Name: في التصوير Bioluminescent المجراة من أورام الثدي باستخدام IVIS الطيف (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: تعلم تصوير الأورام السرطانية باستخدام التألق الحيوي في الفئران. يتيح هذا البروتوكول غير الجارح مراقبة نمو الورم في الوقت الفعلي وتقييم فعالية العلاجات المختلفة بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويمكن استخدام مجموعة متنوعة من luciferase معربا عن خطوط الخلايا السرطانية للبحوث ما قبل السريرية في نماذج الماوس. وتقدم هذه الخلايا بوصفها ثقافة خالية من مسببات الأمراض المجمدة ، والتي سوف تنمو بسرعة في وسائل الاعلام القياسية مع عدم وجود حاجة لعلامات التحديد. لتجربتنا ، سنستخدم 4T1 - luc2 الفئران الخلايا السرطانية الثديية الخط ، الذي يعبر عن هذا الجين luciferase يخدم كمؤشر البصرية في التعبير الجيني أو tumorgenesis في الجسم الحي. سوف نستخدم التعبير luciferase لتتبع نمو الورم الرئيسي غير جراحية ، ولكن يمكن أيضا أن تستخدم لتحديد ورصد الآفات النقيلي. يجب التحقق من النشاط Luciferase قبل الحقن ، ومن أجل القيام بذلك ، يتم حصادها قارورة 90 ٪ متموجة والتي trypsinization ثم تحصى. ثم يتم الاستغناء عن 50000 الخلايا في بئر واحدة من لوحة microtiter والتخفيفات المتسلسلة يتم تنفيذها. يضاف إلى Luciferin آبار في 150ug لكل مل والمحتضنة لمدة 2 دقيقة. ولا يمكن تصوير وmicroplate في IVIS أو قارئ لوحة الانارة لتحديد مستويات التعبير. هذا الخط يعبر عن الخلية يصل إلى 6500 الفوتونات في كل خلية في الثانية الواحدة ، ولكن يمكن تصوير أي مستوى التعبير أعلاه 500 الفوتونات في كل خلية في الثانية بنجاح في الجسم الحي. الآن أن لدينا خلايا النشاط الأمثل ، ويمكن أن ننتقل الى الخطوة الحقن تحت الجلد. من أجل تسهيل الكشف الأمثل للورم ، ونحن باستخدام الماوس سلالة athymic المناعة عارية. قبل الحقن ، لتخدير الحيوانات هي أثر للتخدير عميق. يتم حقن القادم فإننا سوف تضخ ما يصل إلى 250،000 الخلايا في برنامج تلفزيوني 100ul تحت الجلد في الجناح. تحميل الخلايا في حقنة 1 مل ونعلق إبرة قياس 26. رفع الجلد بلطف مع ملقط لجعل &quot;خيمة&quot; وحقن الخلايا في القاعدة. ولا يمكن تصوير حقن الخلايا حديثا على الفور. في كل دورة التصوير يدار ثم مجموعه من 150mg Luciferin لكل كيلوغرام من وزن الجسم عن طريق حقنتين في التجويف البريتوني. في هذه الدراسة ، يتم تصوير الحيوانات بعد 10 دقائق من الحقن Luciferin لضمان تدفق ثابت الفوتون. سنوضح لك ذلك في الخطوة التالية. يمكن Luciferin حركية تختلف من يوم لآخر. في هذا نموذج معين ، وقياس 10 دقيقة بعد الحقن Luciferin أعطى نتيجة ضمن مجموعة من التقلبات 15 ٪. لدينا تجربة سنستخدم الطيف IVIS في نظام التصوير فيفو يستخدم الخلفية ضعيفة الجهاز المسؤول إلى جانب