الجينات مراسل fluorescence النويدات المشعة التصوير لتتبع تطور الورم في نماذج القوارض الورم

المرض المنتشر هو سبب معظم الوفيات الناجمة عن السرطان ¹. وعلى الرغم من بحوث مستفيضة في عمليات المنتشر، رصد موثوق بها من سرطان خبيث في نظم نموذجية الحيوان من الصعب تحقيق. وقد مكنت التطورات الحديثة في تقنيات التصوير الجسم كله والنهج التصوير المتعدد الوسائط غير الغازية في فيفو خلية تتبع^2،3،،من⁴⁵. ويمكن استخدام هذا الأخير كأداة رصد وجود وتوزيع، والكمية، والجدوى من الخلايا، غير إينفاسيفيلي ومرارا وتكرارا الحيوانات حية أو من حقوق إنسان.

وغرض الأسلوب الموصوفة هنا طوليا وغير إينفاسيفيلي تتبع الخلايا السرطانية في 3D في نماذج الورم القوارض الحية. باستخدام هذا الأسلوب، سوف تكون قادرة على دقة قياس تطور الورم بما في ذلك انتشار المنتشر في 3D الباحثين. بالمقارنة مع التقنيات التقليدية غير المستندة إلى التصوير، يقدم هذا الأسلوب الحصول على البيانات الكمية مع إلى حد كبير انخفاض إعداد الحيوانات. ميزة أخرى لهذا الأسلوب أنه يتيح الارتباط في فيفو التصوير مع تحليل مبسط المصب السابقين فيفو المتعقبة خلايا الأنسجة المقطوع بالانسجة أو الخلوي^3،6.

وكان الأساس المنطقي لتطوير هذا الأسلوب لتوفير أداة في فيفو للرصد والقياس الكمي لعملية كاملة المنتشر في نماذج القوارض الورم. الأهم من ذلك، وقد صممت للحد من استخدام الحيوانات في الوقت نفسه الحد من تقلب بين الحيوانات. تصوير كامل الجسم غير الغازية الطولي ممتاز مناسبة لإطلاع على ثمرة المنتشر، لهي في حد ذاتها من الصعب التنبؤ بدقة بوقت ومكان حدوثه. ولذلك تم تصوير كامل الجسم ثلاثي الأبعاد في مركز تنمية الأسلوب. حجم الفجوة بين الجسم كله في فيفو تصوير وإمكانات كان المصب السابقين فيفو تأكيد النسيجي، مقياس متعدد النهج التصوير استناداً إلى مراسل النويدات مشعة ذات الوضع المزدوج-الأسفار المعتمدة^{3، 6}.

التصوير المقطعي بالبوزيترون (PET) هي الأكثر حساسية 3D كامل الجسم التصوير التكنولوجيا المتاحة حاليا تقدم ممتاز عمق الاختراق و الكمي المطلق⁷ مع قرار من < 1 مم^8،9. حاليا، يمكن موثوق الإكلينيكية خلية تتبع على مستوى كامل الجسم من النويدات المشعة التصوير الكشف عن الخلايا في كثافة الخلايا ~ 1,000 كل حجم من 1 مليون الخلايا^3،6 مع القرارات في المنطقة الفرعية ملليمتر. خلافا مجهرية إينترافيتال، فإنه لا يمكن الكشف عن الخلايا السرطانية نشر واحدة، بل أنها لا تتطلب الإجراءات الجراحية (مثل الدوائر النافذة)، ولا يقتصر مجال رؤية صغيرة، وليس باختراق الأنسجة منخفضة ومبعثر. التصوير الإضاءة الحيوية يوفر بديل غير مكلفة، لكن المقترنة مبعثر والمسائل امتصاص الضوء، فضلا عن ضعف عمق الاختراق، وبالتالي محدودة بشدة في تحديد مقدار². تصوير كامل الجسم الأسفار وقد استخدمت للحصول على صور ثلاثية الأبعاد، إلا أنها حساسة أقل بكثير مقارنة ب تكنولوجيات الإضاءة الحيوية أو النويدات المشعة². ومع ذلك، الأسفار يتيح الفرصة لإجراء تحليل السابقين فيفو المصب النسيج الخلوي أو الفحص المجهري. هذا الأخير يغلق المقياس-الفجوة بين تصوير كامل الجسم العيانية (القرار مم) والأسفار الأنسجة المجهرية التحليل (القرار ميكرومتر)³. ولذلك، طرائق النويدات المشعة والأسفار يكمل كل منهما الآخر، بدءاً من مستوى الجسم كله إلى النطاق الخلوية (sub-).

تصوير الجينات مراسل يعتبر مثاليا لفترات طويلة خلية تتبع كما هو مطلوب في أبحاث ورم خبيث. في هذا التطبيق متفوقة على وسم الخلية مباشرة كما هو (ط) لا تتأثر بتمييع التسمية وهكذا لا تقتصر في تتبع الوقت، وتعكس أرقام الخلية الحية (ثانيا) أفضل. ونتيجة لذلك، كامل الجسم خلية تتبع مفيد بشكل خاص للتطبيقات التي يمكن تتبعها الخلايا تتكاثر أو توسيع في فيفو، على سبيل المثال في سرطان البحثية^3،6، للكشف عن تشكيل تيراتوما في الجذعية خلية البحث، أو للتحديد الكمي لجهاز المناعة الخليوي توسع⁵.

مختلف النويدات المشعة على مراسل الجينات هي المتاحة². وتشمل هذه الإنزيمات مثل كيناز thymidine HSV11 فيروس الحلأ البسيط (HSV1-المعارف التقليدية)، وشركات النقل مثل سيمبورتير يوديد الصوديوم (NIS) أو إفراز الناقل (صافي)، وكذلك مستقبلات الخلية السطحية مثل الدوبامين (مستقبلات D2 D2R). شيكل إسرائيلي جديد هو بروتين عبر غشاء الغليكوزيلاتي الذي يتوسط بنشاط امتصاص يوديد، على سبيل المثال في جرابي خلايا الغدة الدرقية للتوليف اللاحقة لهرمونات الغدة الدرقية¹⁰. هذه العملية بدافع سيمبورت نا⁺ ويعتمد على التدرج الصوديوم الخلوية، الذي تم تطويره من قبل الجمعية الوطنية⁺/K⁺-أتباسي¹¹. ونتيجة لذلك، شيكل إسرائيلي جديد يعكس بشكل أفضل المعيشة الخلية عدد من الصحفيين الآخرين كما يرتبط امتصاص يوديد/راديوتراسير نا نشطة⁺التدرج/K⁺ بدلاً من مجرد وجود الناقل. تقليديا، وقد استخدم راديويوديدي لتصوير شيكل. تتبع الخلية، وأبلغ راديوتراسيرس شيكل البديلة التي لم يتم تطويق أيضي في الغدة الدرقية لتكون متفوقة⁶. وهذا مؤخرا بوضع الحيوانات الأليفة radiotracer [¹⁸و] رباعي فلوروبورات (فرنك بلجيكي [¹⁸و]₄^–)^،من¹²¹³ يظهر الدوائية متفوقة بالمقارنة مع راديويوديدي⁶ بينما يجري متاح في أنشطة محددة ارتفاع¹⁴ دون الحاجة إلى مرافق مجمع الكيمياء الإشعاعية. [¹⁸و] يمكن توليفها فرنك بلجيكي₄^– عبر طريقتين مختلفتين. وتستند الطريقة الأولى تبادل النظائر غير مشعة ¹⁹و في فرنك بلجيكي₄^– مع المشعة ¹⁸و¹². الطريقة الثانية عن طريق إضافة ¹⁸و البورون غير مشعة فلوريد ثلاثي¹⁴. أفادت الأنباء أن تسفر عن أنشطة محددة ارتفاع¹⁴ الأسلوب الأخير وهو الأسلوب المفضل للتصوير السريري.

