استخدام نموذج حيواني للتسمم لتقييم العلاجات العشبية رواية

تعفن الدم يشير إلى متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية الناجمة عن العدوى الميكروبية، ويمكن محاكاة عن طريق تقنية جراحية تسمى ربط الأعور وثقب (CLP). نحن هنا وصفا لطريقة استخدام CLP-الناجم عن نموذج حيواني لفحص الأعشاب الطبية عن وكلاء العلاجية.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنتاج نموذج فأر للتعفن عن طريق إجراء جراحي يسمى SQL Ligation and Puncure ، أو CLP. يتم تحقيق ذلك عن طريق عمل شق خط الوسط من 1.5 إلى سنتيمترين على بطن الفأر. بعد ذلك ، يتم الكشف عن السيكوم وربطه ، ثم يتم ثقب المصل للحث على انتقال البكتيريا.

أخيرا ، يتم إغلاق الشق. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر زيادات في مستويات السيتوكين الجهازية والبريتونية بالإضافة إلى أعراض مثل الخمول والفتاك. ما سأعرضه لك هو إنتاج نموذج تعفن الدم للفأر يسمى sation and precure ، والذي تم تعديله من النموذج الأصلي الذي طوره الدكتور شاندري ومعاونيه.

الميزة الرئيسية المتوسطة لهذا النموذج هي أنه النموذج الأكثر صلة بالإنتان. بالإضافة إلى ذلك ، فهي بسيطة وذات طابع جيد ومجدية اقتصاديا ، وبالتالي تم استخدامها على نطاق واسع في مجال أبحاث الإنتان والالتهابات. على سبيل المثال ، سنوضح استخدام هذا النموذج لتقييم الإمكانات العلاجية للمستخلص العشبي في الإنتان.

لتحضير المستخلص العشبي ، انقع 10 جرامات من الأعشاب في 200 مل من الماء عند 85 درجة مئوية لمدة ساعة إلى أربع ساعات لإزالة الجزيئات غير القابلة للذوبان ، وقم بالطرد المركزي لجزء الماء عند 3 ، 300 جم لمدة 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، قم بتصفية المادة الطافية من خلال مرشح 0.2 ميكرون. ثم قم بتركيز المرشح بشكل أكبر باستخدام مرشح طرد مركزي مع قطع الوزن الجزيئي 10،000 كيلودالتون والدوران عند 5،000 جم لمدة 60 دقيقة عند أربع درجات مئوية.

باستخدام مزارع البلاعم ، فحصت كسور الوزن الجزيئي المنخفضة والعالية لتثبيط أنشطة الوسطاء المؤيدين للالتهابات المتأخرة ، مثل مربع مجموعة الحركة العالية الأول أو HGB واحد. لبدء عزل البلاعم أولا ، تم إعطاء بين الصفاق ملليلترين من مرق جلايكول 4٪ TH في الفئران العادية بعد ثلاثة أيام من حصاد ثقافة البلاعم البريتونية الأولية ، واستكمل الضامة في DMEM بنسبة 10٪ FBS ، واثنين من الجلوتامين المليمولي ، و 1٪ البنسلين. يغسل الستربتومايسين البلاعم الملتصقة برفق مع الأمثل ويحتضنها في نفس الوسط لمدة ساعتين.

ثم تحفيزهم باستخدام عديد السكاريد الدهني البكتيري أو LPS بعد 16 ساعة من التحفيز. اجمع الوسط المكيف للخلية واستخدمه لإجراء النشاف الغربي. لقياس مستويات HM GB واحد.

حدد كثافة الشريط باستخدام منحنى قياسي تم إنشاؤه باستخدام H mgb المنقى لتأسيس الإنتان بعد تخدير الفأر بحقن عضلي يبلغ 75 ملليغرام لكل كيلوغرام من الكيتامين و 20 ملليغرام لكل كيلوغرام من الزيلازين. واستخدام قرصة إصبع القدم للتحقق من مستوى التخدير. ضع الفأر في وضع ضعيف ، ونظف البطن ، ثم قم بعمل شق خط الوسط 15 ملم لفضح الأعور على بعد حوالي خمسة ملليمترات من طرف التكملة بخياطة حريرية رباعية أوه.

