0; une distance compatible avec la gamme d&#x26;#39;exploration du c&#xF4;ne de croissance. Lorsque ces deux pr&#xE9;f&#xE9;rences sont en conflit, les axones choisissent de cultiver directement dans Matrigel, quand le droit chemin n&#x26;#39;est pas permissive, l&#x26;#39;axone tourne dans le sens qui minimise l&#x26;#39;angle de braquage. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les c&#xF4;nes de croissance font en 3-D des d&#xE9;cisions de navigation en int&#xE9;grant la permissivit&#xE9; et les indices topographiques.

Int&#xE9;gration de Cues topographiques et biochimique par des axones pendant la croissance sur microfabriqu&#xE9; 3-D Supports

W&auml;hrend der Embryonalentwicklung neuronales Axon Tipps (&quot;Wachstum Cones&quot;) sind durch eine dynamische dreidimensionale (3D)-Landschaft von l&ouml;slichen chemotropic Faktoren geleitet und von immobilisiert, Wachstum-permissive oder wachstumshemmenden Kontakt Hinweise zu pr&auml;sentieren, in der extrazellul&auml;ren Matrix und auf der Oberfl&auml;che des umgebenden Zellen. Es war schwierig zu sondieren die Suchalgorithmen von Wachstum Kegeln als Reaktion auf mehrere Kontakt-Signale w&auml;hrend der 3-d Navigation mit herk&ouml;mmliche zweidimensionale (2D)-Substraten. Hier pr&auml;sentieren wir eine in-vitro-Studie, in der die Axone von murinen embryonalen kortikale Neuronen herausgefordert werden, mit konkurrierenden Wachstumsoptionen, mit dreidimensionalen Substraten, die Variationen in Permissivit&auml;t und Microtopography Funktion. Als 3-d Substrate haben wir Poly-D-Lysin (PDL) Beschichtungen auf Microfabricated Schritte von Polydimethylsiloxan (PDMS) und erg&auml;nzende Features von Matrigel verwendet. Wir fanden, dass die Axone eine Vorliebe f&uuml;r PDL &uuml;ber Matrigel und der geradeste Weg konsistent mit dem explorativen der Wachstumskegel Entfernung angezeigt. Wenn diese beiden Einstellungen in Konflikt stehen, w&auml;hlen Axone wachsen gerade in Matrigel; Wenn der gerade Weg nicht permissive ist, wird das Axon in die Richtung, die der Einschlagwinkel minimiert. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Wachstum Zapfen 3D Navigation Entscheidungen treffen durch Integration Permissivit&auml;t und topographische Hinweise.

Integration von topographischen und biochemische Signale von Axonen w&auml;hrend des Wachstums auf Microfabricated 3-d Substraten.

Durante lo sviluppo neurale embrionale, consigli di assone (&quot;coni di crescita&quot;) sono guidati attraverso un dinamico paesaggio tridimensionale (3D) da fattori solubili chemotropic e da immobilizzato, crescite permissive o inibizione della crescita contatti spunti presentano nella matrice extracellulare e sulla superficie che circonda le cellule. &Egrave; stato difficile per gli algoritmi di ricerca dei coni di crescita in risposta alle molteplici spunti di contatti della sonda durante la navigazione 3D utilizzando bidimensionali (2D) tradizionali substrati. Qui, vi presentiamo uno studio in vitro in cui gli assoni dei neuroni corticali embrionali murini sono sfidati con le opzioni di crescita concorrenti, utilizzando substrati 3D che presentano variazioni nel permissivismo e microtopography. Come substrati 3D, abbiamo usato i rivestimenti poli-D-lisina (PDL) su caratteristiche complementari di Matrigel e microfabricated passaggi di polidimetilsilossano (PDMS). Abbiamo trovato che assoni visualizzano una preferenza per il PDL sopra Matrigel e per il percorso pi&ugrave; dritta a distanza coerente con la gamma esplorativa del cono di crescita. Quando queste due preferenze sono in conflitto, assoni scelgono di crescere dritto in Matrigel; Quando la retta via non &egrave; permissiva, l&#39;assone si trasforma nella direzione che riduce al minimo l&#39;angolo di rotazione. Questi risultati suggeriscono che i coni di crescita decisioni navigazione tridimensionale integrando permissivismo e spunti topografici.

Integrazione di spunti topografici e biochimici di assoni durante la crescita su substrati 3D microfabricated.

&#x80DA;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x30D2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#xFF08; &#x26;quot;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x26;quot;&#xFF09;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;chemotropic&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52D5;&#x7684;3&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;3-D&#xFF09;&#x306E;&#x98A8;&#x666F;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x5C0E;&#x304B;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5897;&#x6B96;&#x963B;&#x5BB3;&#x63A5;&#x89E6;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;2&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;2-D&#xFF09;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;3&#x6B21;&#x5143;&#x30CA;&#x30D3;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x5408;&#x56F3;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x76AE;&#x8CEA;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306F;&#x3001;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3068;&#x5FAE;&#x5730;&#x5F62;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x305D;&#x306E;3-D&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7AF6;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; 3-D&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#xFF08;PDMS&#xFF09;&#x3068;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x88DC;&#x5B8C;&#x7684;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x52A0;&#x5DE5;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x30DD;&#x30EA;-D-&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;PDL&#xFF09;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x4E0A;&#x306E;PDL&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306E;&#x63A2;&#x7D22;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x4E00;&#x5B9A;&#x306E;&#x8DDD;&#x96E2;&#x5185;&#x3067;&#x307E;&#x3063;&#x3059;&#x3050;&#x306A;&#x30D1;&#x30B9;&#x306E;&#x512A;&#x5148;&#x9806;&#x4F4D;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x304C;&#x7AF6;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x306B;&#x307E;&#x3063;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x80B2;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D1;&#x30B9;&#x304C;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306F;&#x3001;&#x56DE;&#x8EE2;&#x89D2;&#x5EA6;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x306A;&#x200B;&#x200B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306F;&#x3001;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3068;&#x5730;&#x5F62;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;3&#x6B21;&#x5143;&#x30CA;&#x30D3;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x610F;&#x601D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FAE;&#x7D30;&#x52A0;&#x5DE5;&#x3001;3&#x6B21;&#x5143;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x3078;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5730;&#x5F62;&#x3068;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;

&#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCD95; &#xC0AD; &#xD301; (&quot;&#xC131;&#xC7A5; &#xCF58;&quot;) &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; chemotropic &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xC801; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3 &#xCC28;&#xC6D0;) &#xC870; &#xACBD; &#xC548;&#xB0B4; &#xBC0F; &#xC758;&#xD574; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C;, &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB610;&#xB294; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xB2E8;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC640; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; 2 &#xCC28;&#xC6D0; (2d) &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xD0D0;&#xC0C9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB835;&#xAC8C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAE30;&#xD310; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD568;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF5;&#xC774; &#xBCC0;&#xD615; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACBD;&#xC7C1; &#xC131;&#xC7A5; &#xC635;&#xC158; murine &#xBC30;&#xC544; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD95; &#xC0AD; &#xB3C4;&#xC804; &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC2DC;. 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; polydimethylsiloxane (PDMS)&#xC758; &#xFE59; &#xC2A4;&#xD15D;&#xACFC; Matrigel&#xC758; &#xBCF4;&#xC644; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD3F4; &#xB9AC; D lysine (PDL) &#xCF54;&#xD305;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Matrigel &#xD1B5;&#xD574; PDL &#xBC0F; &#xAC70;&#xB9AC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xB0B4; &#xACE7;&#xC740; &#xACBD;&#xB85C; &#xCD95; &#xC0AD; &#xD55C; &#xC120;&#xD638; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCDA9;&#xB3CC; &#xB54C; axons Matrigel; &#xC5F0;&#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C1;&#xC120; &#xACBD;&#xB85C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xACBD;&#xC6B0;, &#xCD95; &#xC0AD; &#xB3CC;&#xAE30; &#xAC01;&#xB3C4; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD568; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xD615; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xD0D0;&#xC0C9; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xFE59; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xD615; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xC11C;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569;.

Durante el desarrollo neural embrionario, los axones consejos (&#x26;quot;los conos de crecimiento&#x26;quot;) son guiados a trav&#xE9;s de una din&#xE1;mica en tres dimensiones (3-D) del paisaje por factores solubles quimiotr&#xF3;picas y inmovilizadas, las se&#xF1;ales de contacto de crecimiento permisivas o inhibir el crecimiento-presentes en la matriz extracelular y sobre la superficie de las c&#xE9;lulas circundantes. Ha sido dif&#xED;cil para probar los algoritmos de b&#xFA;squeda de los conos de crecimiento en respuesta a las se&#xF1;ales de m&#xFA;ltiples contactos en 3-D de navegaci&#xF3;n utilizando sustratos tradicionales de dos dimensiones (2-D). A continuaci&#xF3;n, presentamos un estudio in vitro en el que los axones de las neuronas corticales embrionarias murinas son desafiados con opciones de crecimiento de la competencia, el uso de sustratos 3-D que las variaciones de caracter&#xED;sticas en la permisividad y la microtopograf&#xED;a. Como en 3-D sustratos, hemos utilizado poli-D-lisina (PDL) recubrimientos en pasos microfabricated de polidimetilsiloxano (PDMS) y caracter&#xED;sticas complementarias de Matrigel. Hemos encontrado que los axones mostrar una preferencia por encima de PDL Matrigel y por el camino m&#xE1;s recto dentro de una distancia constante con la gama de exploraci&#xF3;n del cono de crecimiento. Cuando estas dos preferencias se encuentran en conflicto, los axones crecen elegir directamente a Matrigel, cuando el camino recto no es permisivo, el ax&#xF3;n se convierte en la direcci&#xF3;n que minimiza el &#xE1;ngulo de giro. Estos resultados sugieren que los conos de crecimiento en 3-D que las decisiones de navegaci&#xF3;n mediante la integraci&#xF3;n de la permisividad y se&#xF1;ales topogr&#xE1;ficas.

Integraci&#xF3;n de los Cues topogr&#xE1;ficos y Bioqu&#xED;mica por los axones durante el crecimiento en 3-D Microfabricated Sustratos

&#x7EF4;&#x5C14;&#x7EB3; &middot; &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x662F;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x663E;&#x6027;&#x9057;&#x4F20;&#x9690;&#x6027;&#x9057;&#x4F20;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x764C;&#x75C7;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x5F81;&#x7684;&#x8FC7;&#x65E9;&#x8001;&#x5316;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x884C;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Werner &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x86CB;&#x767D;&#x8B66;&#x544A;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728; DNA &#x590D;&#x5236;&#x548C; S &#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E49;&#x8B66;&#x544A;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x671F;&#x95F4;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x7532;&#x57FA;&#x78FA;&#x9178; (MMS) DNA &#x635F;&#x4F24;&#x6216;&#x7F9F;&#x57FA;&#x8132; (&#x80E1;)-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x902E;&#x6355;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x540E;&#x6025;&#x6027;&#x67AF;&#x7AED;&#x7684;&#x8B66;&#x544A;&#x3002;&#x8B66;&#x544A;&#x635F;&#x5931;&#x663E;&#x8457;&#x5EF6;&#x957F;&#x540E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#x7597;&#x6CD5;&#x4E4B;&#x4E00;&#x5B8C;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x590D;&#x5236;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x3001; &#x62C9;&#x4F38;&#x663E;&#x793A;&#x8B66;&#x544A;&#x6D88;&#x8017;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x5728;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x62C9;&#x957F;&#x4F53;&#x5185;&#x5F69;&#x4FE1;&#x6216;&#x80E1;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x7684; DNA &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x8B66;&#x544A;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BF4;&#x660E;&#x8B66;&#x544A;&#x884C;&#x4E3A;&#x4FC3;&#x8FDB; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x6216;&#x590D;&#x5236;&#x902E;&#x6355;&#x540E;&#x7684;&#x53C9;&#x7EA7;&#x6570;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x673A;&#x68B0;&#x57FA;&#x7840;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8B66;&#x544A;&#x7EF4;&#x62A4;&#x548C;&#x9884;&#x6D4B;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x8B66;&#x544A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6210;&#x4EBA;&#x764C;&#x75C7;&#x9776;&#x5411;&#x5316;&#x7597;&#x3002;

&#x8B66;&#x544A; RecQ &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x6216;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x902E;&#x6355;&#x540E;&#x6B63;&#x5E38;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x7EA7;&#x6570;&#x3002;

Werner syndrome is an autosomal recessive genetic instability and cancer predisposition syndrome with features of premature aging. Several lines of evidence have suggested that the Werner syndrome protein WRN plays a role in DNA replication and S-phase progression. In order to define the exact role of WRN in genomic replication we examined cell cycle kinetics during normal cell division and after methyl-methane-sulfonate (MMS) DNA damage or hydroxyurea (HU)-mediated replication arrest following acute depletion of WRN from human fibroblasts. Loss of WRN markedly extended the time cells needed to complete the cell cycle after either of these genotoxic treatments. Moreover, replication track analysis of individual, stretched DNA fibers showed that WRN depletion significantly reduced the speed at which replication forks elongated in vivo after MMS or HU treatment. These results establish the importance of WRN during genomic replication and indicate that WRN acts to facilitate fork progression after DNA damage or replication arrest. The data provide a mechanistic basis for a better understanding of WRN-mediated maintenance of genomic stability and for predicting the outcomes of DNA-targeting chemotherapy in several adult cancers that silence WRN expression.