وأعرب عن شيكل هو الغاية في أنسجة الغدة الدرقية. فهو وارد أيضا في الغدد الثديية اللعابية ولاتشريمال والمرضعات، فضلا عن المعدة، ولكن على مستويات أقل بالمقارنة مع الغدة الدرقية¹⁰. ولذلك، يمكن تحقيقها تصوير ممتازة التباين في مناطق أخرى من الجسم باستخدام شيكل. وأيضا كبير مثلى بين الإنسان والفئران والفأر¹⁰. وعلاوة على ذلك، لا توجد تقارير السمية عند التعبير شيكل حمل خارج الرحم في الخلايا غير ثيرويدال. الأهم من ذلك، شيكل أيضا لم يكن المقترنة مع الاستجابات المناعية المضيف، لا في البشر ولا في القوارض. وقد استخدمت شيكل كجينات مراسل لقياس المروج النشاط^15،،من¹⁶¹⁷ والجينات التعبير^{18،19،20،21،22 ،23} في عدة سياقات مختلفة. فقد استخدمت أيضا لتصوير غير الغازية للجينات العلاج ناقلات^24،25وتتبع الخلايا في القلب⁴و المكونة للدم²⁶والتهاب⁵والدراسات العصبية²⁷. في الآونة الأخيرة، شيكل كما استخدمت كجينات مراسل لتعقب سرطان خبيث في فيفو^3،6.

وباختصار، المزايا الرئيسية لهذا الأسلوب على التقنيات السابقة: (ط) عالية الحساسية غير الغازية 3D في فيفو التعريب والتحديد الكمي المنتشر انتشار، (ثانيا) الإنتاج من [¹⁸و] فرنك بلجيكي₄^– الآلي في أنشطة المولى عالية، (ثالثا) تخفيضاً كبيرا في الحيوانات المطلوبة من خلال التصوير الطولي، (رابعا) الحصول على البيانات المزدوجة من الدورات اللاحقة التصوير أدى إلى تحسين البيانات الإحصائية، مما يقلل بدوره مزيدا من استخدام الحيوانات، و (v) خيار جوهري السابقين فيفو تأكيدا للخلايا السرطانية في الأنسجة بالفحص المجهري الخلوي أو الأسفار.

هذا البروتوكول يفي بجميع المتطلبات التي حددها فريق "المراجعة الأخلاقية" المحلية وتشريعات "المملكة المتحدة" (المملكة المتحدة). عند اتباع هذا البروتوكول، ضمان الإجراءات أيضا تلبية جميع المتطلبات التي تمليها التشريعات الوطنية وهيئة "المراجعة الأخلاقية" المحلية. تضمن كل التجربة التي تنطوي على نشاط إشعاعي متوافقة مع القوانين والقواعد المحلية والمؤداة بأمان.

1-الهندسة وتوصيف الخلايا السرطانية للتعبير عن مراسل الانصهار النويدات المشعة-الأسفار شيكل-تنظيم الأسرة

ملاحظة: لأغراض التبسيط، هو اختصار ميجفب A206K "التجارة والنقل"، ومشري ك "العروض" في الأجزاء اللاحقة من هذا البروتوكول.

