تغذية القراد على لانتقالها وتشخيصها في أبحاث مرض لايم

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام ناقل طبيعي ، قراد الغزلان للانتقال التجريبي وتشخيص xeno لعامل مرض لايم بوريليا بوري. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنتاج القراد الذي يؤوي البكتيريا أولا. بمجرد التلقيح ، يتم وضع القراد على المنطقة المحلوقة للفأر ثم وضعها في قفص متخصص.

ثم يتم استرداد القراد المغذي من ماء القفص. بالنسبة للرئيسيات غير البشرية ، يتم إنشاء جهاز احتواء متخصص وتطبيقه قبل وضع القراد على الجلد. بعد خمسة أيام ، يتم فتح الأجهزة وجمع القراد التغذي.

في النهاية ، يمكن جمع العينات وتحليلها بطرق مختلفة لتأكيد العدوى بعد القراد. يمكن أيضا زراعة أنسجة التغذية وتقسيمها وتلطيخها من أجل التألق المناعي. يعد العرض المرئي لهذه الأساليب أمرا بالغ الأهمية لأن الخطوات المتعددة المتضمنة تختلف تماما بين النماذج الحيوانية المستخدمة.

سأثبت الإجراء أنا ، يجب ارتداء معاطف المختبر الدكتورة بريتون ، والدببة العشب ، وماري جاكوبس وايت بأكمام مرنة وقفازات وقبعات منتفخة يمكن التخلص منها عند العمل مع القراد. للبدء ، استرجع القراد النيمال الذي تم تخزينه عند 23 درجة مئوية لمدة أربعة إلى ستة أسابيع. بعد مكان تساقط اليرقة ، شريط على الوجهين في الجزء السفلي من طبق بتري صغير وقم بتأمين الجانب البطني للقراد لأعلى على الشريط للتلقيح.

تزرع Beberg Dory إلى مرحلة منتصف القفل في وسط BSKH الذي يحتوي على 6٪ من مصل الأرانب ، ويتم تحضير الأنابيب الشعرية الزجاجية باستخدام أنبوب موحد لجزء فم القراد كدليل للتحجيم. عندما تصبح جاهزا ، امزج ثقافة Beberg Doy وأدخل طرف الأنبوب الشعري بمساعدة منظار تشريح ، ضع الأنبوب فوق القبة الفائقة لفم القراد. بعد ذلك ، قم بتثبيت الأنبوب في مكانه باستخدام طين التشكيل.

أدخل طبق بتري مع قراد ثابت داخل حوض بلاستيكي شفاف كبير للحصول على مستوى إضافي من الاحتواء وأضف مناشف ورقية مبللة لتوفير الرطوبة. ضع القراد في حاضنة 37 درجة مئوية حتى يظهر التغوط. يشير هذا إلى أن الوسائط التي تحتوي على اللولبيات قد مرت عبر القراد.

يتم الاحتفاظ بجميع القراد لمدة أسبوعين إلى أربعة أسابيع عند 23 درجة مئوية للتكيف مع بيئتها قبل إطعامها على. بعد إعطاء التخدير ، احلق الفأر من الأذنين إلى منتصف الظهر ، باستخدام أداة تشذيب كهربائية في قلم أبيض مع عدم وجود أشياء أخرى قريبة. استخدم فرشاة رسم مبللة لنقل القراد الملقح إلى المنطقة الخالية من الشعر من الماوس.

بمجرد وضع القراد في مكانه ، انقل إلى قفص متخصص. يتكون هذا القفص من شواية من الفولاذ المقاوم للصدأ مرتفعة من الأسفل. تم تعديل الجزء العلوي من القفص داخليا لرفع حامل زجاجة الماء بما يكفي للسماح بحرية حركة الفأر تحته لاحتجاز أي قراد قد يسقط من الماوس.

يمتلئ قاع القفص بما يكفي من الماء لتغطية السطح ، ولكنه منخفض بما يكفي لمنع الأطراف من الغمر. توضع وسادات التدفئة أسفل القفص حتى يتعافى الماوس تماما. يتم وضع القفص أيضا داخل صينية مبطنة بمعجون وشريط متشابك لمزيد من تدابير الاحتواء.

عندما يتعافى الفأر تماما من التخدير ، يسكب الماء في القفص على عمق حوالي نصف بوصة ، ويتم استبدال الطعام والماء بعد ثلاثة وأربعة وخمسة أيام. افحص قفص الفأر وماء القفص بحثا عن القراد الذي يتم تغذيته. نخل ماء القفص من خلال مقلاة معدنية بيضاء.

اشطف القراد الذي يتم تغذيته بالماء النظيف واحفظه في برطمانات بلاستيكية في اليومين الثالث والرابع. استبدل الماء الموجود في القفص بالماء النظيف. في اليوم الخامس ، لا تحقق من القفص فحسب ، بل تحقق من الفأر جيدا بحثا عن القراد.