The RecQ helicase WRN is required for normal replication fork progression after DNA damage or replication fork arrest.

Du syndrome de Werner est une maladie autosomique r&#xE9;cessive instabilit&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;tique et le syndrome de pr&#xE9;disposition au cancer avec des caract&#xE9;ristiques de vieillissement pr&#xE9;matur&#xE9;. Plusieurs &#xE9;l&#xE9;ments de preuve ont sugg&#xE9;r&#xE9; que la prot&#xE9;ine WRN Werner syndrome joue un r&#xF4;le dans la r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN et S-phase de progression. Afin de d&#xE9;finir le r&#xF4;le exact de WRN dans la r&#xE9;plication g&#xE9;nomique, nous avons examin&#xE9; la cin&#xE9;tique du cycle cellulaire durant la division cellulaire normale et apr&#xE8;s m&#xE9;thyl-m&#xE9;thane-sulfonate de dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN (MMS) ou l&#x26;#39;hydroxyur&#xE9;e (HU) m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;arrestation de r&#xE9;plication suite &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;puisement aigu de WRN &#xE0; partir de fibroblastes humains . Perte de WRN nettement &#xE9;tendu les cellules temps n&#xE9;cessaire pour terminer le cycle cellulaire apr&#xE8;s l&#x26;#39;autre de ces traitements g&#xE9;notoxiques. En outre, l&#x26;#39;analyse de r&#xE9;plication de piste individuels, les fibres d&#x26;#39;ADN &#xE9;tir&#xE9;es a montr&#xE9; que l&#x26;#39;appauvrissement de WRN consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit la vitesse &#xE0; laquelle des fourches de r&#xE9;plication in vivo allong&#xE9;e apr&#xE8;s le traitement MMS ou HU. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent l&#x26;#39;importance de WRN lors de la r&#xE9;plication du g&#xE9;nome et indiquent que WRN agit pour faciliter la progression fourche apr&#xE8;s l&#xE9;sions de l&#x26;#39;ADN ou de l&#x26;#39;arrestation de r&#xE9;plication. Les donn&#xE9;es fournissent une base m&#xE9;caniste pour une meilleure compr&#xE9;hension de WRN-m&#xE9;diation maintien de la stabilit&#xE9; g&#xE9;nomique et pour pr&#xE9;dire les r&#xE9;sultats de l&#x26;#39;ADN de ciblage chimioth&#xE9;rapie dans les cancers des adultes que plusieurs d&#x26;#39;expression WRN silence.

Le RecQ h&#xE9;licase WRN est requise pour la progression de la r&#xE9;plication de fourche normale apr&#xE8;s des dommages d&#x26;#39;ADN ou d&#x26;#39;arr&#xEA;t des fourches de r&#xE9;plication

-Werner Syndrom ist eine autosomal rezessive genetische Instabilit&auml;t und Krebs Pr&auml;disposition mit Features von vorzeitiger Hautalterung. Mehrere Zeilen Beweise haben vorgeschlagen, dass das Werner-Syndrom Protein WRN eine Rolle bei der DNA-Replikation und Fortschreiten der S-Phase spielt. Um die genaue Rolle des WRN in genomische Replikation definieren wir Zellzykluskinetik gepr&uuml;ft, w&auml;hrend normale Zellteilung und nach Methyl-Methan-sulfonat (MMS) DNA-Sch&auml;digung oder Hydroxyurea (HU)-vermittelte Replikation Verhaftung nach akuter Ersch&ouml;pfung der WRN von menschlichen Fibroblasten. Verlust von WRN verl&auml;ngert deutlich die Zeit Zellen Zellzyklus nach entweder dieser genotoxische Behandlungen ben&ouml;tigen. Dar&uuml;ber hinaus verfolgen Sie Replikation Analyse der individuellen, gestreckten DNA Fasern haben gezeigt, dass WRN Ersch&ouml;pfung deutlich reduziert die Geschwindigkeit bei der Replikation Gabeln nach MMS oder HU-Behandlung in-vivo l&auml;nglich. Diese Ergebnisse die Bedeutung der WRN w&auml;hrend der genomischen Replikation einrichten und WRN dient zur Erleichterung der Gabel Fortschreiten nach DNA Besch&auml;digung oder Replikation Verhaftung hin. Die Daten bieten eine mechanistische Grundlage f&uuml;r ein besseres Verst&auml;ndnis der WRN-vermittelte Wartung der genomischen Stabilit&auml;t und zur Vorhersage der Ergebnisse der DNA-Zielgruppenadressierung Chemotherapie in mehreren Erwachsenen Krebserkrankungen, die WRN Ausdruck zum Schweigen zu bringen.

Der RecQ-Helicase WRN ist f&uuml;r normale Replikation Gabel Fortschreiten nach DNA Besch&auml;digung oder Replikation Gabel Verhaftung erforderlich.

La sindrome di Werner &egrave; un&#39;autosomica recessiva instabilit&agrave; e cancro predisposizione sindrome genetica con caratteristiche di invecchiamento prematuro. Diverse linee di evidenze hanno suggerito che la proteina di sindrome di Werner WRN gioca un ruolo nella replicazione del DNA e la progressione della fase S. Al fine di definire l&#39;esatto ruolo di WRN in replica genomic abbiamo esaminato il ciclo cellulare cinetica durante la divisione cellulare normale e dopo il danno al DNA (MMS) metil-metano-sulfonato o idrossiurea (HU)-mediato arresto replica fibroblasti umani in seguito deplezione acuta dell&#39;avv. Perdita di WRN esteso notevolmente cellule del tempo necessarie per completare il ciclo cellulare dopo uno di questi trattamenti genotossico. Inoltre, replica traccia analisi delle fibre del DNA individuale, allungati ha mostrato che la deplezione di WRN significativamente ridotto la velocit&agrave; a cui le forcelle replica allungata in vivo dopo trattamento MMS o HU. Questi risultati stabilire l&#39;importanza di WRN durante la replicazione genomica e indicano che WRN agisce per facilitare la progressione forcella dopo l&#39;arresto di replica o di danni del DNA. I dati forniscono una base meccanicistica per una migliore comprensione di WRN-mediata di mantenimento della stabilit&agrave; genomica e per predire i risultati della chemioterapia DNA-targeting in diversi tumori degli adulti che silenzio espressione avv.

Le RecQ elicasi WRN sono richiesto per la progressione forcella replica normale dopo l&#39;arresto di forcella replica o danni del DNA.

&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30CA;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306F;&#x65E9;&#x671F;&#x8001;&#x5316;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x52A3;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x764C;&#x7D20;&#x56E0;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x884C;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30CA;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;WRN&#x306F;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x3068;S&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x200B;&#x200B;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;WRN&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;MMS&#xFF09;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A6;&#x30EC;&#x30A2;&#xFF08;HU&#xFF09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x505C;&#x6B62;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;WR&#x200B;&#x200B;N&#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002; WRN&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x3001;&#x5EF6;&#x4F38;DNA&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;WRN&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x304C;MMS&#x307E;&#x305F;&#x306F;HU&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x4F38;&#x9577;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x4E2D;&#x306B;WRN&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;WRN&#x306F;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x3084;&#x8907;&#x88FD;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x50CD;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;WRN&#x5A92;&#x4ECB;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7121;&#x97F3;WRN&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x764C;&#x306E;DNA&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x8EE2;&#x5E30;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RecQ&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;WRN&#x306F;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x3084;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x902E;&#x6355;&#x5F8C;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;

&#xBCA0;&#xB974;&#xB108; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xC740; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xC131; &#xC720;&#xC804; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC554; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB0AC;&#xB2E4; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xACFC; &#xC870;&#xAE30; &#xB178;&#xD654;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xAC70;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC904; WRN &#xBCA0;&#xB974;&#xB108; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; S &#xC0C1; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB3D9;&#xC548;&#xACFC; &#xBA54; &#xD2F8; &#xBA54;&#xD0C4; &#xB41C; (MMS&#xB294;) DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; hydroxyurea (&#xD6C4;) &#xD6C4; &#xAC8C;&#xB188; &#xBCF5;&#xC81C; &#xACBD;&#xACE0;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;-&#xBCF5;&#xC81C; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE09;&#xC131; &#xACE0;&#xAC08; &#xACBD;&#xACE0;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC911;&#xC7AC;. &#xACBD;&#xACE0;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB098;&#xC774; &#xCC28;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC644;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC140; &#xD655;&#xC7A5;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xACBD;&#xACE0; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C; &#xAE38;&#xCB49;&#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; MMS &#xB610;&#xB294; &#xC8FC;&#xC11D; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD6C4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xAC1C;&#xC778;, &#xBED7;&#xC5B4; DNA &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xCD94;&#xC801;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC8C;&#xB188; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xACBD;&#xACE0;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xACBD;&#xACE0; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC774; &#xB098; &#xBCF5;&#xC81C; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xD6C4; &#xD3EC;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB188; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; WRN &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB354; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC131;&#xC778; &#xC554; &#xACBD;&#xACE0; &#xC2DD; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; DNA&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD654;&#xD559; &#xC694;&#xBC95;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC608;&#xCE21; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RecQ helicase &#xACBD;&#xACE0;&#xB294; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC774; &#xB098; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xD6C4; &#xC77C;&#xBC18; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El s&#xED;ndrome de Werner es una enfermedad autos&#xF3;mica recesiva, la inestabilidad gen&#xE9;tica y el s&#xED;ndrome de predisposici&#xF3;n al c&#xE1;ncer con las caracter&#xED;sticas del envejecimiento prematuro. Varias l&#xED;neas de evidencia sugieren que el s&#xED;ndrome de Werner WRN prote&#xED;na juega un papel en la replicaci&#xF3;n del ADN y la progresi&#xF3;n de la fase S. Con el fin de definir el papel exacto de la AVS en la replicaci&#xF3;n del genoma se analiz&#xF3; la cin&#xE9;tica del ciclo celular durante la divisi&#xF3;n celular normal y despu&#xE9;s de metil-metano-sulfonato (MMS) da&#xF1;os en el ADN o hidroxiurea (HU) mediada por la detenci&#xF3;n de la replicaci&#xF3;n tras el agotamiento agudo de AVS a partir de fibroblastos humanos . La p&#xE9;rdida de WRN notablemente extendido las c&#xE9;lulas el tiempo necesario para completar el ciclo de la c&#xE9;lula despu&#xE9;s de uno de estos tratamientos genot&#xF3;xicos. Adem&#xE1;s, el an&#xE1;lisis de replicaci&#xF3;n pista de fibras individuales, ADN estiradas mostr&#xF3; que el agotamiento WRN redujo significativamente la velocidad a la que las horquillas de replicaci&#xF3;n alargada in vivo despu&#xE9;s de tratamiento MMS o UH. Estos resultados establecen la importancia de la WRN durante la replicaci&#xF3;n del genoma, e indican que WRN act&#xFA;a para facilitar la progresi&#xF3;n tenedor despu&#xE9;s de da&#xF1;o en el ADN o la detenci&#xF3;n de replicaci&#xF3;n. Los datos proporcionan una base mecanicista para una mejor comprensi&#xF3;n de la WRN mediada por el mantenimiento de la estabilidad gen&#xF3;mica y para predecir los resultados de ADN de metas de la quimioterapia en c&#xE1;nceres en adultos que la expresi&#xF3;n de varios WRN silencio.