1. جيل جسيمات لينتيفيرال
   1. لإنتاج جزيئات lentivirus، شارك ترانسفيكت الخلايا 293T مع البلازميدات الأربعة التالية باستخدام أسلوب تعداء مناسبة: (ط) ترميز بلازميد الجينات مراسل (بلنت سفف شيكل-التجارة والنقل أو بلنت سفف شيكل-طلب تقديم العروض (انظر المعلومات التكميلية)، (ثانيا) الجيل الثالث pMD2.G (iii) برسف-القس، التعبئة والتغليف والبلازميدات بري وبلازميد (رابعا) الفيروس المغلف الذي يتضمن، على سبيل المثال، لينتيفيرال. قبل مزيج من البلازميدات قبل إضافتها لمزيج تعداء. أداء تعداء في غطاء ثقافة خلية.
      ملاحظة: يتم توفير معلومات إضافية تعداء في "المعلومات التكميلية".
   2. تقييم نجاح تعداء بعد 48 ساعة قبل الفحص المجهري معيار واسع المجال الأسفار مع إعدادات عامل التصفية المناسب للمراسل الانصهار المختار (NIS-التجارة والنقل أو شيكل-RFP).
      ملاحظة: إشارات Fluorescence الإرشادية لمراسل الجينات تعداء، وبذا لا بديل تعداء المشارك الناجح، وليس مؤشرا لإنتاج الفيروس ناجحة.
   3. حصاد الفيروسات التي تحتوي على الجسيمات المادة طافية استخدام المحاقن وإزالة الخلايا العائمة والحطام الخلية بعملية التصفية من خلال عامل تصفية بولييثيرسولفوني عقيمة (PES) 0.45 ميكرومتر. نقل إلى أنبوب البولي بروبلين رد فعل معقم 1.5 مل. أداء عمل الفيروس في غطاء ثقافة خلية والتأكد من الفيروس لا يعيش يترك البيئة الواردة.
2. توصيل واختيار شيكل-FP وإذ تعرب عن سرطان الخلية الخطوط
   1. استخدام الفيروس جديدة نقية من الخطوة 1.1.3 مختلطة 1:1 (v/v) مع متوسط النمو الأمثل لكل خط خلية سرطان (دميم لجمعية نجمة داود الحمراء-ميغابايت-231 الخلايا و 1640 ربمي للخلايا 4T1؛ انظر "الجدول المواد" لتشكيل وسائل الإعلام). إجراء توصيل في غطاء ثقافة خلية.
      ملاحظة: بروتوكول أكثر عامة المشار إليها في "المعلومات التكميلية".
   2. ترانسدوسي الخلايا السرطانية مع المحتوية على الفيروس متوسطة في حاضنة مع الغلاف الجوي هوميديفيد التي تحتوي على 5% (v/v) CO₂ في 37 درجة مئوية ح 72 (العمل على مقياس جيدا 6 أو 12-جيدا باستخدام 1 مل أو 0.4 مل من مزيج الفيروس من الخطوة 1.2.1).
   3. مراقبة التعبير شيكل-FP الخلية الهدف بالفحص المجهري الأسفار.
   4. توسيع نطاق الخلايا ترانسدوسيد بنجاح إلى نطاق خلايا 3 مليون باستخدام شروط الثقافة القياسية (انظر ATCC لخطوط الخلايا 4T1 ونجمة داود الحمراء-ميغابايت-231).
   5. استخدام خلية تنشيط fluorescence الفرز (نظام مراقبة الأصول الميدانية) لتنقية الخلايا وإذ تعرب عن FP شيكل من الخلايا غير ترانسدوسيد.
      ملاحظة: نظام مراقبة الأصول الميدانية، يمكن أن تكون مصدرا للعدوى بالميكوبلازما؛ من المستحسن للتحقق من وجود مفطورة قبل إنتاج الفيروس وتوصيل بل أيضا بعد نظام مراقبة الأصول الميدانية وقبل الخطوة 1، 3.
3. توصيف شيكل-FP وإذ تعرب عن سرطان الخلية خطوط
   1. تأكيد التعبير المراسل بقياس تدفق القياسية كما هو موضح في مكان آخر من²⁸.
   2. التأكد من سلامة المراسل ب immunoblotting القياسية كما هو موضح في مكان آخر²⁹.
   3. تحليل التعريب مراسل الانصهار داخل الخلايا بالميكروسكوب الأسفار [كنفوكل].
      ملاحظة: تلطيخ مع أو التعبير المشارك غشاء البلازما علامة⁶ والتعريب المشارك اللاحقة تحليل³⁰ سيسهل هذه الخطوة.
   4. تحليل امتصاص راديوتراسير في نيس-FP خطوط الخلايا وإذ تعرب عن.
      ملاحظة: أي الركازة شيكل المشعة المتوافقة مع المعدات الموجودة غير مناسبة، مثل النظائر يوديد (¹²³أنا^-، ¹²⁴أنا^-، ¹²⁵أنا^-، ¹³¹أنا^–)، ^{م 99} TcO₄^-،^-، ¹⁸⁸تكتنفها₄[¹⁸و] حتى₃و^– أو [¹⁸و] فرنك بلجيكي₄^–.
      1. تنقية البذور 10⁶ خلايا في لوحات 6-جيدا في المتوسطة على النمو الأمثل (انظر الجدول للمواد) قبل يوم واحد من التجربة. إعداد جميع العينات في ثلاث نسخ، وتدرج عينات التحكم: (ط) خصوصية "ضوابط"، أي شيكل-FP وإذ تعرب عن الخلايا المحتضنة مسبقاً مع الركازة شيكل تنافسية لاختبار امتصاص خصوصية؛ (ثانيا) "عناصر الخلية الأبوية"، أي خلايا لم تعرب عن FP شيكل ولكن تلقي راديوتراسير لاختبار امتصاص القاعدية في الخلايا الأبوية.
      2. في صباح اليوم التالي، يغسل خلايا مرة واحدة مع متوسط النمو خالية من المصل.
      3. احتضان خلايا خالية من المصل النمو المتوسطة بحضور 50 بيكيريل ^{99 m}TcO₄^– أو [¹⁸و] فرنك بلجيكي₄^– لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية (1 مل الحجم الإجمالي). لعناصر التحكم في الخصوصية، قبل احتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة مع منافسة الركازة ناكلو₄^– (12.5 ميكرون تركيز النهائي). الحفاظ على تركيز منافسة الركازة ثابت في كافة مراحل التجربة.
      4. جمع المادة طافية ونقل 100 ميليلتر إلى أنبوب جمع معدّة المسمى "طافية".
      5. تغسل الخلايا مرتين مع 1 مل المثلج مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) تحتوي على Ca^{2 +}/Mg^{2 +}. جمع كل حل المياه والصرف الصحي ونقل 100 ميليلتر من كل منها إلى أنبوب جمع معدّة المسمى "wash1" أو "wash2"، على التوالي.
      6. رفع الخلايا بإضافة 500 ميليلتر PBS المحتوية على التربسين 0.25% (w/v) و 0.53 ملم يدتا، وتفرخ في 37 درجة مئوية حتى فصل الخلايا (الاختيار بصريا باستخدام مجهر). نقل التعليق في أنبوب استعداد مجموعة المسماة "خلايا". غسل الآبار مع 500 ميليلتر المثلج برنامج تلفزيوني يتضمن Ca^{2 +}/Mg^{2 +} وإضافة إلى الأنبوب "الخلايا". بيليه الخلايا بالطرد المركزي (250 x ز, 4 دقيقة, 4 درجة مئوية).
      7. تعيين عدد جميع أنواع العينة أربعة من كل كذلك باستخدام أشعة غاما التصدي على النحو الملائم للنظائر المشعة خيار (هنا: ¹⁸و أو ^{م 99}Tc).
         ملاحظة: نظراً للعدد الكبير من عينات في هذا التحليل، ينصح باستخدام γ-عداد الآلي قادرة على تصحيح الانحلال التلقائي.
      8. تحليل البيانات بجمع التهم جاما التي تم الحصول عليها من عينات من كل بئر لتحديد عدد مجموع النشاط إشعاعي للبئر الواحد.
         ملاحظة: أن اليقوتينج في الخطوات 1.3.4.4 و 1.3.4.5 في الاعتبار بضرب الأرقام من 10 ل "طافية"، و "غسل" الكسور.
      9. التعبير عن امتصاص radiotracer الخلوية كنسبة الإقبال على النحو المشار إليه في Equ.1. حساب المتوسطات والانحرافات المعيارية من ثلاث تجارب.
         (Equ.1)
         ملاحظة: هنا، تجارب التحقق من صحة مراسل موصوفة، لكن في نهاية المطاف الوظائف الخلوية غير متعلقة بمراسل (مثل انتشار، وغزو خلايا السرطان، التعبير الجيني إلخ) الخاصة بالتطبيق والمسؤولية لكل مستخدم.