تبريدها إلى -90 درجة مئوية إلى تحقيق أقصى قدر من الحساسية. لدعم الكميات المطلقة ، ونظام الإجراءات تهمة الظلام أثناء وقت لأسفل ويدير الذاتي المعايرة أثناء التهيئة. لبدء التصوير ، وتهيئة نظام IVIS (نقرة واحدة) ، وتعيين المعلمات التصوير للتجربة. حدد مجال الرؤية بالنسبة لعدد الحيوانات التي يجري تصويرها. يمكن الحفاظ على ما يصل الى 5 في الحيوانات باستخدام أداة متعددة لا يتجزأ مخدر. المرحلة هو في 37 درجة مئوية ثابتة للحفاظ على درجة حرارة الجسم في الحيوانات. يتم توفير منفذ EKG لمراقبة صحة الحيوان خلال إجراءات مرهقة. يمكن العيش في برامج الصور ، وقت التعرض ، و توقف بكسل ويكون الأمثل binning استنادا إلى مستوى التعبير عن خط الخلية. ويمكن تغيير هذه الإعدادات في أي وقت خلال تجربة دون التأثير على نتيجة الكمية. IVIS يكتسب صورة فوتوغرافية للحيوان تحت الضوء الأبيض وإشارة أو الكمية bioluminescent فلوري ، وهو مضافين على الصورة. وأعرب عن إشارة bioluminescent الفوتونات في الثانية الواحدة وعرضها باعتبارها خريطة كثافة. يتم ضبط عرض الصور لتوفير النقيض الأمثل والقرار في الصورة دون التأثير على الكميات. ويمكن قياس التلألؤ من الخلايا في موقع الحقن باستخدام أداة المنطقة من الفائدة. يتم عرض بيانات القياس في الجدول جنبا إلى جنب مع كافة المعلمات التجريبية المتصلة التقاط الصور التي يمكن حفظها أو تصديرها للتحليل يمكن الحصول على صور متعددة ، ومقارنة في الدراسات الطولية التي تغطي ثانية أو شهور تبعا لطبيعة التجربة. سوف نقوم بقياس تدفق الفوتون من الورم عند مستوى الصفر مرة ومراقبة لمدة 4 أسابيع مع التصوير في فترات كل أسبوعين. تدفق الفوتون من الورم يتناسب مع عدد من الخلايا الحية لذلك معربا عن luciferase تلألؤ بيولوجي يرتبط مباشرة مع حجم الورم. في آخر أيام 5 زرع الورم ليس واضح حتى الآن ولكن يمكن أن يكون كميا الخلايا من خلال تلألؤ بيولوجي ويعتبر الورم أن بنشاط متزايد. في هذه المرحلة هو إشارة تلألؤ بيولوجي stronge بكثيرر. ويمكن تعديل وقت التعرض ، و توقف وbinning بكسل بحيث تكون الصورة واضحة والكاميرا لا تشبع لا. IVIS يعوض تلقائيا عن التغييرات في جمع ضوء ذلك يمكن مقارنة هذه القياسات لتلك التي جمعت في وقت سابق وبعد ذلك في التجربة. 7 أيام في الأورام وزرع آخر واضح للمرة الأولى وتلألؤ بيولوجي القياس قد ولدت بالفعل 7 أيام من البيانات. غرس في 28 يوما آخر ، والأورام أصبحت نخرية وتبدأ الخلايا في الموت. يقدر حجم الورم عن طريق قياس الفرجار لا يغير بشكل ملحوظ ، ولكن التألق من الورم سينخفض ​​مشيرا موت الخلية. لا يمكن أن تستمر القياسات الفرجار وقياس تلألؤ بيولوجي حتى يتم التوصل إلى نقطة النهاية إنسانية. وسترد نخر الورم بسبب نقص الأكسجين أو الأنظمة العلاج تلألؤ بيولوجي خفضت حتى لو كانت لا تقلل من كتلة الورم.

