الزرع الموجه بالموجات فوق الصوتية: تقنية لزرع خلايا السرطان الغدي القنوي في البنكرياس في فأر بالغ

- توفر الموجات فوق الصوتية صورا عالية الدقة تساعد على زرع الخلايا السرطانية في موقع أنسجة معين مع الحد الأدنى من الالتهاب أثناء حقن الخلايا السرطانية. في المقام الأول ، نستخدم نماذج تقويم العظام لتطعيم الخلايا السرطانية في عضو ذي صلة من أصل الورم. يحاكي العضو البيئة المكروية الأصلية للورم ويسهل ورم خبيث.

ابدأ بتعليق الخلايا السرطانية في PBS البارد للحفاظ على درجة الحموضة ووضع الأنبوب على الجليد. بعد ذلك ، ضع فأر التخدير على مرحلة الموجات فوق الصوتية وقم بتأمين الأطراف بشريط المختبر. ضع الكمية المطلوبة من جل الموجات فوق الصوتية على البطن المحلوق واضبط موضع مسبار الموجات فوق الصوتية حتى يصبح البنكرياس مرئيا بوضوح. قم بتحميل المحقنة بتعليق الخلايا السرطانية وحقن الخلايا بعناية في البنكرياس.

تظهر فقاعة سائلة في صورة الموجات فوق الصوتية ، مما يؤكد نجاح الزرع. انتظر لمدة 5 ثوان لمنع ارتجاع الخلايا وإزالة الإبرة برفق. أعد إلى قفص نظيف وراقبه حتى يتعافى من التخدير. في غضون أسابيع قليلة من الحقن، تنقسم الخلايا السرطانية المحقونة في البنكرياس بسرعة وتشكل ورما. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء عملية زرع موجهة بالموجات فوق الصوتية لخلايا سرطان البنكرياس الغدي القنوي المشتق من مورين في البنكرياس في نموذج تقويم العظام.

- قبل البدء في الإجراء ، قم بتعليق خط خلايا سرطان البنكرياس الغدي القنوي محل الاهتمام بحجم مناسب من PBS البارد المعقم على الجليد. ضع الأقفاص على لوح تسخين 37 درجة مئوية ونظف خزانة السلامة البيولوجية وغرفة الحث ومرحلة الموجات فوق الصوتية جيدا باستخدام معقم مناسب. اضبط وظيفة الاحترار لمرحلة الموجات فوق الصوتية على 37 درجة مئوية وبعد تحريض التخدير ، ضع مرهما على عيون الأول.

ضع الفأر في الاستلقاء الظهري على مرحلة الموجات فوق الصوتية وقم بتأمين الأطراف العلوية والسفلية برفق على المسرح بالشريط. استخدمي قضيبا معقما بطرف قطني لوضع طبقة غنية من كريم إزالة الشعر على الربع العلوي الأيسر من البطن فوق منطقة الطحال إلى خط الوسط. بعد 1 دقيقة ، استخدمي وسادة شاش جافة لإزالة الشعر برفق قبل إزالة كريم إزالة الشعر الزائد بالشاش الرطب الملحي. ثم ضع الماوس في أحد الأقفاص النظيفة الجديدة على المدفأة.

لزرع الخلايا السرطانية الموجهة بالموجات فوق الصوتية ، اضبط منصة الموجات فوق الصوتية بحيث يكون السطح موازيا للأرض والوقوف على الجانب الأيسر من بحيث يكون رأس الفأر متجها إلى اليمين. اضبط موضع محول الطاقة بحيث يتم الحصول على صورة مستعرضة للبطن وقم بتأمين أطراف الفأر على المنصة بشريط. اخفض محول الطاقة برفق للاتصال ببطن الماوس واضبط محول الطاقة حتى يصبح البنكرياس مرئيا بوضوح. حدد موقع الكلية والطحال الأيسر لتوفير اتجاه دقيق في تجويف البطن.

عندما يتم تحديد موقع الحقن، قم بتحميل حقنة أنسولين مقاس 29 بوصة نصف بوصة مع 25 ميكرولترا من تعليق الخلية السرطانية وامسح طرف الإبرة بقطعة تحضير معقمة للكحول. استخدم ملقط الحواف غير الحادة للإمساك بجلد الفأر والجدار البريتوني لزيادة التوتر في موقع الحقن. أمسك المحقنة بزاوية 25 إلى 45 درجة تقريبا على سطح منصة الموجات فوق الصوتية ، وقم بدفع الإبرة ببطء عبر الجلد والجدار البريتوني. تأكد من ثقب الإبرة من خلال الجدار البريتوني قبل استخدام التصور بالموجات فوق الصوتية لتوجيه الإبرة مباشرة إلى البنكرياس.

عندما تكون الإبرة في مكانها ، قم بحقن الخلايا السرطانية ببطء. سيكون تكوين بلعة سائلة داخل البنكرياس واضحا في البنكرياس المحقون بشكل صحيح عن طريق الموجات فوق الصوتية. بمجرد حقن الحجم الكامل للتعليق ، ويمكن ملاحظة بلعة سائلة عن طريق الموجات فوق الصوتية ، أمسك المحقنة ثابتة جدا لعدة ثوان قبل سحب الإبرة ببطء من بطن الفأر ، مع الحرص على عدم إزعاج الخلايا المحقونة. بعد ذلك ، ضع الماوس في قفص نظيف جديد على جهاز التدفئة مع المراقبة حتى الشفاء التام.

- يعد وضع الإبرة بشكل صحيح في البنكرياس ، بما في ذلك عمق الإبرة وزاويتها ، خطوة حاسمة في هذا البروتوكول. يساعد تصور بلعة السائل في تأكيد نجاح حقن الورم. التحكم في عمق الحقن هو أصعب جانب. نصيحتي هي التدرب على حقن التريبان الأزرق وتأكيد بلعة السوائل عن طريق كل من الموجات فوق الصوتية والتشريح.