2-إنشاء نماذج ورم في فيفو

1. استخدم فقط تتميز الكامل والتحقق من صحة الخلايا لإجراء تجارب عليها في فيفو . التحقق من صف خلايا قبل الإدارة بأي أسلوب مناسب (مثل الأسفار مجهرية، التدفق الخلوي) في كل مناسبة.
2. إنشاء نموذج الورم في الفئران الإناث الصغار والكبار 5-6 أسابيع من العمر. استخدام بالب/كانكرل أو الفئران بالب/cAnN.Cg-Foxn1^نو (عارية بالب/ج) لنموذج الورم 4T1 و إيماءة. بركدك cg^{إخضاعها} Il2rg^tm1WjI/SzJ الفئران (مجموعة موردي المواد النووية) لنموذج جمعية نجمة داود الحمراء ميغابايت-231-المستندة إلى الورم. حلق الحيوانات محلياً واستخدام تقنية العقيم. مباشرة حقن 50 ميليلتر من تعليق يتضمن 10⁶ شيكل-FP إذ تعرب عن سرطان خلايا/مل في لوحة الدهون الثديية بين الرابعة وفي الحلمة الخامسة³¹.
   ملاحظة: لتحسين دقة الحقن، من المستحسن إجراء الحقن تحت التخدير العام باستخدام مخدر هنالك مثل إيسوفلوراني (1-2% (v/v) في س₂).
   ملاحظة: غرس الجراحي لقطع ورم من الأورام شيكل-FP وإذ تعرب عن نهج بديل للورم نموذج إنشاء³¹.
3. تحقق من الأسفار خلايا في مواقع الحقن بعد الإدارة وفي الأيام الأولى بعد الحقن. استخدام الأسفار الشعلة وتصفية نظارات مناسبة لتنظيم الأسرة الاختيار.
4. رصد نمو الورم والتحقق من وجود أي علامات سريرية (لا سيما في نقاط زمنية لاحقة).
   ملاحظة: لاورام سطحية، أي أورثوتوبيك الثدي أورام في هذا البروتوكول، واستخدام الفرجار، والصيغة لقطر الورم يعني (مليون دينار) = ½· (ل + W) ³².

3-إنتاج [¹⁸ و] فرنك بلجيكي ₄^– باستخدام منصة توليف (جمعية الإغاثة اﻷرمنية) راديوتراسير الآلي.

ملاحظة: هنا، توليف₄^– فرنك بلجيكي الآلي [¹⁸و] استناداً إلى الأسلوب من ¹⁸و بالإضافة إلى فلوريد البورون الثلاثي هو وصف. مستخدمين منصة ARS متاح على نطاق واسع (انظر الجدول للمواد)، يمكن تحميل ملف لغة التوصيف القابلة للتوسيع (XML) المقابلة المطلوبة لتشغيل تسلسل الآلي على هذا النظام الأساسي (ملف تكميلي). ويرد شرحاً مفصلاً لتخطيط كاسيت هو مبين في الشكل 1 في (الجدول 1) فضلا عن وصف مفصل لكل خطوة في ملف XML التسلسل (الجدول 2) لدعم الترجمة إلى أي منصة مؤتمتة.

1. إعداد منهاج جمعية الإغاثة اﻷرمنية كما هو موضح في الجدول 1 والتأكد من أنها التشغيلية مع ملف XML صحيح تحميلها على الكمبيوتر التحكم. ضمان وضع منهاج جمعية الإغاثة اﻷرمنية في غطاء كيميائية مناسبة لسلامة العمل مع كميات جبق من النشاط الإشعاعي.
2. نضح أنتجت سيكلوترون [¹⁸و] و^– (عادة جبق 1.5-2 في 2-7 مل [¹⁸س] ح₂س) عن طريق مدخل الخزان (V6).
3. مصيدة النشاط الإشعاعي راتنج تبادل شاردة (مثل رباعي الأمونيوم شاردة تبادل خرطوشة; V5 ل V4)، استرداد [¹⁸س] ح₂س في قنينة منفصلة (V1).
4. الوت [¹⁸و] و^– (عكس شطف، V5 ل V4) في المفاعل (V8) مع ميليلتر 750 من 0.9% (w/v) المحلول الملحي (V2)، تليها 1.5 مل من الاسيتو الانيتريل (V16).
5. إزالة المياه بالتبخر أزيوتروبي تحت تدفق الفراغ والنيتروجين بتدفئة في 105 درجة مئوية ثم 120 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
6. خفض درجة حرارة المفاعل إلى 80 درجة مئوية.
7. إضافة 800 ميليلتر من 5-15-التاج في الاسيتو الانيتريل اللامائى (46 ملغ، 0.21 ملمول) إلى الجاف [¹⁸و] و^– من خلال الميناء المركزي للمفاعل (V8).
8. إضافة ميليلتر 850 فرنك بلجيكي₃. أويت₂ في الاسيتو الانيتريل اللامائى (0.16 mg، 1.13 µmol) للمفاعل.
9. الرد لمدة 5 دقائق بينما كان عائدا إلى درجة حرارة الغرفة.
10. تمرير الخليط رد فعل عن طريق خرطوشة أكسيد الألومنيوم (V17 ل V18) إلى اعتراض تريفلوروبوراتي.
11. العودة الخليط رد فعل لحقنه S2 وتخفف بالماء (حوالي 1.6 مل).
12. تمرير الخليط رد فعل عن طريق خرطوشة تبادل شاردة ثانية (V19 إلى V20) إلى اعتراض المنتج₄^– فرنك بلجيكي [¹⁸و].
13. أغسل المفاعل بالماء (حوالي 5.5 مل).
14. تمرير حل الناتجة عن طريق شركة ألومينا وخراطيش تبادل شاردة الثانية.
15. شطف المحاقن S2 و S3 بالماء.
16. أغسل خرطوشة تبادل شاردة الثانية مع المياه والجافة مع غاز النيتروجين.
17. الوت المنتج (V19 إلى V20) مع 1 مل من 0.9% كلوريد الصوديوم (V14) في المحاقن S3.
18. نقل المنتج (400-500 ميليلتر) عن طريق خط منفذ (V21) لقنينة جمع زجاج 1 مل.
    ملاحظة: نشاط المولى جانبا هاما من كل راديوتراسير. ومع ذلك، عزمها الروتينية ليس فقط مضيعة للوقت لكن أيضا يتطلب كميات كبيرة من تجميعي طازجة [¹⁸و] فرنك بلجيكي₄^-، مثل أن يصبح عاملاً مقيداً لعدد الحيوانات التي يمكن تصويرها. لاختبار إمكانية تكرار نتائج وأنشطة المولى لما نتج عنها [¹⁸و] فرنك بلجيكي₄^–، من المستحسن لجدولة عدد قليل من تشغيل اختبار مخصصة لهذا الغرض. لمزيد من التفاصيل حول أنشطة المولى، يرجى الرجوع إلى قسم النقاش.