El RecQ helicasa WRN es necesaria para la progresi&#xF3;n normal de replicaci&#xF3;n Tenedor Despu&#xE9;s de da&#xF1;o al ADN o arresto Tenedor de replicaci&#xF3;n

&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x671F;&#x95F4;&#x7531;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x65E5;&#x76CA;&#x8F74;&#x7A81;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x4E0E;&#x808C;&#x8089;&#x63A5;&#x89E6;&#x540E;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x591A;&#x7CD6;&#x3002;&#x636E;&#x957F;&#x8BA4;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x805A;&#x7C7B;&#x5206;&#x6790;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; (AChRs) &#x5230;&#x65B0;&#x751F;&#x7A81;&#x89E6;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x524D;&#xFF0C;protosynaptic &#x7F8E;&#x6D32;&#x4EBA;&#x6743;&#x516C;&#x7EA6; &#x300B; &#x96C6;&#x7FA4;&#x524D;&#x5DF2;&#x5B58;&#x5728;&#x597D;&#x795E;&#x7ECF;&#x652F;&#x914D;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x4F5C;&#x7528;&#x6700;&#x7EC8;&#x5F52;&#x4E8E;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x661F;&#x706B;&#x4EA4;&#x4ED8; micropatterned &#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x6587;&#x5316; protosynaptic &#x7F8E;&#x6D32;&#x4EBA;&#x6743;&#x516C;&#x7EA6; &#x300B; &#x96C6;&#x7FA4;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;AChRs &#x6807;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x91D1;&#x73AF;&#x86C7;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x4E0D;&#x540C;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x6620;&#x50CF;&#x8D85;&#x8FC7; &gt; 24 h&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D; 4 h &#x91CD;&#x70B9;&#x5E94;&#x7528; (100 nM&#xFF09; &#x4F18;&#x5148;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7F8E;&#x6D32;&#x4EBA;&#x6743;&#x516C;&#x7EA6; &#x300B; &#x5728;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x66B4;&#x9732;&#x96C6;&#x7FA4;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x5265;&#x593A;&#x4E86;&#x4E0A;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C; 17%&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x589E;&#x52A0; AChRs &#x4F18;&#x5148;&#x5728;&#x96C6;&#x7FA4;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x66B4;&#x9732;&#xFF0C;&#x975E;&#x7FA4;&#x96C6;&#x9886;&#x57DF; 10%&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x70B9;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x523A;&#x6FC0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684; AChRs &#x805A;&#x5408;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x666E;&#x904D;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5404;&#x79CD;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x805A;&#x7C7B;&#x4E0E;&#x96C6;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x91CD;&#x70B9;&#x523A;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

Agrin is a proteoglycan secreted by the motor neuron's growing axon terminal upon contact with the muscle during embryonic development. It was long thought that agrin's role was to trigger the clustering of acetylcholine receptors (AChRs) to nascent synapse sites. However, agrin-predating, protosynaptic AChR clusters are present well before innervation in the embryo and in myotube cultures, yet no role has been conclusively ascribed to agrin. We used a microfluidic device to focally deliver agrin to protosynaptic AChR clusters in micropatterned myotube cultures. The distribution of AChRs labeled with fluorescent bungarotoxin was imaged at various time points over >24 h. We find that a 4-h focal application of agrin (100 nM) preferentially reduces AChR loss at agrin-exposed clusters by 17% relative to the agrin-deprived clusters on the same myotube. In addition, the focal application increases the addition of AChRs preferentially at the clusters by 10% relative to the agrin-exposed, noncluster areas. Taken together, these findings suggest that a focal agrin stimulus can play a key stabilizing role in the aggregation of AChRs at the early stages of synapse formation. This methodology is generally applicable to various developmental processes and cell types, including neurons and stem cells.

Localized acetylcholine receptor clustering dynamics in response to microfluidic focal stimulation with agrin.

Agrine est un prot&#xE9;oglycane s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9; par la borne du neurone moteur axone croissante lors du contact avec le muscle cours du d&#xE9;veloppement embryonnaire. On a longtemps pens&#xE9; que le r&#xF4;le de l&#x26;#39;agrine &#xE9;tait de d&#xE9;clencher le regroupement des r&#xE9;cepteurs de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine (AchR) aux sites synaptiques naissants. Toutefois, agrine-ant&#xE9;rieure, les grappes RACh protosynaptic sont pr&#xE9;sents bien avant l&#x26;#39;innervation de l&#x26;#39;embryon et dans les cultures de myotubes, mais aucun r&#xF4;le n&#x26;#39;a &#xE9;t&#xE9; attribu&#xE9; &#xE0; agrine concluante. Nous avons utilis&#xE9; un dispositif microfluidique &#xE0; focalement offrir agrine aux clusters RACh protosynaptic dans les cultures de myotubes micro&#xE9;lectrodes. La r&#xE9;partition des AchR marqu&#xE9;s avec bungarotoxine fluorescente a &#xE9;t&#xE9; imag&#xE9;e &#xE0; divers moments au cours&#x26;gt; 24 h. Nous constatons que la demande des 4-H focal de l&#x26;#39;agrine (100 nM) r&#xE9;duit la perte de pr&#xE9;f&#xE9;rence RACh &#xE0; grappes agrine-expos&#xE9;s de 17% par rapport aux grappes agrine-priv&#xE9;s sur le m&#xEA;me myotubes. En outre, l&#x26;#39;application focale augmente l&#x26;#39;addition de AchR pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement &#xE0; des grappes de 10% par rapport aux AGRIN expos&#xE9;s, les zones non-cluster. Pris ensemble, ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent qu&#x26;#39;un stimulus agrine focale peut jouer un r&#xF4;le de stabilisation essentiel dans l&#x26;#39;agr&#xE9;gation des AchR d&#xE8;s les premiers stades de formation de la synapse. Cette m&#xE9;thodologie est g&#xE9;n&#xE9;ralement applicable &#xE0; divers processus de d&#xE9;veloppement et de types cellulaires, y compris les neurones et les cellules souches.

Localis&#xE9;es Dynamics r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine Clustering en r&#xE9;ponse aux stimulations focale microfluidique avec agrine

Agrin ist ein Proteoglycan abgesondert von der Motoneuron wachsenden Axon terminal beim Kontakt mit der Muskel w&auml;hrend der Embryonalentwicklung. Es war lange fand dieser Agrin Rolle ausl&ouml;sen, das clustering von Acetylcholin-Rezeptoren (AChRs) entstehende Synapse Websites. Agrin-datierten so, Protosynaptic AChR Clustern vor Innervation im Embryo und in Myotube Kulturen vorhanden sind, jedoch keine Rolle hat schl&uuml;ssig Agrin zugeschrieben worden. Wir haben ein mikrofluidische Ger&auml;t fokussierend Agrin Protosynaptic AChR Clustern in Micropatterned Myotube Kulturen liefern. Die Verteilung der AChRs mit fluoreszierenden Bungarotoxin beschriftet wurde zu verschiedenen Zeitpunkten abgebildet, &uuml;ber &gt; 24 h. Wir finden, eine 4-h-fokale-Anwendung der Agrin (100 nM) bevorzugt reduziert AChR-Loss bei Agrin gemachten Clustern von 17 % bezogen auf die Agrin beraubt-Cluster auf dem gleichen Myotube. Dar&uuml;ber hinaus erh&ouml;ht die fokale Anwendung den Zusatz von AChRs bevorzugt an die Cluster gegen&uuml;ber den Agrin-ausgesetzt, clusterfremden Bereichen um 10 %. Diese Befunde zufolge zusammengenommen ein fokale Agrin Reiz ein Schl&uuml;ssels stabilisierende Rolle in der Aggregation von AChRs in den fr&uuml;hen Stadien der Synapse-Formation spielen kann. Diese Methodik ist im Allgemeinen f&uuml;r die verschiedenen Entwicklungsprozesse und Zelltypen, einschlie&szlig;lich Neuronen und Stammzellen.

Lokalisierte Acetylcholinrezeptor Clusterbildung Dynamik als Reaktion auf mikrofluidische fokale Stimulation mit Agrin.

Elisa &egrave; un proteoglicano secernuto dalla crescente terminale a contatto con il muscolo di assone del motoneurone durante lo sviluppo embrionale. Si &egrave; pensato a lungo che ruolo di Elisa, che &egrave; stato a scatenare il clustering dei recettori dell&#39;acetilcolina (AChRs) a siti di sinapsi nascente. Tuttavia, Elisa-antecedenti, protosynaptic AChR cluster sono presenti ben prima di innervazione nell&#39;embrione e nel myotube culture, eppure nessun ruolo &egrave; stata definitivamente assegnata a Elisa. Abbiamo usato un dispositivo microfluidico per consegnare Computerized Elisa protosynaptic AChR ammassi in micropatterned myotube culture. La distribuzione di AChRs etichettato con bungarotoxin fluorescente &egrave; stato ripreso in vari punti del tempo sopra &amp;gt; 24 h. Troviamo che un&#39;applicazione focale 4-h di Elisa (100 nM) preferenzialmente riduce la perdita di AChR a grappoli esposti Elisa del 17% rispetto al cluster Elisa-privato sul myotube stesso. Inoltre, l&#39;applicazione focale aumenta l&#39;aggiunta di AChRs preferenzialmente presso il cluster del 10% rispetto le zone esposte al Elisa, cluster. Presi insieme, questi risultati suggeriscono che uno stimolo Elisa focale pu&ograve; giocare una chiave stabilizzante ruolo nell&#39;aggregazione di AChRs nelle prime fasi della formazione di sinapsi. Questa metodologia &egrave; generalmente applicabile a vari processi di sviluppo e i tipi di cellule, tra cui i neuroni e le cellule staminali.

Localizzata del recettore acetilcolina clustering dynamics in risposta alla stimolazione focale microfluidica con Elisa.

&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x6642;&#x306B;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x9577;&#x3044;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x751F;&#x671F;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;AChRs&#xFF09;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; - &#x3088;&#x308A;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;protosynaptic&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x80DA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7B4B;&#x7BA1;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x652F;&#x914D;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5E30;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9650;&#x5C40;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x7B4B;&#x7BA1;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;protosynaptic&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x306B;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x30D6;&#x30F3;&#x30AC;&#x30ED;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;AChRs&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x3001;&#x26;gt; 24&#x6642;&#x9593;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x753B;&#x50CF;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;100 nm&#xFF09;&#x306E;4&#x6642;&#x9593;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x7B4B;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x306E;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x596A;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3078;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;17&#xFF05;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3067;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7126;&#x70B9;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x975E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;10&#xFF05;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3067;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;AChRs&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x7126;&#x70B9;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;AChRs&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x767A;&#x751F;&#x904E;&#x7A0B;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D41;&#x4F53;&#x7126;&#x70B9;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;

Agrin proteoglycan &#xBAA8;&#xD130; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xCD95; &#xC0AD; &#xADFC;&#xC721; &#xC811;&#xCD09; &#xC2DC; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBD84; &#xBE44; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; agrin&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (AChRs)&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB0C5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC2E4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC624;&#xB798; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, agrin predating protosynaptic AChR &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC874;&#xC7AC; innervation &#xC804;&#xC5D0; &#xBC30;&#xC544;&#xC640; myotube &#xBB38;&#xD654;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; agrin&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Focally agrin protosynaptic micropatterned myotube &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; AChR &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD615;&#xAD11; bungarotoxin&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; Achrs&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xC774;&#xC0C1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370; &amp;gt; 24 h. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; 4 h agrin&#xC758; &#xCD08;&#xC810; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; (100 nM) &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; myotube&#xC5D0; agrin&#xC744; &#xBC15;&#xD0C8; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; 17 %agrin &#xB178;&#xCD9C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; AChR &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCD08;&#xC810; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC99D;&#xAC00; &#xBE44;&#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC9C0;&#xC5ED; agrin &#xB178;&#xCD9C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; 10% &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; AChRs &#xCD94;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD08;&#xC810; agrin &#xC790;&#xADF9; &#xD0A4; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; Achrs&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; agrin&#xC640; &#xBBF8;&#xC138; &#xCD08;&#xC810; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD559; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;.

Agrin es un proteoglicano secretado por terminal de la neurona motora del ax&#xF3;n en crecimiento al entrar en contacto con el m&#xFA;sculo durante el desarrollo embrionario. Mucho tiempo se pens&#xF3; que el papel de agrina era para activar el agrupamiento de los receptores de acetilcolina (AChR) a los sitios de sinapsis nacientes. Sin embargo, agrina-depredador, las agrupaciones protosynaptic AChR est&#xE1;n presentes mucho antes de inervaci&#xF3;n en el embri&#xF3;n y en cultivos de miotubos, sin embargo, ning&#xFA;n papel ha sido atribuido a agrina concluyente. Se utiliz&#xF3; un dispositivo de microfluidos para entregar a las agrupaciones focalmente agrina AChR protosynaptic en cultivos de miotubos micropatterned. La distribuci&#xF3;n de AChR etiquetados con bungarotoxina fluorescente fue fotografiada en varios puntos de tiempo durante&#x26;gt; 24 h. Nos parece que una aplicaci&#xF3;n de 4-H focal de agrina (100 nm) preferentemente reduce la p&#xE9;rdida de AChR en grupos agrina expuestos en un 17% en relaci&#xF3;n con los grupos privados-en el agrina miotubo misma. Adem&#xE1;s, la aplicaci&#xF3;n focal aumenta la adici&#xF3;n de AChR preferentemente en los conglomerados en un 10% en relaci&#xF3;n con los AGRIN las &#xE1;reas expuestas, sin cl&#xFA;ster. En conjunto, estos hallazgos sugieren que un est&#xED;mulo agrina focal puede jugar un papel clave en la estabilizaci&#xF3;n de la agregaci&#xF3;n de AChR en las primeras etapas de la formaci&#xF3;n de sinapsis. Esta metodolog&#xED;a es generalmente aplicable a diversos procesos de desarrollo y tipos de c&#xE9;lulas, incluyendo las neuronas y c&#xE9;lulas madre.