وأود أن أؤكد أنه تم إجراء جميع التجارب أجريت لإنتاج مجلة المادة التجارب متصور في الامتثال للبروتوكول الحيوانية التي وافق عليها 060 رعاية الحيوان واستخدام اللجنة المؤسسية (IACUC) في علوم الحياة الفرجار ، ألاميدا CA كيم جاي ، فتاه دال ، IACUC الرئيس ، الفرجار العلوم الحياتية.

في التصوير bioluminescent المجراة من أورام الثدي باستخدام ivis الطيف

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

ويمكن زرع الخلايا السرطانية الثديية 4T1 الماوس الفرعي cutaneously في نيو / نو الفئران لتشكيل الأورام واضح في 15 إلى 20 يوما. هذا النموذج هو نظام الورم طعم أجنبي قيمة لمرحلة ما قبل السريرية المجراة في تقييم المركبات انتيتومور المفترضة. وقد تم تصميم خط خلية 4T1 للتعبير عن constitutively الجين luciferase يراعة (luc2). عندما يتم حقن فئران تحمل 4T1 - luc2 الأورام مع Luciferin الأورام تبعث إشارة ضوئية البصرية التي يمكن رصدها باستخدام نظام التصوير الضوئي حساسة مثل الطيف IVIS. تدفق الفوتون من الورم يتناسب مع عدد الخلايا التي ينبعث منها ضوء ، ويمكن قياس الإشارات لمراقبة نمو الورم والتنمية. يتم معايرة IVIS لتمكين لا يمكن أن يؤديها الكميات المطلقة للإشارة bioluminescent والدراسات الطولية على مدى عدة أشهر وعلى مدى عدة أوامر من ضخامة إشارة دون المساس نتيجة الكمية. ويمكن رصد نمو الورم لعدة أيام قبل بواسطة تلألؤ بيولوجي يصبح حجم الورم واضح أو قياسها بواسطة الوسائل المادية التقليدية. يمكن لهذا الرصد السريع توفر نظرة متعمقة في الأحداث في وقت مبكر من تطوير ورم أو تؤدي إلى إجراءات أقصر التجريبية. يشار إلى موت الخلايا السرطانية ونخر بسبب نقص الأكسجين للعلاج أو دواء في وقت مبكر عن طريق تخفيض في إشارة bioluminescent. قد لا يكون هذا موت الخلايا يصاحبه انخفاض في حجم الورم مقاسا الوسائل المادية. القدرة على رؤية الأحداث في وقت مبكر من نخر الورم له تأثير كبير على اختيار وتطوير العوامل العلاجية. التصوير الكمي لنمو الورم باستخدام IVIS يوفر الكميات الدقيقة ويسرع عملية تجريبية لتوليد النتائج.

يتم زرع الخلايا السرطانية الثديية معربا عن luciferase تحت الجلد في الفئران وتصور باستخدام التصوير الضوئي لمراقبة نمو الورم والتنمية غير جراحية في دراسة طولية.

في التصوير Bioluminescent المجراة من أورام الثدي باستخدام IVIS الطيف

يمكن زرع خلايا ورم الثدي الفأرية 4T1 تحت الجلد في فئران nu/nu لتكوين أورام ملموسة في غضون 15 إلى 20 يوماً. إن نظام نموذج الورم الطعمي الغريب هذا...

<a class="grey_button" href="/video/1360">
الصينية
</a>

in-vivo-bioluminescent-imaging-of-mammary-tumors-using-ivis-spectrum

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يمكن تأسيس Luciferase معدلة وورم الدماغ البشري xenografts intracranially athymic في الفئران ، مع رصد لاحقة من نمو الورم والاستجابة للعلاج باستخدام التصوير تلألؤ بيولوجي. بالاشتراك مع بقاء التحليل والرصد تلألؤ بيولوجي هي أداة أساسية للبحوث ما قبل السريرية اختبار العلاجات التي يجري النظر فيها لعلاج أورام المخ.

إنشاء Xenografts استئصال ورم من الدماغ داخل الجمجمة والتحليل اللاحق للنمو الورم والاستجابة للعلاج باستخدام التصوير ضوء بارد

أنشئ الفأر نموذج تجريبي من الانبثاث العظام بعد الولادة داخل القلب للتعبير عن luciferase الخلايا السرطانية الثديية. تم رصد تطور الورم ، ونتج عن آفة عظمية طوليا مع تلألؤ بيولوجي والصغرى التصوير المقطعي.

رصد الانبثاث ورم والآفات الحالة للعظم مع ضوء بارد ، والتصوير المقطعي مايكرو

يتم تطبيق تلألؤ بيولوجي التصوير من نقص الأكسجة النشاط عامل محرض 1α لرصد نقص الأكسجة الورم داخل القحف التنمية في الدماغ سرطان الثدي نموذج الفأر الانبثاث.