عادة في هذه المرحلة ، تتغذى جميع القراد ويمكن إعادة الفئران إلى الأقفاص العادية. ضع جميع النفايات من أقفاص الفئران ، بما في ذلك السوائل في حاويات بيولوجية. للتجميد والتخلص منه ، احتفظ بسجل لعدد القراد الموضوعة على الفئران وتلك التي تم استردادها في جميع الأوقات.

الخطوة الأولى هي تحضير جهاز احتواء القراد. قم بقص دائرة قطرها بوصة وثلاثة أرباع بوصة في رفرف LA مقاس ثلاثة × ثلاث بوصات باستخدام مشرط نظيف ودليل القياس ، واستخدم الفتحة كقالب لقطع الدوائر ذات الحجم المتنفس في رغوة الكائنات الحية و DuoDERM. تستخدم الرغوة لرفع السديلة على سطح الجلد ومنع التكسير المحتمل للقراد.

يضيف الجلد الثنائي طبقة أخرى من التوسيد ويغطي حواف جهاز الاحتواء لمزيد من الأمان من هروب القراد. بعد إعطاء التخدير ، يتم استخدام أداة تشذيب كهربائية لحلاقة جميع المناطق التي ستغطيها السترة. بعد ذلك ، قم بحلق مساحة 25 × 20 سم تقريبا.

ثم نظف وجفف المنطقة. بعد تنظيف الجلد وتجفيفه ، ضع الجلد الثنائي على ظهر أسفل لوح الكتف مباشرة على جانبي العمود الفقري. استخدم علامة لتتبع الدائرة في تلك البقعة.

يستخدم تحضير البشرة لمسح الجلد لإزالة الزيوت. بعد مسح الجلد ، ضع طبقة من غراء الجلد. قم بإزالة الدعامة اللاصقة من رغوة البيوتين وتثبيتها على الجلد في المكان المناسب.

أغلق الحواف بغراء الجلد واكتب شريط fixx. قم بإزالة الدعامة اللاصقة من la flap وثبتها أعلى Biotine ضع غراء الجلد وشريط Hyper Fixx حول الحواف. بعد لصق الغطاء الشبكي ، ضع السترة على.

بعد 24 ساعة ، تحقق من أمان الجهاز وقم بتقويته إذا لزم الأمر. عندما يكون الجهاز آمنا ، استخدم فرشاة الرسم لوضع ما يقرب من 20 علامة غير مغذية على الجلد. بعد نقل القراد ، قم بإزالة الدعامة اللاصقة من شبكة الغطاء وأغلقها في مكانها.

قم بإزالة دعامة الجلد الثنائي وضعها فوق جهاز الاحتواء. أغلق الحواف بشريط Hyper Fixx. أخيرا ، أضف قطعة من شريط Hyper Fixx عبر الدائرة الشبكية المفتوحة واستبدل السترة.

بعد خمسة أيام ، يتم تخدير وإزالة السترة. قم بإزالة الشريط أولا حتى يمكن رؤية تغذية القراد من خلال الشبكة. بعد تقشير الجلد الثنائي بعناية بعيدا عن السديلة ، اسحب الجزء الشبكي للخلف عند الحواف لتوفير الوصول إلى القراد.

غالبا ما توجد القراد المغذى بالقرب من دائرة الرغوة أو تحتها. قم بإزالة القراد بفرشاة الرسم وضعها في ماء نظيف. بمجرد جمع جميع القراد المرئي ، قم بإزالة الجهاز وامسح الجلد بالكحول.

أخيرا ، قم بتخزين القراد عند 23 درجة مئوية لاستخدامه في المستقبل. باستخدام تقنية التغذية الشعرية ، تم العثور على أكثر من 90٪ من القراد التغذوي لإيواء البراهير كما هو موضح هنا من خلال تلطيخ الأجسام المضادة والفحص المجهري الفلوري. معدلات الإصابة بالفئران ذات سلالة المرور المنخفضة تقترب من 100٪ يتم استخدام مزيج من الأمصال كما هو موضح هنا والمزرعة لتحديد ما إذا كان كل فأر قد أصيب بالعدوى أثناء محاولة إجراء التغذية الشعرية.

من المهم أن تتذكر الاستمرار في فحص القراد بشكل دوري بحثا عن دليل على تغذية أو إزاحة الأنابيب من أجزاء الفم بعد نموها. مهدت تقنيات تغذية القراد على الثدييات الطريق للباحثين في مجال أمراض النبيذ لاستكشاف استجابات المضيف ومسببات الأمراض بعد العدوى الطبيعية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية توليد القراد من الأنواع الغريبة السابقة التي تؤوي قراد بور والحديد على مير لإجراء دراسات حول مرض لايم.