Din&#xE1;mica del receptor de acetilcolina localizados cl&#xFA;steres en respuesta al est&#xED;mulo de microfluidos focal con Agrin

&#x8F6F;&#x523B;&#x8680;&#x7684;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7; (PDMS) &#x5F39;&#x6027;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x542F;&#x7528;&#x4E86;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x5236;&#x9020;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x88C5;&#x7F6E;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x62C5;&#x5FE7;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5BF9;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x8868;&#x9762;&#x5438;&#x9644;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5B54;&#x9699;&#x7387;&#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;2 &#x5C0F;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x5438;&#x9644; (&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20;&#x548C; 5-(&#x548C; 6-) carboxytetramethylrhodamine (TMR)) &#x5BF9;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x8868;&#x9762;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x548C;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5438;&#x9644;&#x5DF2;&#x88AB;&#x76F8;&#x6BD4; 2 &#x4F20;&#x7EDF;&#x886C;&#x5E95;&#xFF1A; &#x73BB;&#x7483;&#x548C;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x3002;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x517B;&#x751F;&#x4E2D;&#x5438;&#x9644;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5411;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x5438;&#x9644;&#x4E0E;&#x89E3;&#x5438;&#x7684;&#x6D41;&#x91CF;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684; 2 &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E5F;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x6700;&#x4F4E;&#x9650;&#x5EA6;&#x5438;&#x9644;&#x7684;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027;&#x590D;&#x5408;&#x9499;&#x9EC4;&#x7EFF;&#x7D20;&#x5BF9;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#xFF0C;&#x800C;&#x66F4;&#x4E3A;&#x758F;&#x6C34;&#x6D85;&#x5438;&#x9644;&#x5728;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x5411;&#x4E0A;&#x81F3; 4 &#x500D;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x6216;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x3002;&#x5728;&#x6D41;&#x52A8;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5438;&#x6982;&#x51B5;&#x548C; desorbed &#x590D;&#x5408;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x964D;&#x5230;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x8BA1;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73; 10-42 s &#x89E3;&#x5438;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E38;&#x6570;&#xFF09; &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x5728;&#x6700;&#x574F;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6D85; 4 &#x5206;&#x949F;&#x66B4;&#x9732;&#x540E; 4 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6D17;&#x5BFC;&#x81F4;&#x590D;&#x5408;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5FAE;&#x964D;&#x5230;&#x4F4E;&#x4E8E; 2 x 10(-5) &#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x6D53;&#x5EA6;&#x503C;&#x3002;

&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x590D;&#x5408;&#x5438;&#x9644;&#x5728;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;

Soft lithography of polydimethylsiloxane (PDMS), an elastomeric polymer, has enabled rapid and inexpensive fabrication of microfluidic devices for various biotechnology applications. However, concerns remain about adsorption of compounds on PDMS surfaces because of its porosity and hydrophobicity. Here, the adsorption of 2 small fluorescent dyes of different hydrophobicity (calcein and 5- (and 6-)carboxytetramethylrhodamine (TMR)) on PDMS surface has been systematically characterized, and PDMS adsorption has been compared with 2 traditional substrates: glass and polystyrene. To characterize adsorption in a regimen that is more relevant to microfluidic applications, the adsorption and desorption of the 2 compounds in PDMS microfluidic channels under flow conditions were also studied. Results showed that there was minimal adsorption of the hydrophilic compound calcein on PDMS, whereas the more hydrophobic TMR adsorbed on PDMS up to 4 times of that on glass or polystyrene. Under flow conditions, the desorption profiles and times needed to drop desorbed compound concentrations to negligible levels (desorption time constant, 10-42 s) were characterized. In the worst case scenario, after a 4-min exposure to TMR, 4 min of continuous wash resulted in compound concentrations in the microchannels to drop to values below 2 x 10(- 5) of the initial concentration.

PDMS compound adsorption in context.

Lithographie douce de polydim&#xE9;thylsiloxane (PDMS), un polym&#xE8;re &#xE9;lastom&#xE8;re, a permis la fabrication rapide et peu co&#xFB;teuse des dispositifs microfluidiques pour diverses applications de la biotechnologie. Toutefois, des inqui&#xE9;tudes subsistent quant adsorption des compos&#xE9;s sur des surfaces de PDMS en raison de sa porosit&#xE9; et d&#x26;#39;hydrophobicit&#xE9;. Ici, l&#x26;#39;adsorption de 2 petites colorants fluorescents de diff&#xE9;rence de caract&#xE8;re hydrophobe (calc&#xE9;ine et 5 - (et 6 -) carboxyt&#xE9;tram&#xE9;thylrhodamine (TMR)) sur la surface de PDMS a &#xE9;t&#xE9; syst&#xE9;matiquement caract&#xE9;ris&#xE9;, et PDMS d&#x26;#39;adsorption a &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9; avec 2 supports traditionnels: le verre et le polystyr&#xE8;ne. Afin de caract&#xE9;riser l&#x26;#39;adsorption dans un r&#xE9;gime qui est plus pertinent pour les applications microfluidiques, l&#x26;#39;adsorption et la d&#xE9;sorption des compos&#xE9;s dans 2 canaux microfluidiques en PDMS dans des conditions d&#x26;#39;&#xE9;coulement ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s. Les r&#xE9;sultats ont montr&#xE9; qu&#x26;#39;il y avait un minimum d&#x26;#39;adsorption de la calc&#xE9;ine compos&#xE9; hydrophile sur PDMS, alors que le TMR plus hydrophobe PDMS adsorb&#xE9; sur jusqu&#x26;#39;&#xE0; 4 fois sup&#xE9;rieure &#xE0; celle sur le verre ou le polystyr&#xE8;ne. Dans des conditions d&#x26;#39;&#xE9;coulement, les profils de d&#xE9;sorption et les d&#xE9;lais n&#xE9;cessaires pour d&#xE9;poser concentrations des compos&#xE9;s d&#xE9;sorb&#xE9;s &#xE0; des niveaux n&#xE9;gligeables (d&#xE9;sorption constante de temps, 10-42 s) ont &#xE9;t&#xE9; caract&#xE9;ris&#xE9;s. Dans le pire des cas, apr&#xE8;s une exposition de 4 minutes &#xE0; TMR, 4 min de lavage continue a entra&#xEE;n&#xE9; des concentrations de compos&#xE9;s dans les microcanaux tomber &#xE0; des valeurs inf&#xE9;rieures &#xE0; 2 x 10 (- 5) de la concentration initiale.

Compos&#xE9; PDMS adsorption dans son contexte

Weiche Lithographie von Polydimethylsiloxan (PDMS), eine Elastomere Polymer, hat schnelle und kosteng&uuml;nstige Herstellung der Microfluidic Ger&auml;te f&uuml;r verschiedene Anwendungen der Biotechnologie aktiviert. Bleiben jedoch Bedenken &uuml;ber die Adsorption von Verbindungen auf PDMS Oberfl&auml;chen wegen seiner Porosit&auml;t und Hydrophobie. Hier, die Adsorption von 2 kleinen Leuchtstofff&auml;rbungen von verschiedenen Hydrophobie (Calcein und 5 (und 6) Carboxytetramethylrhodamine (TMR)) auf PDMS Oberfl&auml;che ist systematisch, und gepr&auml;gt PDMS Adsorption wurde verglichen mit herk&ouml;mmlichen Substraten 2: Glas und Polystyrol. Zur Charakterisierung von Adsorption in eine Therapie, die mehr wurden f&uuml;r mikrofluidische Anwendungen, die Adsorption und Desorption der 2 Verbindungen in PDMS mikrofluidische Kan&auml;le unter Str&ouml;mungsverh&auml;ltnisse auch untersucht. Ergebnisse zeigten, dass es minimal Adsorption von der hydrophilen zusammengesetzte Calcein auf PDMS, w&auml;hrend der mehr hydrophobe TMR auf PDMS bis zu 4 mal das auf Glas oder Polystyrol adsorbiert. Unter Str&ouml;mungsverh&auml;ltnisse zeichneten sich die Desorption Profile und oft gebraucht, desorbierte zusammengesetzte Konzentrationen zu vernachl&auml;ssigendes Niveau (Desorption Zeitkonstante, 10-42-s) zu l&ouml;schen. Im schlimmsten Fall ergab 4 min kontinuierliche W&auml;sche nach einer 4-min TMR, zusammengesetzte Konzentrationen in den Mikrokan&auml;len auf Werte unter 2 X 10(-5) der anf&auml;nglichen Konzentration fallen.

PDMS zusammengesetzte Adsorption in Zusammenhang.

Litografia morbido di polidimetilsilossano (PDMS), un polimero elastomerico, ha permesso a rapido e poco costoso fabbricazione di dispositivi microfluidici per varie applicazioni della biotecnologia. Tuttavia, preoccupazioni rimangono sull&#39;adsorbimento di composti su superfici PDMS a causa della sua porosit&agrave; e idrofobicit&agrave;. Qui, l&#39;adsorbimento di 2 piccoli tinture fluorescenti di diverso idrofobicit&agrave; (calceina e 5 (e 6-) carboxytetramethylrhodamine (TMR)) su PDMS superficie &egrave; stata sistematicamente caratterizzata, e adsorbimento PDMS &egrave; stato confrontato con 2 substrati tradizionali: vetro e polistirolo. Per caratterizzare l&#39;adsorbimento in un regime che &egrave; pi&ugrave; rilevanti per le applicazioni di microfluidica, l&#39;adsorbimento e desorbimento dei 2 composti canali microfluidici PDMS in condizioni di flusso sono stati anche studiati. I risultati hanno mostrato che non c&#39;era minimo adsorbimento della calceina composto idrofilico su PDMS, considerando che il TMR pi&ugrave; idrofobi adsorbito su PDMS fino a 4 volte di quella su vetro o polistirolo. In condizioni di flusso, i profili di desorbimento e tempi necessari a goccia desorbita con concentrazioni di composti a livelli trascurabili (costante di tempo di desorbimento, 10-42 s) sono stati caratterizzati. Nel peggiore dei casi, dopo un&#39;esposizione di 4 min a TMR, 4 min di lavaggio continuo ha portato in concentrazioni composti a microcanali di scendere a valori inferiori a 2 x 10(-5) della concentrazione iniziale.

PDMS compound adsorbimento nel contesto.

&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#xFF08;PDMS&#xFF09;&#x3001;&#x30A8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7528;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x88FD;&#x9020;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x61F8;&#x5FF5;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x591A;&#x5B54;&#x6027;&#x3068;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;PDMS&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;5  - &#xFF08;6  - &#xFF09;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#xFF08;TMR&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x5438;&#x7740;PDMS&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7684;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;PDMS&#x5438;&#x7740;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30B8;&#x30E1;&#x30F3;&#x3067;&#x5438;&#x7740;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;PDMS&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;2&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x3068;&#x8131;&#x7740;&#x3082;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3088;&#x308A;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;TMR&#x306F;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x3067;&#x305D;&#x306E;4&#x500D;&#x306B;PDMS&#x4E0A;&#x306B;&#x5438;&#x7740;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PDMS&#x4E0A;&#x306B;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x7121;&#x8996;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#xFF08;&#x8131;&#x7740;&#x6642;&#x5B9A;&#x6570;&#x3001;10&#x304B;&#x3089;42 s&#xFF09;&#x306B;&#x8131;&#x96E2;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8131;&#x96E2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; -  5&#xFF09;&#x521D;&#x671F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6700;&#x60AA;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30EA;&#x30AA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TMR&#x301C;4&#x5206;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x3001;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D17;&#x6D44;&#x306E;4&#x5206;&#xD7;10 2&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x5024;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;PDMS&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5438;&#x7740;

Polydimethylsiloxane (PDMS) &#xD0C4;&#xC131; &#xC911;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8; &#xB9AC;&#xC18C; &#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBA85; &#xACF5;&#xD559; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xC138; &#xC18C;&#xC790;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xB834; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC791;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC6B0;&#xB824;&#xB294; &#xB2E4;&#xACF5;&#xC131;&#xACFC; hydrophobicity PDMS &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD761;&#xCC29;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xB2E4;&#xB978; hydrophobicity&#xC758; 2 &#xC791;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD761;&#xCC29; (calcein &#xBC0F; 5-(&#xACE0; 6-) carboxytetramethylrhodamine (TMR))&#xC5D0;&#xC11C; PDMS &#xD45C;&#xBA74; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC0F; PDMS &#xD761;&#xCC29; 2 &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xC720;&#xB9AC;, &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C;. &#xB354; &#xCC98;&#xBC29;&#xC5D0; &#xD761;&#xCC29;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD761;&#xCC29; &#xBC0F; &#xD0C8; &#xCC29; &#xD750;&#xB984; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; PDMS &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758;&#xB3C4; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB354; &#xC18C;&#xC218; TMR adsorbed PDMS&#xC5D0; &#xCD5C;&#xB300;&#xB97C; 4 &#xBC88;&#xC758; &#xC720;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C;&#xC5D0; &#xBC18;&#xD574; PDMS&#xC5D0; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; calcein&#xC758; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xD761;&#xCC29; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD750;&#xB984; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218;&#xC900; (&#xD0C8; &#xCC29; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xC218;, 10-42 s) desorbed &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB4DC;&#xB86D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xD0C8; &#xCC29; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC545;&#xC758; &#xC2DC;&#xB098;&#xB9AC;&#xC624;&#xB294; TMR&#xC5D0; 4 &#xBD84; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC138;&#xCC99;&#xC758; 4 &#xBD84;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xAC00; &#xCD08;&#xAE30; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; 2 x 10(-5) &#xC544;&#xB798; &#xAC12;&#xC744; microchannels&#xC5D0;&#xC11C;.

