A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Abstract

المصدر: Zhang ، G. L. ، et al. حقن تقويم العظام لخلايا سرطان الثدي في وسادة الدهون الثديية للفئران.J. Vis. Exp. (2019).

في هذه المقالة نناقش كيفية إنشاء نموذج سرطان الثدي في إناث الفئران عن طريق حقن خلايا سرطان الثدي في وسادة دهون الثدي. يوضح مثال البروتوكول حقن تقويم العظام.

Protocol

أجريت التجارب على وفقا للحكم والتوصية العامة لتشريع إدارة التجريبية الصينية وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة مؤسسة رعاية واستخدامه بجامعة العاصمة الطبية (المرجع رقم 10). AEEI-2014-052). تم استخدام إناث فئران Balb / c التي تتراوح أعمارها بين 6 و 8 أسابيع.

1. تحضير الخلايا

1. قبل يوم واحد من العملية ، احلق الشعر حول الحلمات الرابعة لكشف منطقة العملية.
   1. استخدم إحدى يديك لإمساك الماوس بإحكام في الخلف للتأكد من أن الماوس لن يتحرك بحرية ، وقم بتشغيل الماوس لكشف بطنه للمشغل ، ثم استخدم يدا أخرى لحلق الفراء حول الحلمات الرابعة باستخدام ماكينة حلاقة إلكترونية.
   2. ضعي طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر حول الحلمات لمدة 30 – 60 ثانية ، ونظفي الكريم بالماء المقطر ، ثم جففي الماوس بورق ناعم.
2. في يوم العملية ، اجمع خلايا سرطان الثدي في الفئران (4T1-luc2) ، واحسب عدد الخلية ، واضبط كثافة الخلية إلى 2 × 10⁵ خلايا / مل في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة المعقمة واحتفظ بها على الجليد. لكل فأر ، يتم تحضير 1 × 10⁴ خلايا / 50 ميكرولتر في حقنة سعة 1 مل.

2. حقن تقويم العظام

1. تخدير الفئران
   1. تحفيز التخدير. ضع الفئران في وعاء شفاف مغلق وقم بتشغيل غاز الأيزوفلوران بنسبة 2٪ لتخدير الفئران لمدة 5 دقائق تقريبا ، حتى تستلقي جميعها وتنام.
   2. الحفاظ على التخدير. انقل الفئران من الحاوية إلى أقنعة التخدير الفردية ، ووضع بعض المرهم البيطري على أعينهم لتجنب الجفاف ، وحافظ على الفئران مستلقة مع تعرض حلماتها للمشغل ، واتركها تستمر في استنشاق غاز الأيزوفلوران لبضع دقائق حتى يتم إجراء الحقن.
   3. تأكيد نجاح التخدير من خلال عدم وجود منعكس انسحاب قرصة إصبع القدم.
   4. ضع مرهم العين على عيون الفئران لمنع جفاف العين.
      ملاحظة وفقا لحجم الحاوية وعدد أقنعة التخدير الفردية المتاحة ، يمكن تخدير مجموعة من الفئران معا وحقنها واحدة تلو الأخرى تحت التخدير الفردي.
2. أداء الحقن
   1. استخدم إحدى يديك لتثبيت الجلد حول الحلمة الرابعة بالملاقط ، لإنشاء “نفق” مرفوع لتتبعه المحقنة. استخدم اليد الأخرى لإمساك المحقنة مع توجيه الإبرة لأعلى لدخول الجلد تحت الجلد على بعد 5-10 مم من الحلمة ؛ بعد ذلك ، اتبع “النفق” حتى يقترب طرف الإبرة من الحلمة ، وحرك طرف الإبرة بعناية إلى وسادة الدهون الثديية حتى تأتي عين الإبرة تحت طرف الحلمة ، وتخلص من الملقط ، وحقن الخلايا ببطء.
   2. أدر الإبرة قليلا واسحب المحقنة ببطء ؛ استخدم قطعة قطن للضغط على جرح الإبرة لمدة 10 – 20 ثانية للتأكد من عدم وجود تسرب للسوائل.
   3. راقب الحلمة الرابعة لتأكيد الحقن الناجح: كرة بيضاء مسطحة شفافة مع الحلمة كما يمكن ملاحظة المركز (الشكل 1).
3. حافظ على تخدير الفئران لمدة دقيقة أخرى لتجنب ترك الفئران تتعافى وتتحرك بسرعة كبيرة ، مما يؤدي إلى فتح جرح الحقن وتسرب الخلايا السرطانية.

الشكل 1: صور قبل وبعد حقن تقويم العظام في وسادة الدهون الثديية لإناث فئران Balb / c. تم إجراء العملية ، وتم التقاط الصور بينما كانت الفئران تحت تخدير الأيزوفلوران. أ ، قبل الحقن ، ب ، بعد الحقن.

Materials

anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
 isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	–	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	–	ophthalmic ointment