4-الخلايا في فيفو تصوير شيكل-FP الإعراب عن طريق نانوبيت/CT

1. إعداد الحيوانات
   1. تخدير الفئران مع isoflurane 1.5-2.0% (v/v) في س₂ بمعدل 1.0-1.5 لتر في الدقيقة في دائرة التعريفي لتدفق. للتحقق من وجود نظرة التخدير كافية لغياب رد الفعل الدواسة.
   2. ضمان تطبيق مرهم البيطرية في عيون الحيوان لمنع جفاف بينما تحت التخدير
   3. حرك الماوس على لوحة تدفئة مع الآنف في قناع توريد مخدر والحارة الذيل (مثلاً بأنها تستنزف المياه 37 درجة مئوية أو باستخدام مصباح ضوء الأشعة تحت حمراء).
   4. تمييع فرنك بلجيكي الطازجة العقيمة التي تمت تصفيتها [¹⁸و] حل₄^– مبق 5 الواحد 50 ميليلتر مع المالحة العقيمة 0.9 في المائة.
   5. استخدام حقنه متصلة إبرة حقن (قياس 29-31) ورسم 100 ميليلتر من الحل₄^– فرنك بلجيكي [¹⁸و] وقياس النشاط الإشعاعي في المحاقن وملاحظة القيمة ووقت القياس.
   6. إدارة 50 ميليلتر من الحل₄^– فرنك بلجيكي [¹⁸و] الوريد الوريد ذيل المعالجون مسبقاً.
   7. قياس النشاط الإشعاعي المتبقي في المحاقن وملاحظة القيمة ووقت القياس. الفرق بين القيم التي تم قياسها في الخطوات 4.1.7 و 4.1.5 هي حقن جرعة (ID).
   8. تعيين مؤقت العد التنازلي من 45 دقيقة (وقت البدء لتصوير الحيوانات الأليفة = 0 دقيقة).
   9. ضع الماوس على السرير للماسح الضوئي نانوبيت/الأشعة المقطعية وضمان الإمداد بمخدر إعادة المرفق بشكل صحيح.
   10. تحقق يبقى التخدير الكامل عن طريق اختبار لغياب رد الفعل دواسة.
   11. ضمان وضع الماوس على السرير بالطريقة المرجوة، مثل 'أبو الهول'-مثل الموقف.
   12. تثبيت أجهزة مراقبة الحيوان وفقا لتوصيات الشركة المصنعة، مثل مجس درجة حرارة المستقيم، مجس قياس الحيوان في التنفس، أو أقطاب لتسجيل كهربية. التحقق من وظيفة مناسبة لجميع الصكوك.
       ملاحظة: للاختبارات المجراة في خصوصية مع نيس radiotracer [¹⁸و] فرنك بلجيكي₄^–، الحيوانات يتم تصويرها كما هو موضح أعلاه، وثم استراح مستيقظا حتى قد التهاوي النشاط الإشعاعي بما فيه الكفاية اعتبار لا يعتد بها، مثلاً ح 48 1.3·10 في وقت لاحق عندما فقط^−6% المتبقية ¹⁸و النشاط الإشعاعي سيكون حاضرا في الحيوان. في الدورة اللاحقة التصوير، تدار الركيزة تنافسية أومه₄^– بجرعة 200 مغ/كغ و 30 دقيقة قبل الإدارة راديوتراسير، والتصوير يتم كما هو موضح أعلاه.
2. التصوير بواسطة نانوبيت/CT
   1. تعيين المطلوب CT تصوير المعلمات، مثل استخدام الجهد أنبوب كفب 55 نانوبيت/CT، وتعيين وقت التعرض إلى 1200 مرض التصلب العصبي المتعدد مع تصعيد درجة واحدة الزاوي وإسقاطات 180 درجة.
   2. تعيين المعلمات للحصول على الصور الحيوانات الأليفة. استخدام ثابت مسح معلمات الحيوانات الأليفة لمدة 30 دقيقة، ووضع صدفة 1:5 400-600 كيفب الطاقة النافذة.
   3. في وقت العد التنازلي = 15 دقيقة الحصول على الصور المقطعية ابدأ.
   4. في وقت العد التنازلي = 0 دقيقة ابدأ الحيوانات الأليفة الحصول على الصور.
      1. إذا كان المسلسل تصوير الحيوانات الحيوانات المطلوبة، دعونا يتعافى تماما من التخدير، أي استعادة وعيه تحت الإشراف. وفي وقت لاحق، نقلها إلى وحدة صيانة.
      2. إذا كانت هذه هي المحطة الطرفية التصوير الدورة، المضي قدما إلى القتل الرحيم الحيوانية أما جرعة مخدر، ارتفاع تركيز ثاني أكسيد الكربون، أو التفكك في الرقبة.

5-تحليل البيانات في فيفو

1. إعادة إنشاء البيانات PET/CT باستخدام خوارزمية تكرارية 3D الكاملة المستندة إلى مونتي كارلو. ضمان أن يتم بحث التصويبات التوهين والوقت الميت وتحلل النظائر المشعة. للتفاصيل، راجع إرشادات الشركة المصنعة للصك PET/CT في استخدام.
2. الصور المقطعية الاختيار والحيوانات الأليفة شارك مسجلة بشكل صحيح وحفظ البيانات في تنسيق تبادل مناسبة مثل 'التصوير الرقمي والاتصالات في الطب' (DICOM).
3. تحليل الصور
   1. تحميل ملفات DICOM أعيد بناؤها في صورة مناسبة تحليل برمجيات التي تمكن من التعرف على وترسيم المناطق الاهتمام (رويس) والحيوانات الأليفة اللاحقة إشارة الكمي في هذه رويس.
   2. الجزء رويس استخدام العتبة اليدوي أو التكيفية لتعريف رويس^33،34 باستخدام حزمة برامج مناسبة. معلومات الصورة التشريحية من المقطعية يساعد دليل دوروا التعيين، مثل أورام سطحية أو أحجام الرئة.
   3. استخدام برمجيات التحليل وفقا لإرشادات الشركة المصنعة والتأكد من معايرة لجرعة إشعاعية حقن البيانات وتصحيحها التوهين والانحلال الإشعاعي.
4. رسم الرسوم البيانية عرض البيانات من هذا التقدير الكمي في فيفو . بيانات صريحة في المائة أما حقن جرعة/وحدة التخزين (%ID/mL) أو قيمة الإقبال القياسي (سيارات الدفع الرباعي)، وهو تدبير بديل النظر في النشاط الإشعاعي في الجسم كله لهذا الموضوع.
   1. حساب القيم %ID/g افتراض كثافة الأنسجة لتكون مثل الماء، أي ~ 1 غ/ل. جدير بالذكر أن هذا الافتراض يمكن أن تكون صالحة للأجهزة مع كثافات مختلفة إلى حد كبير، مثل الرئة أو العظام.
   2. حساب الدفع الرباعي المختلفة لتقدير سيارات الدفع الرباعي صحيح (على سبيل المثال. سوفمين، سوفماكس)؛ سوفماكس هو أكثر موثوقية للأجسام الصغيرة، ويستخدم بشكل متكرر أكثر من سوفمين³⁵.