PDMS &#xBCF5;&#xD569; &#xD761;&#xCC29; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C;.

Litograf&#xED;a suave de polidimetilsiloxano (PDMS), un pol&#xED;mero elast&#xF3;mero, ha permitido la fabricaci&#xF3;n r&#xE1;pida y barata de dispositivos de microfluidos para diversas aplicaciones de la biotecnolog&#xED;a. Sin embargo, existen dudas sobre la adsorci&#xF3;n de los compuestos en las superficies de PDMS, debido a su porosidad y la hidrofobia. Aqu&#xED;, la adsorci&#xF3;n de 2 tintes fluorescentes peque&#xF1;as de hidrofobicidad diferente (calce&#xED;na y 5 - (y 6 -) carboxytetramethylrhodamine (TMR)) en la superficie de PDMS se ha caracterizado de forma sistem&#xE1;tica, y la adsorci&#xF3;n de PDMS se ha comparado con 2 sustratos tradicionales: vidrio y poliestireno. Para la caracterizaci&#xF3;n de adsorci&#xF3;n en un r&#xE9;gimen que es m&#xE1;s relevante para las aplicaciones de microflu&#xED;dica, la adsorci&#xF3;n y desorci&#xF3;n de los 2 compuestos de PDMS canales de microfluidos bajo condiciones de flujo tambi&#xE9;n fueron estudiados. Los resultados mostraron que no hab&#xED;a un m&#xED;nimo de adsorci&#xF3;n de la calce&#xED;na compuesto hidr&#xF3;filo en PDMS, mientras que la TMR m&#xE1;s hidr&#xF3;fobo adsorbe en PDMS hasta 4 veces de que sobre vidrio o poliestireno. Bajo condiciones de flujo, los perfiles de desorci&#xF3;n y los tiempos necesarios para colocar desorbidos concentraci&#xF3;n de estos compuestos a niveles insignificantes (tiempo de desorci&#xF3;n, 10-42 s) se han caracterizado. En el peor de los casos, despu&#xE9;s de una exposici&#xF3;n 4-min a TMR, 4 min de lavado continuo result&#xF3; en concentraciones de compuestos en los microcanales a caer a valores inferiores a 2 x 10 (- 5) de la concentraci&#xF3;n inicial.

PDMS compuesto de adsorci&#xF3;n en el contexto

&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x4E8E;&#x534F;&#x8BAE;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x53D7;&#x5230;&#x6B22;&#x8FCE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5168;&#x7403;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C;&#x8F68;&#x8FF9;-&#x7279;&#x5B9A;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x534F;&#x8BAE;&#x5229;&#x7528;&#x7EB3;&#x5165;&#x6838;&#x82F7;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x5728; DNA &#x590D;&#x5236;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x663E;&#x793A;&#x62C9;&#x4F38;&#x7684; DNA &#x6807;&#x672C;&#x548C;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x73BB;&#x7483;&#x4E0A;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x6B64;&#x5904;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E00;&#x4E2A;&#x62C9;&#x4F38;&#x5E76;&#x6355;&#x83B7;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x590D;&#x5236;&#x5206;&#x6790;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x6B64;&#x5E73;&#x53F0;&#x7531;&#x4E09;&#x9762;&#xFF0C;3 &#x6216; 4 microm &#x9AD8;&#x3001; &#x5BBD;&#x5EA6;&#x53EF;&#x53D8;&#x7684;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x8F6F;&#x5149;&#x523B;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x634F;&#x9020;&#x4ECE;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#x548C;&#x7845;&#x70F7;&#x6539;&#x6027;&#x73BB;&#x7483;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x53EF;&#x9006;&#x5BC6;&#x5C01;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x7AEF;&#x7684;&#x5E76;&#x884C;&#x9635;&#x5217;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5FAE;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x5F20;&#x529B;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x88C5;&#x8F7D;&#x3001; &#x62C9;&#x4F38;&#x548C;&#x73BB;&#x7483; coverslip &#x6C89;&#x79EF;&#x4ECE;&#x5FAE;&#x5347;&#x89C4;&#x6A21; DNA &#x6837;&#x672C;&#x7684; DNA&#x3002;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x6027;&#x548C;&#x53EF;&#x6269;&#x5C55;&#x6027;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5E73;&#x53F0;&#x5E94;&#x4FBF;&#x5229;&#x4F7F;&#x7528;&#x4ECE;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8D44;&#x6599;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x5C0F;&#x6837;&#x672C;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8F85;&#x52A9;&#x5206;&#x6790;&#x590D;&#x5236;&#x7684; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x3002;

Single molecule-based protocols have been gaining popularity as a way to visualize DNA replication at the global genomic- and locus-specific levels. These protocols take advantage of the ability of many organisms to incorporate nucleoside analogs during DNA replication, together with a method to display stretched DNA on glass for immunostaining and microscopy. We describe here a microfluidic platform that can be used to stretch and to capture labeled DNA molecules for replication analyses. This platform consists of parallel arrays of three-sided, 3- or 4-microm high, variable-width capillary channels fabricated from polydimethylsiloxane by conventional soft lithography, and of silane-modified glass coverslips to reversibly seal the open side of the channels. Capillary tension in these microchannels facilitates DNA loading, stretching and glass coverslip deposition from microliter-scale DNA samples. The simplicity and extensibility of this platform should facilitate DNA replication analyses using small samples from a variety of biological and clinical sources.

Microfluidic-assisted analysis of replicating DNA molecules.

Simple &#xE0; base de mol&#xE9;cules protocoles ont &#xE9;t&#xE9; gagne en popularit&#xE9; comme un moyen de visualiser r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN aux niveaux mondial en g&#xE9;nomique et sp&#xE9;cifiques de locus. Ces protocoles de profiter de la capacit&#xE9; de nombreux organismes &#xE0; int&#xE9;grer analogues nucl&#xE9;osidiques lors de la r&#xE9;plication d&#x26;#39;ADN, ainsi qu&#x26;#39;une m&#xE9;thode pour afficher l&#x26;#39;ADN &#xE9;tir&#xE9; sur verre pour immunomarquage et microscopie. Nous d&#xE9;crivons ici une plate-forme microfluidique qui peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour &#xE9;tirer et pour capter les mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ADN marqu&#xE9;s pour les analyses de r&#xE9;plication. Cette plate-forme est constitu&#xE9; de rang&#xE9;es parall&#xE8;les de trois c&#xF4;t&#xE9;s, 3 - ou 4-microm&#xE8;tre &#xE9;lev&#xE9;es, de largeur variable canaux capillaires fabriqu&#xE9;s &#xE0; partir de polydim&#xE9;thylsiloxane par lithographie molle classique, et de lamelles de verre silyl&#xE9;s &#xE0; sceller de mani&#xE8;re r&#xE9;versible le c&#xF4;t&#xE9; ouvert des profil&#xE9;s. La tension capillaire dans ces microcanaux facilite le chargement d&#x26;#39;ADN, d&#x26;#39;&#xE9;tirement et de d&#xE9;p&#xF4;t lamelle de verre &#xE0; partir d&#x26;#39;&#xE9;chantillons d&#x26;#39;ADN microlitre &#xE9;chelle. La simplicit&#xE9; et l&#x26;#39;extensibilit&#xE9; de cette plate-forme devrait faciliter les analyses r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN en utilisant de petits &#xE9;chantillons d&#x26;#39;une vari&#xE9;t&#xE9; de sources biologiques et cliniques.

Microfluidique assist&#xE9;e par analyse de mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ADN R&#xE9;plication

Einzelne Molek&uuml;l-basierte Protokolle haben gewinnt Popularit&auml;t als eine M&ouml;glichkeit, DNA-Replikation auf den globalen genomische und Locus-spezifische Ebenen sichtbar zu machen. Diese Protokolle nutzen die F&auml;higkeit vieler Organismen Nukleosid-Analoga w&auml;hrend der DNA-Replikation, zusammen mit einer Methode zum Anzeigen von gestreckten DNA auf Glas f&uuml;r Paraffinschnitten und Mikroskopie zu &uuml;bernehmen. Wir beschreiben hier eine mikrofluidische-Plattform, die zu dehnen und die Erfassung von beschrifteten DNA-Molek&uuml;le f&uuml;r Replikation Analysen verwendet werden kann. Diese Plattform besteht aus parallelen Arrays dreiseitig, 3 oder 4-Microm hoch, variabler Breite Kapillar Kan&auml;le aus Polydimethylsiloxan durch konventionelle weiche Lithographie hergestellt und Silan-modifizierte Glasdeckgl&auml;ser reversibel die offene Seite der Kan&auml;le zu versiegeln. Kapillare Spannung in diese Mikrokan&auml;len erleichtert DNA beladen, stretching und Glas Deckglas Ablagerung von Mikroliter-Skala-DNA-Proben. Der Einfachheit und Erweiterbarkeit der Plattform sollte DNA-Replikation-Analysen mit kleine Proben aus einer Vielzahl von biologischen und klinischen Quellen erleichtern.

Microfluidic-gest&uuml;tzte Analyse der Replikation von DNA-Molek&uuml;len.

Protocolli basati su molecola singoli sono state guadagnando la popolarit&agrave; come un modo per visualizzare la replicazione del DNA a livello globale genomico e locus-specifiche. Questi protocolli di sfruttano la capacit&agrave; di molti organismi di incorporare analoghi nucleosidici durante la replicazione del DNA, insieme a un metodo per visualizzare DNA allungato sul vetro per microscopia e immunostaining. Descriviamo qui una piattaforma microfluidica che pu&ograve; essere utilizzata per allungare e acquisire classificati come molecole di DNA per analisi di replica. Questa piattaforma &egrave; costituita da matrici parallele di tre lati, 3 o 4 microm alto, larghezza variabile capillare canali fabbricate da polidimetilsilossano da litografia morbida convenzionale e delle lamelle di vetro silano modificato per sigillare reversibile lato aperto dei canali. Tensione capillare in questi microcanali facilita il caricamento, stretching e vetro vetrino coprioggetti deposizione da campioni di DNA su scala microlitro di DNA. La semplicit&agrave; e l&#39;estensibilit&agrave; di questa piattaforma dovrebbe facilitare l&#39;analisi di replica del DNA usando piccoli campioni da una variet&agrave; di fonti biologiche e cliniche.

Analisi assistita microfluidica di replica delle molecole di DNA.

&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x6C17;&#x3092;&#x96C6;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x7528;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x4F38;&#x5F35;DNA&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x4E2D;&#x306B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30B7;&#x30C9;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;DNA&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x6355;&#x6349;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x653E;&#x5074;&#x3092;&#x5BC6;&#x5C01;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;4&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30EA;&#x30BD;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x88FD;&#x9020;&#x9AD8;&#x3001;&#x53EF;&#x5909;&#x5E45;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D4;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;&#x5909;&#x6027;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E; - &#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;3&#x9762;&#x3001;3&#x306E;&#x4E26;&#x5217;&#x914D;&#x5217;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6BDB;&#x7BA1;&#x5F35;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;DNA&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x5806;&#x7A4D;&#x3001;DNA&#x30ED;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5358;&#x7D14;&#x3055;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x81E8;&#x5E8A;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

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&#xBCF5;&#xC81C; DNA &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Individuales basados &#x200B;&#x200B;en mol&#xE9;culas protocolos han ido ganando popularidad como una manera de visualizar la replicaci&#xF3;n del ADN a nivel gen&#xF3;mico y globales espec&#xED;ficas de locus. Estos protocolos tomar ventaja de la capacidad de muchos organismos para incorporar los an&#xE1;logos de nucle&#xF3;sidos durante la replicaci&#xF3;n del ADN, junto con un m&#xE9;todo para mostrar ADN estirada sobre vidrio para inmunotinci&#xF3;n y microscop&#xED;a. Se describe aqu&#xED; una plataforma de microfluidos que se puede utilizar para estirar y para capturar las mol&#xE9;culas de ADN marcadas para los an&#xE1;lisis de replicaci&#xF3;n. Esta plataforma consta de matrices paralelas de tres caras, 3 - o 4 micras-altos, de ancho variable canales capilares fabricados a partir de polidimetilsiloxano por litograf&#xED;a blanda convencional, y de cubreobjetos de vidrio silano-modificado para sellar reversiblemente el lado abierto de los canales. Tensi&#xF3;n capilar en estos microcanales facilita una carga de ADN, que se extiende y la deposici&#xF3;n de cubreobjetos de vidrio a partir de muestras de ADN escala microlitro. La simplicidad y la extensibilidad de esta plataforma debe facilitar el an&#xE1;lisis de la replicaci&#xF3;n del ADN utilizando muestras peque&#xF1;as de una variedad de fuentes biol&#xF3;gicas y cl&#xED;nicas.

