مقايسة تفرع الجليكوجين لقياس درجة تفرع الجليكوجين

تشتمل السكريات المتفرعة ، مثل الجليكوجين ، على بقايا الجلوكوز المرتبطة خطيا عبر روابط ألفا -1،4-جليكوسيدي وفي الفروع عبر روابط ألفا -1،6-جليكوسيدي.

لتحديد درجة التفرع في السكريات ، ابدأ بكاشف لون مائي يحتوي على يوديد البوتاسيوم واليود وكلوريد الكالسيوم. في ظل الظروف المائية ، ينتج يوديد البوتاسيوم واليود أيونات اليوديد.

في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة المنفصلة ، امزج الكاشف مع السكريات ذات الهياكل الفرعية المعروفة وعينة الجليكوجين ذات البنية غير المميزة.

تتبنى السكريات هياكل حلزونية عبر روابطها الجليكوسيدية alpha-1،4. ترتبط أيونات اليوديد بهذا اللب الحلزوني ، وتشكل سلاسل عديد يوديد خطية. ينتج عن هذا تكوين مركب نقل الشحنة بين السكريات وسلاسل البولي يوديد ، مما ينتج عنه مجمعات متعددة السكاريد واليوديد الملونة.

تطور السكريات غير المتفرعة ذات سلاسل البولي يوديد الأطول لونا أزرق ، في حين أن السكريات المتفرعة ذات سلاسل البولي يوديد الأقصر تطور مجمعات صفراء إلى برتقالية بنية. كلوريد الكالسيوم في الكاشف يكثف اللون المعقد.

انقل الخليط إلى كوفيت يمكن التخلص منه. باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، قم بقياس طيف الامتصاص من 330 إلى 800 نانومتر.

تمتص المجمعات غير المتفرعة ذات اللون الأزرق الضوء بأطوال موجية أطول ، مما يدل على تحول إلى اليمين في الحد الأقصى للامتصاص. في المقابل ، تمتص المجمعات المتفرعة الضوء بأطوال موجية أقصر ، مع التحول إلى اليسار في الحد الأقصى للامتصاص يشير إلى تفرع أعلى في الهيكل.

يؤكد الحد الأقصى للامتصاص لعينة الجليكوجين غير المميزة عند حوالي 450 نانومتر هيكلها المتفرع.

لتحديد تفرع الجليكوجين ، امزج 650 ميكرولترا من مخزون كاشف لون اليود / كلوريد الكالسيوم مع 100 ميكرولتر من الماء في أنبوب سعة 1.5 ملليلتر ، واخلط المحلول جيدا قبل نقله إلى كوفيت ميثاكريليت يمكن التخلص منه. ضع الكوفيت في مقياس الطيف الضوئي لإجراء تشغيل في وضع مسح الطول الموجي لجمع طيف الخلفية من 330 إلى 800 نانومتر.

في أنبوب منفصل سعة 1.5 مليلتر ، امزج 650 ميكرولترا من كاشف لون اليود / كلوريد الكالسيوم العامل مع 50 ميكروغراما من جليكوجين المحار ، وقم بتكوين الحجم النهائي إلى 750 ميكرولتر بالماء. بعد مزج الخليط جيدا ، انقل المحلول إلى كوفيت ميثاكريليت يمكن التخلص منه لجمع طيف امتصاص من 330 إلى 800 نانومتر.

وبالمثل ، احصل على طيف امتصاص يحتوي على 50 ميكروغراما من الأميلوبكتين و 30 ميكروغراما من الأميلوز كما هو موضح سابقا.

للحصول على مؤشر على الهيكل المتفرع لعينة الجليكوجين غير المميزة ، اجمع بين 25 إلى 50 ميكروغراما من الجليكوجين مع 650 ميكرولترا من كاشف لون اليود / كلوريد الكالسيوم العامل ، واستمر كما هو موضح سابقا للحصول على طيف الامتصاص.