اربط الأعور ، ثم باستخدام ثقب إبرة قياس 22 ، قم بثقب جذع التكملة المربوطة مرة واحدة للسماح ببثق البراز ، وأعد الأعور على الفور إلى وضعه الطبيعي داخل البطن وأغلق البطن. بعد أن تستعيد وعيها وحركتها. أعد القفص إلى غرفة في 24 ساعة.

بعد CLP داخل الصفاق ، قم بإدارة 200 ميكرولتر من المستخلص العشبي أو التحكم يوميا لمدة ثلاثة أيام. راقب للبقاء على قيد الحياة طالما دعت الحاجة في غضون ساعات قليلة من الربط والثقب ، أو جراحة CLP. تظهر على علامات سريرية للتعفن الدماغي تشمل الانتصاب والخمول والتجمع وانخفاض تناول الطعام والماء.

ما تموت المصابة بالتهاب الصفاق الحاد مع العدوى الجهازية المتتالية في غضون 48 إلى 96 ساعة. ومع ذلك ، حتى المتطابقة مع العمر والجنس والخلفية الوراثية يمكن أن تستجيب للجراحة بطريقة مميزة في سياق الإنتان التجريبي ، على سبيل المثال ، في 48 ساعة بعد CLP. في حين أن بعض ربما تكون قد اقتربت من حالة التل كما هو محدد هنا ، فقد يظل البعض الآخر في حالة غير محتضرة.

كشفت المسوحات الشاملة للسيتوكينات المنتشرة عن اختلافات كبيرة في مستويات العديد من السيتوكينات ، بما في ذلك IL six و kc و MIP two و ST nfr ، واحد بين الفئران في الحالات المحتضرة وغير المحتضرة. والجدير بالذكر أن هؤلاء الوسطاء الالتهابيين قد تم تصنيفهم على أنهم علامات بديلة للتعفن لأن مستوياتهم المنتشرة هي تنبؤات موثوقة للنتائج المميتة في الإنتان التجريبي أو السريري. بالإضافة إلى ذلك ، تسبب CLP في إطلاق موضعي للعديد من السيتوكينات والكيموكينات المؤيدة والمضادة للالتهابات ، على سبيل المثال ، في 48 ساعة بعد CLP ، لا يزال من الممكن قياس كميات كبيرة من السيتوكين IL six والكيموكينات KC و MI P two ليس فقط جهازيا في الدم ، ولكن أيضا محليا في سائل الغسيل البريتوني.

هنا ، تم تقييم قدرات المستخلصات العشبية المختلفة أو مركبات التحكم لقدرتها على تثبيط السموم الداخلية التي يسببها HGB إطلاق واحد. تم اختبار تلك التي لديها القدرة على تثبيط HGB إطلاق واحد في الجسم الحي باستخدام نموذج فأر من الإنتان. بسبب الحركية المتأخرة والمطولة لتراكم HGB واحد في الإنتان التجريبي ، تم إعطاء الجرعة الأولى من مثبطات HGB واحدة بعد 24 ساعة من ظهور الإنتان ، وهي نقطة زمنية ظهرت فيها الفئران علامات واضحة على تعفن الدم ، بما في ذلك الخمول والإسهال والانتصاب ، كما هو موضح هنا ، تأخر وتكرار الإعطاء لمكون T أخضر رئيسي epi Gallo ، كاتشين ثلاثة GALLATE أو EGCG بدءا من 24 ساعة بعد ظهور الإنتان ، تم إنقاذ الفئران بشكل كبير من الإنتان المميت حتى عند إعطائه عن طريق الفم EGCG لا يزال ينقذ الفئران من تعفن الدم المميت ، مما يزيد بشكل كبير من معدلات بقاء من 16٪ إلى 44٪ بمجرد إتقان هذا الربط ويمكن الانتهاء من نموذج البزل في أقل من خمس دقائق إذا تم إجراؤه بشكل صحيح.