Microfluidos con ayuda de an&#xE1;lisis de las mol&#xE9;culas de ADN Replicar

&#x751F;&#x5316;&#x63D0;&#x793A;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x4E2D;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x89E3;&#x5F00;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6700;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8303;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5F15;&#x51FA;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x6307;&#x5BFC;&#x5229;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6E90;&#x7684;&#x6E10;&#x53D8;&#x8109;&#x52A8;&#x5438;&#x7BA1;&#x3001; &#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x52A0;&#x8F7D;&#x7684;&#x51DD;&#x80F6;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x65F6;&#x53D8;&#x7684;&#x6E10;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5DEE;&#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x7684;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x5F88;&#x9002;&#x5408;&#x5B66;&#x4E60;&#x6210;&#x957F;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x6709;&#x5141;&#x8BB8;&#x751F;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3001; &#x590D;&#x6742;&#x6E10;&#x53D8;&#x6577;&#x5206;&#x5B50;&#x3001; &#x5FAE;&#x901A;&#x9053;&#x6D41;&#x81F4;&#x526A;&#x529B;&#x7684;&#x5C31;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E3A;&#x53EF;&#x884C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x8DB3;&#x591F;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x500D;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&quot;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x826F;&#x6027;&quot;&#x6E10;&#x53D8;&#x53D1;&#x7535;&#x673A;&#x8BBE;&#x5907;&#x4E2D;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5F00;&#x653E;&#x7684;&#x5206;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7684;&#x6577;&#x5206;&#x5B50;&#x4E3A;&#x81F3;&#x5C11; 6 h &#x4E0E;&#x526A;&#x5E94;&#x529B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x8FD8;&#x5141;&#x8BB8;&#x81F3;&#x5C11; 2 &#x5468;&#x5174;&#x65FA;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x6E10;&#x53D8;&#x65F6;&#x7684;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x6E10;&#x53D8;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x662F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x786E;&#x4FDD;&#x4E00;&#x5957;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x66F2;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3002;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x6536;&#x8D2D;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x5E73;&#x53F0;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6240;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x8868;&#x9762;&#x5747;&#x5300;&#x6027;&#x540E;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x751A;&#x81F3;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x578B;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x63D0;&#x53D6;&#x6709;&#x4EF7;&#x503C;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x4E3A; netrin &#x4F53;&#x5916;&#x6577;&#x6E10;&#x53D8;&#xFF0C;&#x539F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF08;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x76AE;&#x5C42; E14) &#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x65AD;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570; (&sim;73%) &#x5728;&#x6E10;&#x53D8;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x671F;&#x95F4;&#x5EF6;&#x957F;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x503E;&#x5411; netrin &#x6D88;&#x606F;&#x6765;&#x6E90;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;netrin &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76F8;&#x540C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;

&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#x56E0;&#x7D20;&#x5BF9;&#x53CD;&#x5E94;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x826F;&#x6027;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x68AF;&#x5EA6;&#x751F;&#x6210;&#x5668;&#x3002;

Investigation of biochemical cues in isolation or in combinations in cell culture systems is crucial for unraveling the mechanisms that govern neural development and repair. The most widely used experimental paradigms that elicit axon guidance in vitro utilize as the source of the gradient a pulsatile pipette, transfected cells, or a loaded gel, producing time-varying gradients of poor reproducibility which are not well suited for studying slow-growing mammalian cells. Although microfluidic device design have allowed for generating stable, complex gradients of diffusible molecules, the flow-induced shear forces in a microchannel has made it impossible to maintain viable mammalian neuronal cultures for sufficiently long times. In this paper, we describe axonal responses of mouse cortical neurons in a "neuron-benign" gradient-generator device based on an open chamber that can establish highly stable gradients of diffusible molecules for at least 6 h with negligible shear stress, and also allows the neurons to thrive for at least 2 weeks. Except for the period when the gradient is on, the cells in the gradient are under the same conditions as the cells on the control surfaces, which ensure a consistent set of micro-environmental variables. The gradient stability and uniformity over the cell culture surface achieved by the device, together with our software platform for acquiring, post-processing and quantitatively analyzing the large number of images allowed us to extract valuable information even from small datasets. We report a directed response of primary mammalian neurons (from E14 embryonic mice cortex) to a diffusible gradient of netrin in vitro. We infer from our studies that a large majority (âˆ¼73%) of the neurons that extend axons during the gradient application grow towards the netrin source, and our data analysis also indicates that netrin acts as a growth factor for this same population of neurons.

A neuron-benign microfluidic gradient generator for studying the response of mammalian neurons towards axon guidance factors.

Enqu&#xEA;te sur les indices biochimiques de fa&#xE7;on isol&#xE9;e ou en combinaison dans les syst&#xE8;mes de culture cellulaire est essentielle pour d&#xE9;m&#xEA;ler les m&#xE9;canismes qui r&#xE9;gissent le d&#xE9;veloppement neural et la r&#xE9;paration. Les paradigmes exp&#xE9;rimentaux les plus couramment utilis&#xE9;s qui provoquent le guidage axonal in vitro utilisent comme source de la pente d&#x26;#39;une pipette pulsatile, les cellules transfect&#xE9;es, ou un gel charg&#xE9;, la production variant dans le temps des gradients de mauvaise reproductibilit&#xE9; qui ne sont pas bien adapt&#xE9;s pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de croissance lente chez les mammif&#xE8;res cellules. Bien que la conception du dispositif microfluidique ont permis de g&#xE9;n&#xE9;rer des gradients stables, complexes de mol&#xE9;cules diffusibles, les forces induites par l&#x26;#39;&#xE9;coulement de cisaillement dans un microcanal a rendu impossible de maintenir viables des cultures de neurones de mammif&#xE8;res pour les temps suffisamment longues. Dans cet article, nous d&#xE9;crivons les r&#xE9;ponses axonales des neurones corticaux de souris dans un &#xAB;neurone-b&#xE9;nigne&#x26;quot; gradient g&#xE9;n&#xE9;rateur dispositif bas&#xE9; sur une chambre ouverte qui peut &#xE9;tablir des gradients tr&#xE8;s stables de mol&#xE9;cules diffusibles pendant au moins 6 h avec la contrainte de cisaillement n&#xE9;gligeable, et permet &#xE9;galement les neurones de se d&#xE9;velopper pendant au moins 2 semaines. Sauf pendant la p&#xE9;riode o&#xF9; le gradient est activ&#xE9;e, les cellules dans le gradient sont dans les m&#xEA;mes conditions que les cellules sur les surfaces de contr&#xF4;le, qui assurent un ensemble coh&#xE9;rent de micro-variables environnementales. La stabilit&#xE9; et l&#x26;#39;uniformit&#xE9; du gradient sur la surface de culture de cellules atteint par le dispositif, en collaboration avec notre plate-forme logicielle pour l&#x26;#39;acquisition, de post-traitement et l&#x26;#39;analyse quantitative du grand nombre d&#x26;#39;images nous a permis d&#x26;#39;extraire des informations pr&#xE9;cieuses, m&#xEA;me &#xE0; partir de donn&#xE9;es de faible taille. Nous rapportons une r&#xE9;ponse dirig&#xE9;e de neurones primaires de mammif&#xE8;res (de souris E14 cortex embryonnaire) &#xE0; un gradient de n&#xE9;trine diffusible in vitro. Nous d&#xE9;duisons de nos &#xE9;tudes que la grande majorit&#xE9; (~ 73%) des neurones qui s&#x26;#39;&#xE9;tendent axones lors de l&#x26;#39;application gradient pousser vers la source la n&#xE9;trine, et notre analyse des donn&#xE9;es indique &#xE9;galement que les actes n&#xE9;trine comme un facteur de croissance pour cette m&#xEA;me population de neurones.

Un g&#xE9;n&#xE9;rateur de Neuron-b&#xE9;nigne D&#xE9;grad&#xE9; microfluidique pour &#xE9;tudier la r&#xE9;ponse des neurones de mammif&#xE8;res vers les facteurs de guidage axonal

Untersuchung der biochemischen Cues einzelstehend oder in Kombinationen in Zellkultursysteme ist entscheidend zu entwirren Mechanismen, die neuronale Entwicklung und Reparatur zu regieren. Die am weitesten verbreiteten experimentellen Paradigmen, die Axon Anleitung in-vitro entlocken nutzen als Quelle des Farbverlaufs ein pulsierender Pipette, transfected Zellen oder einem geladenen Gel, zeitlich ver&auml;nderlichen Farbverl&auml;ufe der schlechten Reproduzierbarkeit sind nicht gut geeignet f&uuml;r das Studium langsam wachsende S&auml;ugetier-Zellen produzieren. Obwohl mikrofluidische Ger&auml;tedesign haben erlaubt, zum Generieren von stabilen, komplexe Verl&auml;ufe der diffusible Molek&uuml;le, die Fluss-induzierte Scherkr&auml;fte in eine Microchannel es durchgef&uuml;hrt wurden mal ausreichend lange unm&ouml;glich zu lebensf&auml;hige S&auml;ugetier-neuronale Kulturen f&uuml;r aufrechterhalten. In diesem Beitrag beschreiben wir axonale Antworten der Maus kortikale Neuronen in einem &quot;Neuron-gutartige&quot; Farbverlauf-Generator-Ger&auml;t basiert auf einer offenen Kammer, die hochstabile Farbverl&auml;ufe diffusible Molek&uuml;le f&uuml;r mindestens 6 h mit vernachl&auml;ssigbaren Schubspannung nachweisen kann, und erm&ouml;glicht auch die Neuronen f&uuml;r mindestens 2 Wochen gedeihen. Mit Ausnahme der Zeit, wenn der Farbverlauf eingeschaltet ist, sind die Zellen im Farbverlauf unter den gleichen Bedingungen wie die Zellen der Steuerfl&auml;chen, die einen konsistenten Satz von Mikro-Umgebungsvariablen zu gew&auml;hrleisten. Der Farbverlauf Stabilit&auml;t und Homogenit&auml;t &uuml;ber die Zellkultur-Oberfl&auml;che erreicht, indem das Ger&auml;t zusammen mit unserer Softwareplattform f&uuml;r den Erwerb, Nachbearbeitung und quantitativ analysieren die gro&szlig;e Anzahl von Bildern konnten wir wertvollen Informationen sogar aus kleinen Datasets zu extrahieren. Wir berichten eine gesteuerte Reaktion des prim&auml;ren S&auml;ugetier-Neuronen (von E14 embryonaler M&auml;use Kortex) diffusible Steigung Netrin in-vitro. Wir schlie&szlig;en unsere Studien, die Mehrheit (&sim;73 %) der Neuronen, die Axone w&auml;hrend der gradient Anwendung erweitern wachsen in Richtung der Netrin-Quelle und unsere Datenanalyse auch zeigt an, dass diese Netrin als Wachstumsfaktor f&uuml;r diese gleichen Bev&ouml;lkerung der Neuronen fungiert.

Ein Neuron-gutartige mikrofluidische gradient Generator f&uuml;r das Studium der Antwort von S&auml;ugetier-Neuronen in Richtung Axon Anleitung Faktoren.

Indagine dei segnali biochimici in isolamento o in combinazioni in sistemi di coltura delle cellule &egrave; cruciale per disfare i meccanismi che regolano la riparazione e lo sviluppo neurale. I pi&ugrave; ampiamente usati paradigmi sperimentali che suscitano guida assone in vitro utilizzano come origine della sfumatura una pipetta pulsatile, celle transfected o un gel caricato, producendo pendenze variabili nel tempo della scarsa riproducibilit&agrave; che non sono adatte per lo studio delle cellule di mammiferi a crescita lenta. Anche se la progettazione di dispositivi microfluidici hanno permesso per la generazione di gradienti stabile, complessi di molecole diffusibile, le forze di taglio flusso-indotta in un microchannel ha reso impossibile mantenere vitali mammiferi colture neuronali per sufficientemente lunga volte. In questo articolo, descriviamo risposte assonali dei neuroni corticali di topo in un dispositivo generatore di gradiente &quot;neurone-benigni&quot; basato su una camera aperta che pu&ograve; stabilire sfumature altamente stabile di molecole diffusibile per almeno 6 h con trascurabile shear stress e inoltre consente ai neuroni di prosperare per almeno 2 settimane. Fatta eccezione per il periodo in cui il gradiente &egrave; su, le cellule della sfumatura sono le stesse condizioni come le cellule sulle superfici di controllo, che assicurano un insieme coerente di micro-ambientali variabili. Il gradiente stabilit&agrave; e uniformit&agrave; sopra la superficie di coltura cellulare raggiunta dal dispositivo, insieme con la nostra piattaforma software per l&#39;acquisizione, elaborazione e analizzare quantitativamente il numero di immagini ci ha permesso di estrarre informazioni preziose anche da piccoli DataSet. Riportiamo una risposta diretta di neuroni primari dei mammiferi (dalla corteccia di topi embrionale E14) per una sfumatura diffusibile di netrina in vitro. Noi dedurre dai nostri studi che una larga maggioranza (&sim;73%) dei neuroni che estendono assoni durante l&#39;applicazione del gradiente crescono verso la fonte netrina, e la nostra analisi dei dati indicano anche che netrina agisce come fattore di crescita per questa stessa popolazione di neuroni.