6-تحليلات السابقين فيفو

إجراء تحليلات المتلقين للمعلومات المدرجة: تصوير (ط) الأسفار من الأجهزة التي تحتوي على الخلايا السرطانية الفلورسنت (الورم الرئيسي والانبثاث) أثناء تشريح الحيوان، (ثانيا) قياس توزيع الأنسجة راديوتراسير، و (ثالثا) نسيجية أو (رابعا) تقييم سيتوميتريك لأجهزة سرطانية.

1. قياس التوزيع radiotracer γ-عد (السابقين فيفو بيوديستريبوشن) و السابقين فيفو fluorescence تصوير الأنسجة السرطانية.
   1. قياس النشاط الإشعاعي للحيوان الميت كله وملاحظة القيمة والوقت.
   2. تشريح الحيوانات والحصاد الأنسجة التالية: الرئة، القلب، الدم (باستخدام الشعيرات الزجاج عيار 20 ملم)، الكبد، المعدة، الكلي، الطحال، الأمعاء الصغيرة والكبيرة، الغدة الدرقية والغدد اللعابية، قطعة من عضلة من الساق، وعظم قصبة الخلفي، و ذات الصلة وديسيكتيبلي الغدد الليمفاوية والأنسجة السرطانية.
   3. قياس النشاط الإشعاعي للذبيحة المتبقية بما في ذلك أولاً ثم باستثناء الذيل وملاحظة القيم والأوقات للقياس.
      ملاحظة: النشاط الإشعاعي في الذيل يمكن اعتبار النابعة من راديوتراسير التي تم حقن سوء، وهكذا لم تصل إلى الدورة الدموية؛ ومن ثم، لا تساهم هذه الكمية من راديوتراسير حقن الجرعة. النشاط الإشعاعي ذيل يخدم أيضا كمعلمة أثر رجعي من نوعية الحقن.
   4. تزن كل الأنسجة (استخدام أنابيب موزون مسبقاً).
   5. التقاط صور فوتوغرافية لأجهزة سرطانية في وضح النهار وتحت ضوء الأسفار.
      ملاحظة: استخدم موقف كاميرا للحفاظ على المسافة بين عدسة الكاميرا وجهاز ثابت (أو استخدام أداة تجارية مخصصة لهذا الغرض).
   6. تضمين أجهزة/أنسجة مخصصة لعلم الأنسجة المصب في أكتوبر أو تزج لهم في الفورمالين للتثبيت. يمكن أن تختلف إعداد نموذج لغيرها من تطبيقات المتلقين للمعلومات.
   7. إعداد radiotracer معايير المعايرة في المكررة، مثل بيكيريل [¹⁸و] من 0 إلى 1000 فرنك بلجيكي₄^–.
      ملاحظة: معايرة المعايير تلزم (ط) تتعلق التهم يقاس كل دقيقة لقيم النشاط الإشعاعي (في بيكيريل)، و (ثانيا) تبسيط تصحيح الاضمحلال؛ ¹⁸ يمكن استبدال و^{– –}[¹⁸و] فرنك بلجيكي₄.
   8. حساب النشاط الإشعاعي لجميع الأنسجة المقطوع باستخدام عداد γ جنبا إلى جنب مع معايير معايرة النشاط الإشعاعي من الخطوة 6.1.7. ملاحظة وقت القياس. إذا كان حساب معدلات مرتفعة للغاية (أي خارج الخطي للمعايرة القياسية أو المشار إليه بعاليه للغاية للكشف عن قتلى مرات)، إعادة عد عينات اثنين radiotracer التنصيف في وقت لاحق.
   9. تقديم البيانات أما %ID/g أو قيم الإقبال القياسي (سيارات الدفع الرباعي) (Equ.2).
      سيارات الدفع الرباعي = (Equ.2)
   10. تجاهل جميع الأنسجة المقطوع غير مطلوبة لمزيد من التحليلات المصب وفقا لقواعد إدارة النفايات المحلية.
2. تحليل الأنسجة السرطانية بالخلوي أو الأنسجة وفقا لتفضيلات المستخدم ومستوى البروتوكولات الملحقة بها (كما هو موضح في مكان آخر^3،،من⁶²⁸).

الخطوة الأولى يتطلب الهندسة الوراثية للخلايا السرطانية للفائدة. هنا، والنتائج لتوصيل لينتيفيرال خلايا سرطان الثدي المنتشر مورين 4T1 التحريضية والبشرية خلايا MDA-ميغابايت-231 المنتشر مع lentivirus تظهر جزيئات تحمل الحمض النووي ترميز شيكل-التجارة والنقل أو شيكل-طلب تقديم العروض. توصيل كفاءات تراوح بين خطوط خلايا السرطان (الشكل 2A، العمود الأيسر). ومع ذلك، ترانسدوسيد الناتجة كل خلية سرطانية تم اختيار خطوط بنظام مراقبة الأصول الميدانية للنقاء (الشكل 2A، حق). الأسفار [كنفوكل] مجهرية (الشكل 2) أثبت التعريب الصحيح غشاء البلازما للدول المستقلة حديثا-كان كمياً FPs شيكل-FP الدالة استخدام امتصاص radiotracer الممنوحة من الدول المستقلة حديثا (الشكل 2-2E) وأظهرت دالة شيكل و خصوصية. جدير بالذكر أن لا اختلافات كبيرة بين 4T1. شيكل إسرائيلي جديد-التجارة والنقل و 4T1. تم العثور على خطوط الخلايا إذ تعرب عن الدول المستقلة حديثا-طلب تقديم العروض مع مستويات مماثلة من التعبير شيكل (الشكل 2).

أثر كامل في المختبر توصيف خط الخلية، تم إعداد نماذج الورم مع خطوط خلايا السرطان يمكن تتبعها الذي تم إنشاؤه حديثا. على سبيل مثال، 4T1. شيكل إسرائيلي جديد-بروتينات فلورية خضراء الورم النموذجي، نموذجا لسرطان الثدي التحريضية، يظهر هنا (الشكل 3). في الحيوانات الحاملة للورم طولية الجسم كله الحيوانات الأليفة التصوير ثم على علم بتطور الورم بما في ذلك انتشار المنتشر (الشكل 3B). كان ضروريا لتصوير الحيوانات الأليفة radiotracer [18و] فرنك بلجيكي4– والطازجة المنتجة في الصباح من كل الحيوانات الأليفة التصوير الدورة. تم إجراء توليف من [18و] فرنك بلجيكي4– باستخدام الأسلوب ARS وصف. عادة، تستخدم كمدخل ~1.6 جبق 18و– وحصل ~ 244 BF مبق [18و]4– في 40.5±3.9 دقيقة (N = 17). تم تحليلها بواسطة الراديو طبقة رقيقة اللوني أو أيون اللوني المنتج وأظهرت درجة نقاء الكيمياء الإشعاعية من 94.7±1.4%. وكان العائد الكيمياء % 19.4±4.0 (تسوس تصحيح).

