إحداث إصابات الدماغ الرضحية المخترقة في ذبابة الفاكهة البالغة

خذ ذبابة الفاكهة البالغة الناشئة حديثا المعدلة وراثيا.

تحتوي أجسام الفطر في دماغ الذبابة على خلايا عصبية تعبر عن بروتينات الفلورسنت الخضراء.

أجسام الفطر عبارة عن هياكل تحتوي على شبكات عصبية معقدة ضرورية للتعلم والذاكرة.

تخدير الذباب على وسادة ثاني أكسيد الكربون.

تحت مجهر استريو مجهز بالمرشحات المطلوبة ، تخيل أجسام الفطر التي تعبر عن التألق الأخضر.

خذ دبوس Minutien معقم وادفعه عبر كبسولة الرأس إلى جسم الفطر.

هذا يسبب تلفا للخلايا العصبية في جسم الفطر ويعطل الشبكات العصبية ، مما يؤدي إلى اختراق إصابة الدماغ الرضحية.

بعد ذلك ، قم بإزالة الدبوس برفق من الذبابة.

ضع الذباب المصاب في قارورة بها طعام واتركه يتعافى لمزيد من الدراسات.

بعد تخدير الذباب على وسادة ثاني أكسيد الكربون ، قم بفرز الذباب الذكور الصغار F1 المغلق حديثا في غضون ست ساعات من الانغلاق ، ووضعه في قوارير نظيفة تحتوي على طعام يحتوي على 40 ذبابا أو أقل لكل قارورة. بعد ذلك ، قم بتعقيم دبابيس الدقيقة عن طريق وضع ما يقرب من 100 دبوس في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر مملوء بنسبة 70٪ من الإيثانول لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، قم بتعقيم وسادة ثاني أكسيد الكربون في فرشاة الرسم عن طريق رش 70٪ من الإيثانول ومسحها حتى تجف بمنديل نظيف وخالي من النسالة.

بمجرد أن تصبح الأدوات نظيفة وجافة ، انقل 40 أو أقل من ذكر F1 الذين تم فرزهم إلى الوسادة النظيفة وفصلهم إلى مجموعتين. ستعمل مجموعة واحدة كمجموعة تحكم في الذباب غير المصاب ، وستتعرض المجموعة التجريبية الثانية لإصابات الدماغ الرضحية المخترقة. بعد ذلك ، باستخدام الملقط ، اسحب أربعة إلى خمسة دبابيس دقيقة جديدة من أنبوب الطرد المركزي الدقيق ، وضعها بالقرب من حافة وسادة ثاني أكسيد الكربون. ثم ، تحت نطاق التشريح ، اختر دبوسا دقيقا مستقيما بنقطة حادة. أعد استخدام المسامير الحادة وضع المسامير التالفة أو الحادة في أنبوب منفصل يحتوي على 70٪ من الإيثانول للتخلص الآمن.

بعد ذلك ، بالنسبة للذباب مع النمط الجيني المتقاطع القياسي ، قم بتشغيل مصباح LED المجهر المجسم المجهز بمرشحات الإثارة والانبعاث المناسبة لبروتين الفلورسنت الأخضر ، والذي يسمح بالإثارة من 440 إلى 460 نانومتر ويسمح بالتصور من 500 إلى 560 نانومتر. بعد ذلك ، اختر ذبابة من المجموعة التجريبية ، ووضع الذبابة بحيث يكون للمجرب رؤية ظهرية لكبسولة الرأس مع رأس الذبابة إلى اليمين. باستخدام الملقط ، التقط دبوس minutien المحدد في يد واحدة ، وفرشاة الرسم في اليد الأخرى. ثم ضع الفرشاة على الجزء الداخلي من الصدر الظهري ، وادفعها برفق لتثبيت الذبابة.

صوب طرف الدبوس الدقيقة في أجسام الفطر ، وأجسام الخلايا على الجانب الأيمن من الرأس ، واخترق كبسولة الرأس. في حالة استخدام المعالم ، استهدف بشرة الرأس الظهرية بين العقي والحافة الظهرية للعين. بعد الانتهاء من الإصابة ، استخدم فرشاة الرسم لدفع الرأس برفق بعيدا عن دبوس الدقيقة. إذا كنت تستخدم الدماغ لتسلسل الحمض النووي الريبي أو qRT-PCR ، فقم بإصابة ثانية في الجانب الأيسر من الرأس. بمجرد إصابة جميع الذباب التجريبي ، ضع الذباب الضابط والمصابين في قوارير منفصلة تحمل علامة تحتوي على طعام.