Un generatore di gradiente neurone-benigna microfluidica per studiare la risposta dei neuroni dei mammiferi verso fattori guida assone.

&#x5206;&#x96E2;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x751F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x6700;&#x3082;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x6210;&#x9577;&#x304C;&#x9045;&#x3044;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x5909;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x52FE;&#x914D;&#x62CD;&#x30D4;&#x30DA;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306F;&#x3001;&#x62E1;&#x6563;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A31;&#x53EF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x8DEF;&#x5185;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x8A98;&#x8D77;&#x305B;&#x3093;&#x65AD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x9577;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x8996;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x305B;&#x3093;&#x65AD;&#x5FDC;&#x529B;&#x3067;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;6&#x6642;&#x9593;&#x62E1;&#x6563;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; 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&#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638; &#xC808;&#xC5F0; &#xB610;&#xB294; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD0C8;&#xD53C; &#xC704;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678; &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; &#xD0C0;&#xC545;&#xAE30; &#xD53C; &#xD3AB;, transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xB290;&#xB9B0;-&#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC7AC;&#xD604;&#xC131;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB41C; &#xC824; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB85C; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xBE44;&#xB85D; &#xBBF8;&#xC138; &#xC7A5;&#xCE58; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4; diffusible &#xBD84;&#xC790;&#xB294; &#xBC84;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xB2E8; &#xD750;&#xB984; &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xB825;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC774; &#xACE0;, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBD88;&#xAC00;&#xB2A5; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xAE34; &#xC2DC;&#xAC04;. &#xC774; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218; &#xC804;&#xB2E8; &#xC751;&#xB825;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 6 h&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; diffusible &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; 2 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0B4;&#xC544;&#xB0A8;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74; &#xB274;&#xB7F0; &#xC624;&#xD508; &#xCC54;&#xBC84;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &quot;&#xC2E0;&#xACBD; &#xC591;&#xC131;&quot; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;-&#xBC1C;&#xC0DD;&#xAE30; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; axonal &#xC751;&#xB2F5; &#xC124;&#xBA85;. &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xCF1C;&#xC838; &#xC788;&#xC744; &#xB54C; &#xAE30;&#xAC04;&#xC744; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xD658;&#xACBD; &#xBCC0;&#xC218; &#xC9D1;&#xD569;&#xC774; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC140;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xADE0;&#xC77C;&#xC131;&#xC744; &#xCDE8;&#xB4DD;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xD568;&#xAED8; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xD45C;&#xBA74; &#xD6C4; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC591;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xAC00; &#xB9CE;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC791;&#xC740; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC138;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; (E14 &#xBC30;&#xC544; &#xC950; &#xD53C; &#xC9C8;)&#xC5D0;&#xC11C; diffusible &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; netrin &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC8FC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xB41C; &#xC751;&#xB2F5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218; (&sim;73%) netrin &#xC18C;&#xC2A4; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xCD94; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; netrin &#xC5ED;&#xD560; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC728;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD; &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC751;&#xB2F5; &#xACF5;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC591;&#xC131; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBBF8;&#xC138; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC0DD;&#xC131;&#xAE30;.

La investigaci&#xF3;n de las se&#xF1;ales bioqu&#xED;micas de forma aislada o en combinaciones de sistemas de cultivo celular es crucial para desentra&#xF1;ar los mecanismos que gobiernan el desarrollo neuronal y la reparaci&#xF3;n. Los paradigmas m&#xE1;s ampliamente utilizados experimentales que provocan gu&#xED;a de axones in vitro utilizar como la fuente del gradiente de una pipeta puls&#xE1;til, las c&#xE9;lulas transfectadas, o un gel cargado, produciendo diferentes gradientes de tiempo-mala reproducibilidad que no son muy adecuadas para el estudio de crecimiento lento mam&#xED;fero c&#xE9;lulas. Aunque el dise&#xF1;o de dispositivos de microfluidos han permitido la generaci&#xF3;n de gradientes estables y complejos de mol&#xE9;culas que difunden, las fuerzas de cizallamiento inducidas por el flujo en un micro ha hecho imposible para mantener viables los cultivos neuronales de mam&#xED;feros para tiempos suficientemente largos. En este trabajo se describe la respuesta axonal de las neuronas corticales de rat&#xF3;n en una &#x26;quot;neurona benigna&#x26;quot; gradiente de generador de dispositivo basado en una c&#xE1;mara abierta que puede establecer gradientes altamente estables de mol&#xE9;culas que difunden por lo menos durante 6 h con esfuerzo cortante insignificante, y permite tambi&#xE9;n las neuronas a prosperar por lo menos 2 semanas. Excepto para el per&#xED;odo cuando el gradiente est&#xE1; activado, las c&#xE9;lulas en el gradiente se encuentran bajo las mismas condiciones que las c&#xE9;lulas en las superficies de control, que aseguran un conjunto coherente de micro-ambientales variables. El gradiente de la estabilidad y la uniformidad sobre la superficie de cultivo de c&#xE9;lulas alcanzado por el dispositivo, junto con nuestra plataforma de software para la adquisici&#xF3;n, post-procesamiento y el an&#xE1;lisis cuantitativo de la gran cantidad de im&#xE1;genes nos permite extraer informaci&#xF3;n valiosa, incluso de peque&#xF1;os conjuntos de datos. Se presenta una respuesta dirigida de primaria neuronas de mam&#xED;feros (ratones de E14 corteza embrionaria) a un gradiente de netrina difusible in vitro. Deducimos de nuestros estudios que una gran mayor&#xED;a (~ 73%) de las neuronas que se extienden axones durante la aplicaci&#xF3;n gradiente crecer hacia la fuente netrina, y el an&#xE1;lisis de datos tambi&#xE9;n indican que los actos netrina como un factor de crecimiento para esta misma poblaci&#xF3;n de neuronas.

Un generador de Neuron-benigna de degradado de microfluidos para estudiar la respuesta de las neuronas de mam&#xED;feros a los factores guiado de los axones

&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x68C0;&#x6D4B;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BC6;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x65B0;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x5C3D;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x9700;&#x6C42;&#x4F18;&#x5316;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#xFF0C;&#x6210;&#x672C;&#xFF0C;&#x548C;&#x9884;&#x6D4B;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x819C;&#x5F53;&#x524D;&#x53D8;&#x5316;&#x8BF1;&#x53D1;&#x6216;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x76F8;&#x4E92;&#x7ADE;&#x4E89;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x7528;&#x6765;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x9700;&#x6C42;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5DEE;&#x8DDD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7ED3;&#x5408;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001; &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x3001; &#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x4E95;&#x677F;&#x4E0A;&#x7684;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9677;&#x5370;&#x3001; &#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x590D;&#x5408;&#x704C;&#x6CE8;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E92;&#x8FDE;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x6C14;&#x52A8;&#x9600;&#x95E8;&#xFF0C;&#x89E3;&#x653E;&#x4ECE;&#x673A;&#x5668;&#x4EBA;&#x6280;&#x672F;&#x3001; &#x5C04;&#x6D41;&#x6CB9;&#x7BA1;&#x3001; &#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x3002;IonFlux &trade; &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5148;&#x8FDB;&#x7684;&#x3001; &#x7D27;&#x51D1;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x8FDE;&#x7EED;&#x7535;&#x538B;&#x5939;&#x5177;&#x5728;&#x7535;&#x538B;&#x548C;&#x914D;&#x4F53;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E2D;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4E50;&#x56E2;&#x5F55;&#x5236;&#x7684; IonFlux &#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x7528;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x919A;&#x76F8;&#x6BD4; go go &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0; (hERG&#xFF09; &#x901A;&#x9053; &#xFF08;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x793A;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x836F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x81EA;&#x52A8;&#x5E73;&#x9762;&#x7247;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FDB;&#x884C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x7279;&#x6027;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x5176;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x3002;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; hERG &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x548C;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E0E; IonFlux &#x7CFB;&#x7EDF;&#x63A7;&#x5236;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6D53;&#x5EA6;&#x54CD;&#x5E94;&#x7279;&#x6027;&#x4E0E;&#x6587;&#x5B66;&#x548C; QPatch HT &#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0E;&#x6B64;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x4E0A;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x6570;&#x636E;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x836F;&#x7406;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; IonFlux &#x7CFB;&#x7EDF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x90E8;&#x5C0F;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#xFF0C;&#x81EA;&#x52A8;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x548C;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5176;&#x4F18;&#x70B9;&#x662F;&#x6E29;&#x5EA6;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7B5B;&#x9009;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

IonFlux&#xFF1A; &#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8865;&#x4E01;&#x5939;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x919A;-&#x76F8;&#x6BD4;-&#x8F6C;&#x5230;-go &#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x901A;&#x9053;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Ion channel assays are essential in drug discovery, not only for identifying promising new clinical compounds, but also for minimizing the likelihood of potential side effects. Both applications demand optimized throughput, cost, and predictive accuracy of measured membrane current changes evoked or modulated by drug candidates. Several competing electrophysiological technologies are available to address this demand, but important gaps remain. We describe the industrial application of a novel microfluidic-based technology that combines compounds, cells, and buffers on a single, standard well plate. Cell trapping, whole cell, and compound perfusion are accomplished in interconnecting microfluidic channels that are coupled to pneumatic valves, which emancipate the system from robotics, fluidic tubing, and associated maintenance. IonFluxâ„¢ is a state-of-the-art, compact system with temperature control and continuous voltage clamp for potential application in screening for voltage- and ligand-gated ion channel modulators. Here, ensemble recordings of the IonFlux system were validated with the human Ether-Ã -go-go related gene (hERG) channel (stably expressed in a Chinese hamster ovary cell line), which has established biophysical and pharmacological characteristics in other automated planar patch systems. We characterized the temperature dependence of channel activation and its reversal potential. Concentration response characteristics of known hERG blockers and control compounds obtained with the IonFlux system correlated with literature and internal data obtained on this cell line with the QPatch HT system. Based on the biophysical and pharmacological data, we conclude that the IonFlux system offers a novel, versatile, automated profiling, and screening system for ion channel targets with the benefit of temperature control.

IonFlux: a microfluidic patch clamp system evaluated with human Ether-Ã -go-go related gene channel physiology and pharmacology.

Ion dosages canaux sont essentiels &#xE0; la d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments, non seulement pour identifier de nouveaux compos&#xE9;s prometteurs cliniques, mais aussi pour minimiser le risque d&#x26;#39;effets secondaires potentiels. Les deux applications exigent un d&#xE9;bit optimis&#xE9;, co&#xFB;t, et la pr&#xE9;cision des changements de membrane mesur&#xE9;es actuelles &#xE9;voqu&#xE9;s ou modul&#xE9;e par des candidats-m&#xE9;dicaments. Plusieurs technologies concurrentes &#xE9;lectrophysiologiques sont disponibles pour r&#xE9;pondre &#xE0; cette demande, mais d&#x26;#39;importantes lacunes subsistent. Nous d&#xE9;crivons l&#x26;#39;application industrielle d&#x26;#39;un roman bas&#xE9; sur la technologie microfluidique qui combine compos&#xE9;s, des cellules, et des tampons sur un seul plateau et standard. Pi&#xE9;geage de cellules, de cellules enti&#xE8;res, et la perfusion Compos&#xE9; sont accomplies dans les canaux microfluidiques interconnexion qui sont coupl&#xE9;s &#xE0; soupapes pneumatiques, qui affranchir le syst&#xE8;me de robotique, tubage fluidique, et de maintenance associ&#xE9;e. IonFlux &#x2122; est un &#xE9;tat-of-the-art, syst&#xE8;me compact avec contr&#xF4;le de temp&#xE9;rature et continue voltage pour des applications potentielles dans le d&#xE9;pistage de la tension et ligand-d&#xE9;pendants modulateurs de canaux ioniques. Ici, les enregistrements ensemble du syst&#xE8;me IonFlux ont &#xE9;t&#xE9; valid&#xE9;s avec l&#x26;#39;&#xEA;tre humain &#xE9;ther-&#xE0;-go-go li&#xE9; au g&#xE8;ne de (hERG) canal (exprim&#xE9; de fa&#xE7;on stable dans une lign&#xE9;e cellulaire d&#x26;#39;ovaire de hamster chinois), qui a &#xE9;tabli les caract&#xE9;ristiques biophysiques et pharmacologiques dans d&#x26;#39;autres plaque plane automatis&#xE9; les syst&#xE8;mes. Nous avons caract&#xE9;ris&#xE9; la d&#xE9;pendance en temp&#xE9;rature de l&#x26;#39;activation du canal et de son potentiel d&#x26;#39;inversion. Caract&#xE9;ristiques de r&#xE9;ponse de concentration des inhibiteurs connus hERG et compos&#xE9;s de contr&#xF4;le obtenus avec le syst&#xE8;me IonFlux corr&#xE9;l&#xE9;e avec la litt&#xE9;rature et les donn&#xE9;es internes obtenues sur cette lign&#xE9;e cellulaire avec le syst&#xE8;me QPatch HT. Sur la base des donn&#xE9;es biophysiques et pharmacologiques, nous concluons que le syst&#xE8;me IonFlux offre un roman, polyvalent, le profilage automatis&#xE9;, et le syst&#xE8;me de d&#xE9;pistage pour les cibles de canaux ioniques avec le b&#xE9;n&#xE9;fice de contr&#xF4;le de la temp&#xE9;rature.