في اليوم 19 بعد التطعيم الورم، الورم الرئيسي وضوح استخدام الحيوانات الأليفة، ولكن العثور على لا الانبثاث. بعد عشرة أيام (يوم 29)، الفئران الحاملة للورم نفسه إعادة المصورة وحددت ورم خبيث البعيدة في مختلف المواقع في جميع الحيوانات (ورم خبيث في الرئة، ورم خبيث لمختلف الغدد الليمفاوية الاربية و/أو إبطي). المثال في الشكل 3 يبين ورم خبيث في الرئة واسعة النطاق مع العديد من العقيدات يمكن تحديدها بوضوح وقابلة للقياس في الرئة (الشكل 3B-3E). وعلاوة على ذلك، قدم الحيوان الإقليمية انتشار الورم في الجدار البريتوني فضلا عن ورم خبيث في الاربية وكلا الليمفاوية إبطي. تختلف قيم معرف % من الانبثاث الفردي في الرئة (رقم 3E) على نطاق واسع، ولكن ذلك لم وحدات التخزين المحتلة العقيدات المنتشر الكامنة. وفي المقابل، كانت القيم تطبيع حجم %ID/mL (رقم 3E) موحدة أكثر بكثير. وكان هذا مفهومة الانبثاث مختلف مراحل التنمية مماثلة (أي بين أيام 19 و 29؛ الشكل 3). على النقيض من ذلك، كانت قيمة %ID/mL طبيعية للورم الرئيسي أقل من تلك التي الانبثاث الرئة، وهو ما يتماشى مع كتلة ورم قد مزيد من الوقت لإحراز تقدم وإعادة تشكيلها بما في ذلك تدفق أنواع الخلايا الأخرى (الخلايا اللحمية والخلايا المناعية) ، لا سيما في هذا النموذج من سرطان الثدي التحريضية.

تسترشد بالصور في فيفو والأسفار من الخلايا السرطانية (مرئية أثناء تشريح الحيوان تحت الضوء الفلورية)، أجهزة عميقة الجذور الصغيرة مثل الليمفاوية موثوق حصادها، وفي الوقت نفسه، بتقييم للعقيدات سرطانية (المحتوى الشكل 4A). كان يدل على وجود ورم الخلية إشارة fluorescence أثناء تشريح الحيوان، فمن المهم لضمان هذا التصنيف كان يرافقه السابقين فيفو قياسات النشاط الإشعاعي للأنسجة المقطوع. يظهر الشكل 4B القيم الإقبال القياسي (سيارات الدفع الرباعي) الحصول على أنسجة مختلفة عبر مجموعة حيوانات الثلاثة، التي قدمت مع ورم خبيث. اندوجينوسلي شيكل-الإعراب عن أجهزة مثل الغدة الدرقية والغدد اللعابية (حصاد جنبا إلى جنب) أو المعدة أظهرت أيضا استيعاب radiotracer العالية المتوقعة. وعلاوة على ذلك، يسمح هذا النهج FP شيكل تحديد خلية السرطان مباشرة خلال الأنسجة (الشكل 4). أظهرت البيانات المثال الأنسجة الفلورة هذا ورم الأوعية الدموية في 4T1. نموذج الورم شيكل-التجارة والنقل. وأظهرت هذه البيانات أيضا أن المراسل شيكل-بروتينات فلورية خضراء يقيمون أساسا في الأغشية البلازمية للورم خلايا أيضا في فيفو (الشكل 4)، وبالتالي التحقق من صحة نتائج الإقبال.

