تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio

الهدف العام من هذا الإجراء هو إزالة القلب من أسماك الحمار الوحشي. يتم تحقيق ذلك عن طريق جمع أسماك الحمار الوحشي وإصلاحها أولا. بعد ذلك ، يتم فتح تجويف الجسم لتصور القلب.

ثم تتم إزالة القلب وتنظيفه من الأنسجة غير القلبية. أخيرا ، يتم تصوير القلب. في النهاية ، يمكن رؤية مورفولوجيا القلب بمرور الوقت من خلال الفحص المجهري والتقسيم والتصوير الفوتوغرافي.

العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية كمفتاحللتشريح. يصعب تعلم أسماك الزرد لأن أسماك الزرد صغيرة والأنسجة ليست مميزة في اللون ويمكن أن يكون من الصعب التعرف عليها لتوليد أسماك الحمار الوحشي من اليرقات خلال مراحل البلوغ. لهذه التجارب ، قم بإجراء تزاوج فردي للكمثرى أو المجموعة مع الأسماك البالغة.

نظف الأجنة وخزنها في حاضنة 28 درجة مئوية. بعد خمسة أيام من الإخصاب ، قم بفصل الأسماك إلى أحواض بكثافة سمكية تتراوح من 10 إلى 15 سمكية وضعها في منشأة الأسماك. أخرج السمكة من حوضها في العمر المناسب وضعها في 0.2٪ Trica للتخدير.

ضع السمك المخدر في الماء المثلج لمدة 15 دقيقة للقتل الرحيم. في هذه الأثناء ، أضف 4٪ من الفورمالديهايد أو PFA في XPBS واحد إلى الطبق. احتضان الأسماك المجمعة في 4٪ PFA لمدة ساعة إلى ساعتين في درجة حرارة الغرفة ، ثم بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية في طبق بتري ملفوف في perfil.

هذا يحافظ على سمك مسطح ويجعل التشريح أسهل بكثير بعد التثبيت. اشطف مرتين في PBS مع 0.1٪ يمكن حفظ أسماك Tween أو PBT في PBT عند أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى 10 أيام. ضع سمكة واحدة في طبق بتري ، نصفها مليء ب PBS الطازج وضعها على جانبها الأيمن.

قم بقياس طول السمكة من الخطم إلى قاعدة الذيل ، ولا يشمل زعانف الذيل باستخدام الفرجار المليمتري الرقمي. هذا هو الطول القياسي أو SL. قم بتعيين مجموعة من أحرف الأرقام لكل سمكة للسماح بتتبع سمكة فردية والقلب المفصل الناتج لتحليلها لاحقا.

أدخل جميع البيانات، بما في ذلك جميع القياسات في جدول بيانات ونظمها استنادا إلى هذه التصنيفات قبل التشريح. قم بتسمية شرائط أنبوب PCR برقم تتبع مخصص واملأ الأنابيب ب PVT أو أي حل آخر مناسب لمزيد من التحليل. قم بتوجيه الموقع البطني للأسماك في طبق بتري مع تثبيت الجسم بالملقط ، مع إمساك الرأس بين العينين والخياشيم للأسماك التي يقل طولها عن 12 ملم في الطول القياسي.

باستخدام ملقط حاد أو إبرة دقيقة في حامل الدبوس. قم بإزالة العضلات الصدرية والزعانف من الجسم للكشف عن القلب. يمكن أن تتسبب الحركة المستمرة للملقط أثناء التشريح في حدوث تيارات في PPT تحرك السمكة.

هذا يمثل مشكلة خاصة بالنسبة للأسماك الصغيرة. وبالتالي ، يجب استخدام إبرة دقيقة لإزالة العضلات الصدرية والزعانف وفتح تجويف الجسم. استخدم الملقط لإخراج القلب برفق من التجويف من تحت الأذين.

إذا كانت السمكة تحتوي على علامة قلبية فلورية ، فاستخدم منظار الفلورسنت للتشريح وتحقق من إزالة القلب عن طريق الفلورة. بمجرد إزالة القلب من التجويف، استخدم الملقط لتثبيت القلب وإبرة دقيقة لإزالة الأنسجة غير القلبية الزائدة وبطانة النخابية من خارج القلب. للأسماك التي يزيد طولها عن 12 ملم في الطول القياسي.

باستخدام مقص صغير ذو مقبض زنبركي ، قم بعمل ثلاثة شقوق. أولا ، قم بعمل قطع عرضي من خلال الخياشيم. ثانيا ، قم بعمل قطع عرضي آخر في البطن الأمامي.

وثالثا ، قم بعمل قطع سهمي على الجانب البطني يربط كلا القطعتين المستعرضتين. باستخدام ملقط حاد ، قم بإزالة عضلات الصدر والزعانف من الجسم لفتح تجويف الجسم والكشف عن الأنسجة الفضية للتأمور. قم بإزالة هذا النسيج التامور وسيصبح القلب مرئيا.

استخدم المقص الدقيق لقطع الشريان المتصل بداء الشرايين البصلي الموجود فوق القلب. بمجرد قطع هذا الشريان ، ضع أطراف الملقط أسفل الأذين واستخدم الملقط لإخراج القلب من التجويف. إذا كان هناك نسيج إضافي يأتي مع القلب ، فلا بأس بذلك حيث يمكن إزالته لاحقا.

بدلا من ذلك ، في بعض الأسماك ، من الممكن إزالة القلب عن طريق سحب البصيلة برفق للخارج وسيتبعها باقي القلب. كن حذرا من موقع الأذين في حالة استخدام التقنية البديلة حيث يمكن أن تتلف بسهولة. إذا كان هناك نسيج إضافي يأتي مع القلب ، فلا بأس بذلك ويمكن إزالته بعد ذلك.

بمجرد إزالة القلب من التجويف، استخدم الملقطين لتثبيت القلب وإزالة الأنسجة الزائدة أو زوج واحد من الملقط لتثبيت القلب وإبرة دقيقة لإزالة الأنسجة الإضافية غير القلبية. لتصوير قلب أسماك الزرد ، قم بإعداد طبق بتري أجار مغذي 23 جراما لكل لتر وقم بتغطية الأجار المتصلب ببرنامج تلفزيوني. استخدم الملقط لعمل بئر في الأجار يسمح للقلب بالتناسب مع الاتجاه الصحيح.

قم بإزالة القلب من أنبوب PCR عن طريق الإمساك بطرف البصلة. بالملقط بحزم. ضع القلب في طبق الأجار.

توجيه القلب في الأجار للتصوير. يمكن تدوير العينة بعد كل صورة إلى جميع الاتجاهات الممكنة. استخدم أوقات التعريض العلوي والضوء والقصير لتصوير القلوب.

قم بإجراء تعديلات على جودة الإضاءة باستخدام التعريض الضوئي حسب الضرورة للحصول على أفضل صورة فوتوغرافية. يظهر هنا مثال على قلب نظيف تشريح جيدا. سيكون لكل قلب بعض الاختلافات في التشكل العام ، ولكن يجب أن يكون القلب كاملا يحتوي على أذين بطيني سليم وشرايين منتفخة بعد تطوره.

مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال التطور القلبي لأسماك الزرد لاستكشاف نضوج القلب في مراحل مختلفة من تطور أسماك الزرد.