IonFlux: un syst&#xE8;me microfluidique Patch Clamp &#xE9;valu&#xE9; avec la physiologie humaine &#xE9;ther-&#xE0;-go-go li&#xE9; au g&#xE8;ne de la Manche et Pharmacologie

Ionen-Kanal-Assays sind unerl&auml;sslich in der Drogeentdeckung, nicht nur f&uuml;r viel versprechende neue klinische Verbindungen zu identifizieren, sondern auch f&uuml;r die Minimierung der Gefahr von m&ouml;glichen Nebenwirkungen. Beide Anwendungen Bedarf optimiert Durchsatz, Kosten, und Vorhersagegenauigkeit aktuelle gemessenen Membran &auml;ndert evozierte oder modulierte von Arzneimittelkandidaten. Mehrere konkurrierende Technologien elektrophysiologische sind erh&auml;ltlich, diese Forderung, aber wichtige L&uuml;cken bleiben. Wir beschreiben die gewerbliche Anwendbarkeit eine neuartige mikrofluidische basierende Technologie, die Verbindungen, Zellen und Puffer auf einen einzigen, standard-well-Platten kombiniert. Zelle &Uuml;berf&uuml;llung, ganze Zelle und zusammengesetzte Perfusion werden in mikrofluidische Kan&auml;le, die zu Pneumatikventile, gekoppelt sind, die wodurch das System von Robotik, fluidische Leitungen und damit verbundenen Wartung emanzipieren mit Verbindungst&uuml;r erreicht. IonFlux &trade; ist ein Zustand-of-the-Art, kompaktes System mit Temperaturregelung und kontinuierliche Spannung Klemme f&uuml;r potentielle Anwendung im Screening f&uuml;r Spannung und ligandengesteuerte Ion Kanal Modulatoren. Ensemble-Aufnahmen des Systems IonFlux wurden hier mit dem menschlichen Ether-&agrave;-Go-Go Verwandte-gen (hERG) Kanal (stabil ausgedr&uuml;ckt in ein chinesischer Hamster Eierstock-Zelllinie), validiert etabliert hat, dass die biophysikalische und pharmakologische Eigenschaften in anderen F&uuml;llfl&auml;che Systeme automatisiert. Wir zeichnen sich die Temperaturabh&auml;ngigkeit des Kanal-Aktivierung und seine Umkehrung Potenzial. Konzentration Antwort Merkmale der bekannten hERG-Blocker und Steuerelement Verbindungen erhalten mit dem System IonFlux korreliert mit Literatur und interne Daten, die in dieser Zeile der Zelle mit dem QPatch-HT-System. Auf der Grundlage der biophysikalischen und pharmakologischen Daten, schlie&szlig;en wir, dass das IonFlux-System ein neuartiges, vielseitig, automatische Profilerstellung bietet, und screening System f&uuml;r Ionen-Kanal-Ziele mit dem Vorteil der Temperaturregelung.

IonFlux: eine mikrofluidische Patch Clamp System ausgewertet mit menschlichen Ether-&agrave;-Go-Go gen Kanal Physiologie und Pharmakologie.

Dosaggi di canale ionico sono essenziali nella scoperta della droga, non solo per l&#39;identificazione di composti clinici nuovi promettenti, ma anche per ridurre al minimo il rischio di potenziali effetti collaterali. Domanda sia applicazioni ottimizzate throughput, costo, e accuratezza predittiva della membrana misurata corrente cambia evocati o modulato da candidati farmaci. Diverse tecnologie concorrenti elettrofisiologiche sono disponibili per affrontare questa domanda, ma permangono carenze importanti. Descriviamo l&#39;applicazione industriale di una tecnologia microfluidica romanzo che unisce composti, celle e buffer su un piatto unico, standard ben. Intrappolamento delle cellule, cellula intera e perfusione composta sono compiute in canali microfluidici che sono accoppiati a valvole pneumatiche, che emancipare il sistema dalla robotica, tubi idraulici e manutenzione associati di interconnessione. IonFlux &trade; &egrave; un sistema stato-of-the-art, compatto con controllo di temperatura e tensione continua pinza per potenziale applicazione nello screening per modulatori di canale tensione e ligand-gated dello ione. Qui, registrazioni ensemble del sistema IonFlux sono stati convalidati con l&#39;umano etere-&agrave;-go-go related gene (hERG) canale (stabilmente espresso in una linea di cella ovaio di criceto cinese), che ha stabilito le caratteristiche biofisiche e farmacologiche in altri patch planari sistemi automatizzati. Abbiamo caratterizzato la dipendenza di temperatura di attivazione del canale e il potenziale di inversione. Caratteristiche di risposta di concentrazione di hERG noti bloccanti e controllo composti ottenuti con il sistema IonFlux correlate con letteratura e dati interni ottenuti su questa linea di cellulari con il sistema QPatch HT. Basato su dati biofisici e farmacologici, possiamo concludere che il sistema di IonFlux offre che un romanzo, versatile, automatizzato profiling e screening sistema per obiettivi canale ionico con il beneficio di controllo della temperatura.

IonFlux: un microfluidica patch clamp sistema valutato con human Ether-&agrave;-go-go related gene canale fisiologia e farmacologia.

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IonFlux&#x2122;&#x306F;&#x3001;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x96FB;&#x5727;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x6700;&#x5148;&#x7AEF;&#x306E;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IonFlux&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x9332;&#x97F3;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB;-&#xE0;-&#x30B4;&#x30FC;&#x30B4;&#x30FC;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF08;&#x306E;hERG&#xFF09;&#x3067;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4ED6;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5E73;&#x9762;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#xFF09;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;hERG&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x6587;&#x5B66;&#x3068;QPatch HT&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5185;&#x90E8;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;IonFlux&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5236;&#x5FA1;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x5FDC;&#x7B54;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;IonFlux&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3001;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

IonFlux&#xFF1A;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB;-&#xE0;-&#x30B4;&#x30FC;&#x30B4;&#x30FC;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3084;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;

&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC784;&#xC0C1;&#xC758; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC218;&#xC694;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;, &#xBE44;&#xC6A9;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD604;&#xC7AC; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC608;&#xCE21; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; evoked &#xB610;&#xB294; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC218;&#xC694;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xACBD;&#xC7C1; electrophysiological &#xAE30;&#xC220; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC04;&#xACA9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; &#xBBF8;&#xC138; &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xC220; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;, &#xC140;, &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD45C;&#xC900; &#xC798; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xBC84;&#xD37C;&#xC758; &#xC0B0;&#xC5C5; &#xC751;&#xC6A9; &#xAE30;&#xC220;. &#xC140; &#xD2B8;&#xB7A9;, &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xD569; &#xAD00;&#xB958; &#xACF5; &#xC555; &#xBC38;&#xBE0C;, &#xB85C;&#xBD07; &#xACF5;&#xD559;, &#xC720;&#xCCB4; &#xBC30;&#xAD00; &#xBC0F; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD574;&#xBC29; &#xD558;&#xB294; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. IonFlux &trade;&#xB294; &#xC628;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC640; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC804;&#xC555; &#xBC0F; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC2E0;&#xC758; &#xC18C;&#xD615; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xC5EC;&#xAE30;, IonFlux &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xB179;&#xC74C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC774;&#xB3D9; &#xC774;&#xB3D9; &agrave; &#xC5D0;&#xD14C;&#xB974; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (hERG) &#xCC44;&#xB110; (&#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xD568;), &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xBC0F; &#xC57D;&#xB9AC; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC790;&#xB3D9; &#xD3C9;&#xBA74; &#xD328;&#xCE58; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC124;&#xB9BD; &#xAC80;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xADF8; &#xBC18;&#xC804;&#xC758; &#xC628;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC744; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; hERG &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C;&#xC640; IonFlux &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC751;&#xB2F5; &#xD2B9;&#xC131; &#xBB38;&#xD559;&#xACFC; QPatch HT &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC;&#xC774; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xBC0F; &#xC57D;&#xB9AC; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; IonFlux &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC18C;&#xC124;, &#xB2E4;&#xC7AC; &#xB2E4;&#xB2A5; &#xD55C;, &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xC801; &#xC628;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC758; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC790;&#xB3D9; &#xC81C;&#xACF5; &#xACB0;&#xB860;.

IonFlux: &#xBBF8;&#xC138; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC5D0;&#xD14C;&#xB974;-&agrave;-&#xC774;&#xB3D9;-&#xC774;&#xB3D9; &#xD568;&#xAED8; &#xD3C9;&#xAC00; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCC44;&#xB110; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xBC0F; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559;.

Ensayos con canales de iones son esenciales para el descubrimiento de f&#xE1;rmacos, no s&#xF3;lo para la identificaci&#xF3;n de compuestos prometedores cl&#xED;nicos nuevos, sino tambi&#xE9;n para reducir al m&#xED;nimo la probabilidad de efectos secundarios potenciales. Ambas aplicaciones exigen rendimiento optimizado, el costo y la exactitud de predicci&#xF3;n de los cambios de la membrana de medici&#xF3;n actuales evocados o moduladas por los candidatos de la droga. Varias tecnolog&#xED;as compiten electrofisiol&#xF3;gicos est&#xE1;n disponibles para hacer frente a esta demanda, pero sigue habiendo importantes lagunas. Se describe la aplicaci&#xF3;n industrial de una novela de microfluidos basada en la tecnolog&#xED;a que combina compuestos, c&#xE9;lulas y tampones en una sola placa, bien est&#xE1;ndar. Atrapamiento de la c&#xE9;lula, la c&#xE9;lula entera, y la perfusi&#xF3;n compuesto se llevan a cabo en los canales de interconexi&#xF3;n de microfluidos que se acoplan a las v&#xE1;lvulas neum&#xE1;ticas, que emancipar el sistema de rob&#xF3;tica, tubos flu&#xED;dica, y el mantenimiento asociado. IonFlux &#x2122; es un estado-of-the-art, sistema compacto con control de temperatura y la abrazadera continua de tensi&#xF3;n para su potencial aplicaci&#xF3;n en la detecci&#xF3;n de voltaje y ligando barrios cerrados-moduladores de canales i&#xF3;nicos. Aqu&#xED;, las grabaciones del conjunto del sistema IonFlux fueron validados con el ser humano ether-a-go-go relacionado con el gen (hERG) canal (estable expresado en una l&#xED;nea celular de ovario de h&#xE1;mster chino), que ha establecido las caracter&#xED;sticas biof&#xED;sicas y farmacol&#xF3;gicas en otros parches automatizada plana sistemas. Nos caracteriza la dependencia de la temperatura de activaci&#xF3;n del canal y su potencial de inversi&#xF3;n. Caracter&#xED;sticas de concentraci&#xF3;n-respuesta de los bloqueadores hERG conocidos y compuestos de control obtenidos con el sistema IonFlux correlacionada con la literatura y los datos internos obtenidos en esta l&#xED;nea celular con el sistema QPatch HT. Con base en los datos biof&#xED;sicos y farmacol&#xF3;gicos, llegamos a la conclusi&#xF3;n de que el sistema ofrece IonFlux una novela, perfiles vers&#xE1;til, autom&#xE1;tico y sistema de detecci&#xF3;n de objetivos de los canales i&#xF3;nicos con el beneficio del control de la temperatura.

Article	Year
A calcium-induced calcium influx factor, nitric oxide, modulates the refilling of calcium stores in astrocytes. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience\| PubMed ID: 14614089	2003
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The RecQ helicase WRN is required for normal replication fork progression after DNA damage or replication fork arrest. Cell cycle (Georgetown, Tex.)\| PubMed ID: 18250621	2008
Localized acetylcholine receptor clustering dynamics in response to microfluidic focal stimulation with agrin. Biophysical journal\| PubMed ID: 18502803	2008
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Microfluidic-assisted analysis of replicating DNA molecules. Nature protocols\| PubMed ID: 19444242	2009
A neuron-benign microfluidic gradient generator for studying the response of mammalian neurons towards axon guidance factors. Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro\| PubMed ID: 20957287	2010
IonFlux: a microfluidic patch clamp system evaluated with human Ether-Ã -go-go related gene channel physiology and pharmacology. Assay and drug development technologies\| PubMed ID: 21561375	2011

Nianzhen Li

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