رقم 1. مخطط تفاصيل إنشاء منصة توليف راديوتراسير الآلي للإنتاج [18و] فرنك بلجيكي4– عن طريق الأسلوب إضافة فلوريد ثلاثي الفلور-18--إلى--البورون- يتم طباعة أسماء الكاشف على أنابيب كل منهما في المخطط. كما هو الاختصار لتبادل شاردة أمونيوم رباعي، ويشير إلى المواد المستخدمة الفصل الكروماتوغرافي المرحلة الصلبة. وتتوفر تفاصيل إضافية في الجدولين 1 و 2. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 2. نتائج توصيف نموذجي لخطوط خلايا سرطان ستابلي يعبر عن الدول المستقلة حديثا-التجارة والنقل أو شيكل-طلب تقديم العروض. (أ) أجريت خطوط الخلايا المشار إليها باستخدام لينتيفيروسيس نقل شيكل-التجارة والنقل أو شيكل-طلب تقديم العروض. يوضح العمود الأيسر السكان ترانسدوسيد (الأخضر أو الأحمر نيون) بالمقارنة مع الخلايا الأبوية كل منهما (رمادي؛ 4T1 ونجمة داود الحمراء-ميغابايت-231 الخلايا، على التوالي). إظهار النسب المئوية كفاءة توصيل حسبما يقرره التدفق الخلوي. يظهر العمود الأيسر نتائج تدفق التحليلات سيتوميتريك بعد تنقية نظام مراقبة الأصول الميدانية للسكان مختلطة في العمود الأيسر. وتبين أن جميع خطوط الخلايا > 99 ٪ نقية لأشار إلى الخلايا معربا عن شيكل (عن طريق التدفق الخلوي). (ب) يبين الفحص المجهري الأسفار [كنفوكل] من خطوط الخلايا المنقي التعريب غشاء البلازما شيكل-التجارة والنقل أو شيكل-طلب تقديم العروض في خطوط الخلايا الخاصة بكل منها. وغ Alexa633 كعلامة غشاء البلازما. (ج، د) التحقق من الصحة الوظيفية من البروتين شيكل-FP المعرب عنها في رد حديثا إنشاء خطوط خلايا السرطان. وتم قياس الدالة شيكل استخدام radiotracer 99 mTcO4– (50 بيكيريل الواحدة ملايين الخلايا). واستخدمت خلايا الوالدين كعناصر تحكم، فضلا عن الانصهار مراسل تعرب عن الخلايا التي كانت تعامل مع بيركلورات الركازة المشارك شيكل قبل وأثناء الفحص (التحكم بخصوصية). النتائج تبين بوضوح وظيفة FP شيكل وخصوصية في جميع خطوط الخلايا. (ه) التحقق من الصحة الوظيفية من 4T1. شيكل إسرائيلي جديد-FP خطوط الخلايا استخدام [18و] فرنك بلجيكي4– راديوتراسير للدول المستقلة حديثا. وكانت جميع الشروط الأخرى مطابقة ل (ج). الأهم من ذلك، الإقبال النسبي مشابهة جداً تم الحصول على نتائج لكل خطوط الخلايا المشتقة من 4T1 مع كلا راديوتراسيرس (الشكل 2 وهاء)، وبالتالي تبرير استخدام للتبادل في المختبر التوصيف الوظيفي لكل من وإذ تعرب عن خطوط الخلايا FP شيكل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 3. الممثل نتيجة لورم خبيث تتبع طريق [18و] فرنك بلجيكي4–-PET/CT تصوير في ماوس واضعة 4T1. ورم شيكل-التجارة والنقل- (أ) 1 مليون 4T1. تم حقن الخلايا شيكل-التجارة والنقل في منصات الدهون الثديية من 5-6 أسابيع من العمر بالب/ج CanN.Cg-Foxn1نو/Crl الفئران وأعقب نمو الورم على مر الزمن باستخدام الفرجار. سبب fluorescence بروتينات فلورية خضراء من الخلايا السرطانية، كان تقييم الهوية البصرية الخام/النمو أيضا إمكانية استخدام شعلة الأسفار والنظارات مرشح مناسب (انظر الإطار الداخلي). (ب/يسار) كان وضوح الورم الرئيسي (خط أصفر متقطع) يوم 19 وظيفة ورم التطعيم، لكن لا ورم خبيث. الصورة المعروضة إسقاط أقصى شدتها (MIP) بصورة الحيوانات الأليفة. وسجلت أيضا إشارات شيكل الذاتية (واصفات الأبيض)، أي الغدة الدرقية والغدد اللعابية (Th + سان جرمان)، المعدة (S)، وكذلك، عند مستويات منخفضة جداً، بعض أجزاء الغدد الثديية ولاتشريمال. إشارة المثانة (ب) ينبع من إفراز الراسم. (ب/يمين) في يوم 29 وظيفة ورم التطعيم، ورم خبيث قد تحدد بوضوح: الانبثاث متعددة في الرئة (الخط المنقط صفراء)، فضلا عن العقد الليمفاوية المنتشر (إيلن، أكسلن؛ رؤوس الأسهم الصفراء). الصورة المعروضة هي MIP الصورة PET/CT. الورم الرئيسي (خط أصفر متقطع) نما ليس فقط في شكل كروي عند هذه النقطة الزمنية، ولكن أيضا قد غزت داخل الجدار البريتوني. (ج) تطبيق 3D تقنية العتبة أوتسو تمكين عرض سطح ثلاثي الأبعاد في الأنسجة السرطانية؛ وهذه يتم فرضه على MIP الحيوانات الأليفة. الانبثاث الرئة مبينة في العقد الليمفاوية إبطي أبيض، المنتشر باللون الأحمر، والعقدة الليمفاوية الاربية المنتشر باللون الأصفر، والورم الرئيسي التي غزت في الجدار البريتوني في عملية "توركواز". (د) صورة ضربة متابعة ل MIP PET/CT في (ب/يمين) للإشارة إلى الانبثاث الرئة الفردية. (ه) كمياً من الصور الثلاثية الأبعاد (معرف %) امتصاص راديوتراسير في الأنسجة السرطانية وتطبيعها بأحجامها كل منهما (%ID/mL). وتتوافق مع الانبثاث الرئة فردية الترقيم في (د). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 4. من الأمثلة النموذجية على السابقين فيفو البيانات يمكن الوصول إليها من الفئران الحاملة للورم FP شيكل. (أ) أثناء الحصاد الأنسجة لتحليلات المصب، خصائص الخلايا السرطانية أعرب شيكل-FP الفلورسنت بمثابة مؤشر توجيه تشريح الحيوان. كالنماذج، الأنسجة من الحيوان في الشكل 3، يتم إظهار أي الرئة مع عدة آفات المنتشر واثنين الليمفاوية إيجابية. التصوير الصيفي كذلك تظهر الصور الفلورية. وقد اتخذت الصور الأسفار مع الكاميرا نفسها كالصور الصيفي ولكن تحت زرقاء خفيفة الإثارة (450±10 شمال البحر الأبيض المتوسط ممر الموجه مرشح) مع عامل تصفية انبعاثات خضراء (530±30 شمال البحر الأبيض المتوسط ممر الموجه مرشح) وضعت أمام عدسة الكاميرا. (ب) توزيع راديوتراسير في مختلف أجهزة الحيوانات مع 4T1 ('بيوديستريبوشن'). أورام شيكل-التجارة والنقل (N = 3؛ يوم 29 وظيفة ورم التطعيم 5 فرنك بلجيكي مبق [18و]4–). الإقبال القياسي تم حساب قيم (سيارات الدفع الرباعي) وقيم > 1 تشير إلى تراكم محددة من راديوتراسير في الأجهزة المعنية. تشير البيانات إلى امتصاص radiotracer محددة في الأنسجة السرطانية، أي الورم الرئيسي، العقد الليمفاوية المنتشر (كما تم تحديدها بالتصوير والتشريح تحت الفلورية الخفيفة)، والرئة (تم تشريح ككل دون فصل الانبثاث الفردي)، وكذلك الإعراب عن أجهزة اندوجينوسلي شيكل، أي الغدة الدرقية والغدد اللعابية والمعدة. (ج) الفلورة علم الأنسجة الورم الابتدائي من الماوس نفسه كما هو مبين في الشكل 3. الورم الرئيسي كان حصادها والمضمنة في أكتوبر والمجمدة قبل مقطعة (10 ميكرون) والمجهزة لتلطيخ. وحددت شيكل-التجارة والنقل وإذ تعرب عن الخلايا السرطانية مباشرة دون الحاجة إلى تلطيخ جسم. كانت ملطخة الأوعية الدموية بجسم أرنب ضد الماوس بيكم-1/CD31 (2 ميكروغرام/مل) وجسم ثانوية أرنب المضادة مترافق Cy5 ماعز. كانت الملون الأنوية مع 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5'-Bi-1H-benzimidazole (1 ميكروغرام/مل) والعينة التي شنت في بولي (الكحول الفينيل-خلات الفينيل) التي تحتوي على 2.5% (w/v) دابكو أنتيفادي. تم الحصول على صور [كنفوكل] استخدام مجهر [كنفوكل] مع الإعدادات المناسبة ل 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5'-Bi-1H-benzimidazole، Cy5 والتجارة والنقل. هذه البيانات المثال تبين بوضوح أنه في 4T1. هو vascularized الورم شيكل-التجارة والنقل ولكن أيضا تلك الأوعية الدموية يختلف في مداه (انظر الحافة العلوية اليسرى مع الوسط السفلي). ويظهر أيضا أن المراسل شيكل-التجارة والنقل يقيم غالباً في أغشية البلازما ورم الخلايا في فيفو (داخلي)، وبالتالي التحقق من صحة نتائج الإقبال في المختبر . الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الجدول 1. وصف تخطيط كاسيت لتوليف4– فرنك بلجيكي الآلي [18و] عن طريق الأسلوب إضافة الفلور-18--إلى--البورون فلوريد ثلاثي (انظر الشكل 1).

الجدول 2. وصف الخطوات في ملف التسلسل XML.

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.