في ضوء بارد التصوير حيوية الجسم الحي من نقص الأكسجة ورم من الدماغ الانبثاث سرطان الثدي في نموذج الفأر

نحن هنا وصف الطرق لبناء والتخيل وقياس ردود الفعل bioluminescent كل من اليراع والإنزيمات وسيفيراز renilla أعرب في خلايا سرطان الثدي النقيلي خلال نموها...

في الجسم الحي التصوير المزدوج الركيزة Bioluminescent

زرع خلايا داخل الجمجمة من GL261 في C57BL / 6 الفئران تنتج الاورام الدبقية الخبيثة التي تلخص الكثير من السمات المميزة للورم أرومي دبقي الأشكال البشرية. استخدمنا التعبير عن الخلايا GL261 ستابلي luciferase للسماح لنا...

زرع داخل القحف مع 3d اللاحقة في فيفو Bioluminescent التصوير الاورام الدبقية الفئران

البكتيرية التصوير Bioluminescent<em&gt; في الجسم الحي</em

مصدر:مارينا أرانتيس راديتشي1 ، فيكتور كارلوس ميلو1 ،فيكتوريا باز ماتشادو1, مارسيا كريستينا أوليفيرا دا روشا1, جاكلين فاز دي أوليفيرا1, لوانا كريستينا كامارغو1,2, لويس ألكسندر مولمان1, ريكاردو بينتيس أزيفيدو1, سونيا ناير باو1, جواو باولو فيغيرو لونغو11معهد العلوم البيولوجية ، جامعة برازيليا ، 2قسم العمليات النفسية الأساسية ، معهد علم النفس ، جامعة برازيليايوضح هذا الفيديو إجراء تتبع تطور الورم في الجسم الحي عن طريق حقن خلايا سرطان الثدي الغدي المعبرة عن اللوسيفيراز في أنثى الفأر ومراقبة إشارات...

التصوير المضيء بيولوجيا لتطور ورم الثدي في نموذج أنثى الفأر

الجمع بين التصوير الضوئي وμCT في نموذج الفأر العدوى زرع العظام، وذلك باستخدام إضاءة الحيوية سلالة هندسيا من المكورات العنقودية الذهبية، شريطة القدرة على noninvasively طوليا ومراقبة ديناميات عدوى بكتيرية، فضلا عن الاستجابة الالتهابية المقابلة والتغيرات التشريحية في العظام.

جنبا إلى جنب<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; بصري وμCT التصوير لرصد العدوى، التهاب، وتشريح العظام في العدوى زراعة العظام في الفئران

هنا ، نصف طريقة مراقبة غير جراحية تتضمن تعبير لوسيفيراز وبروتين الفلورسنت الأخضر في خطوط خلايا سرطان الثدي المختلفة. يوفر هذا البروتوكول تقنية لمراقبة تكوين الورم والاستعمار النقيلي في الوقت الفعلي في الفئران.

مراقبة نمو سرطان الثدي وتكوين مستعمرة النقيلي في الفئران باستخدام التلألؤ الحيوي

تصف المخطوطة منهجية لإنشاء ومراقبة النمو الطولي للورم الخبيث الرئوي التلقائي من أورام الثدي المحقونة تقويم العظام ، والتي يمكن التدخل في جميع مراحل الشلال النقيلي.

في الجسم الحي تصوير لقياس ورم خبيث في الرئة التلقائي لخلايا ورم الثدي المحقونة تقويم العظام

يتضمن التحدي الرئيسي لتطوير علاجات جديدة لسرطان الرئة نمذجة البيئة المكروية للورم مع تقدم المرض الإقليمي إلى مرض نقيلي. هنا ، نصف طريقة بسيطة لإنشاء نموذج متجانسي تقويمي لسرطان الرئة يسمح بتتبع المرض في الجسم الحي بمرور الوقت.

طريقة طفيفة التوغل لتوليد نموذج فأر تقويمي متزاوي لسرطان الرئة

تعلم تصوير الأورام السرطانية باستخدام التألق الحيوي في الفئران. يتيح هذا البروتوكول غير الجارح مراقبة نمو الورم في الوقت الفعلي وتقييم فعالية العلاجات المختلفة بدقة عالية.

في التصوير Bioluminescent المجراة من أورام الثدي باستخدام IVIS الطيف

استكشف المزيد من الفيديوهات