جمع اللعاب وقياس الكورتيزول اللعابي وألفا أميليز في المجتمع الضعيف المقيم من كبار السن عن طريق مقدمي الرعاية الأسرية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إظهار جمع وتحليل المقاييس الحيوية لللعاب في مجتمع يقيم ، سكان ضعفاء طبيا. يتم تحقيق ذلك عن طريق تجميع مستلزمات جمع اللعاب اللازمة أولا. الخطوة الثانية هي ترتيب الزيارة المنزلية ، وتوفير المستلزمات وتوضيح إجراءات جمع اللعاب لمقدم الرعاية.

بعد ذلك ، قدم تعليمات مكتوبة وأجب عن أي أسئلة. الخطوة الأخيرة هي إعادة عينات اللعاب إلى المختبر وإجراء إجراءات الفحص. في النهاية ، تم تصميم البروتوكول لقياس المظهر الجانبي اليومي لأميليز ألفا اللعابي وتركيزات الكورتيزول اللعابي في المرضى الضعفاء طبيا المقيمين في المجتمع.

ستجيب هذه الطريقة على الأسئلة الرئيسية في مجالات البحوث السلوكية الحيوية لتعزيز فهمنا للحساسية البيولوجية والقابلية للتأثر بالعمليات المتعلقة بالإجهاد. قبل تحديد موعد زيارة منزلية للموافقة عليها ، يقوم المشاركون بجمع وتجميع الإمدادات اللازمة ، والتي تشمل أربعة مسحات للأطفال للقياس النفسي ، وأربعة أنابيب تخزين مسحة ، وأربعة أغطية أنابيب مرمزة بالألوان ، وخمسة ملصقات بيضاء ، وحقيبة بلاستيكية واحدة من Ziploc ، وورقة تعليمات لجمع اللعاب ، وخمسة قفازات نيترو ، وصندوق تخزين. باستخدام يد قفاز نيترو ، ضع أربع مسحات للأطفال من سالومي في أنابيب تخزين المسحة الأربعة وقم بتغطيتها بأغطية ملونة صفراء وبرتقالية وزرقاء وأرجوانية على التوالي.

بعد ذلك ، ضع ملصقا على كل أنبوب تخزين للإشارة إلى وقت التجميع. ضع أنابيب التخزين الأربعة المغطاة ، وورقة تعليمات جمع اللعاب ، وأربعة قفازات نيترو في كيس Ziploc ، وقم بتسميتها بمعرف الموضوع وتاريخ التجميع. باتباع هذا الجدول الزمني ، زيارة منزلية قصيرة للأشخاص الذين وافقوا عليها مسبقا وفي اليوم السابق لأخذ عينات اللعاب.

بعد الوصول إلى منزل الشخص ، قم بتوفير الكيس البلاستيكي من الإمدادات وورقة التعليمات لجامع اللعاب. راجع ورقة التعليمات وأكد على الحاجة إلى تسجيل أوقات البدء والتوقف لجمع اللعاب من خلال إبراز التعليمات المكتوبة. سجل الاسم والجرعة والجدول الزمني لجميع الوصفات الطبية والأدوية التي لا تستلزم وصفة طبية التي تناولها المشارك خلال آخر 48 ساعة.

اطلب من جامع اللعاب أو SC وضع قفاز نيترو على اليد المهيمنة. اطلب من المشارك إمالة رأسه للأمام للسماح للعاب بالتجمع على أرضية فمه. بعد ذلك ، اطلب من SC فك غطاء أنبوب تخزين المسحة واسترداد المسحة الفموية.

توجيه إلى SC بوضع المسحة الفموية تحت مقدمة لسان كبار السن لامتصاص حوالي ثلاث قطرات من اللعاب المجمع وتثبيت المسحة الفموية في مكانها لمدة دقيقتين للتأكد من أنها مشبعة، وطلب من SC إعادة المسحة الفموية المشبعة مرة أخرى إلى سلة أنبوب تخزين المسحة، واستبدل الغطاء. بعد ذلك ، اطلب من SC وضع الأنبوب على الفور في صندوق التخزين ووضعه في الفريزر. بعد التخلص من القفاز في سلة المهملات ، نصح SC بتسجيل أوقات البدء والتوقف في ورقة تعليمات اللعاب.

بعد ذلك ، أبلغ SC أنهم سيجمعون عينات اللعاب في أربع مناسبات في اليوم التالي ، وتحديدا عند الاستيقاظ بعد 30 دقيقة من الاستيقاظ في منتصف الصباح والمساء ، اطلب من SC إخبار المريض بشطف فمه بالماء قبل 10 دقائق من جمع اللعاب. بعد جمع اللعاب ، تخلص من العينات الملوثة بالدم بشكل واضح. قم بتوجيه SC بأن تبقى عينات اللعاب في الفريزر حتى يتم استعادتها من قبل فريق الدراسة.

اتصل بفريق الدراسة للتأكد من أنهم سيحددون وقتا ويوما لاسترداد العينات المجمدة وإحضار مستلزمات جديدة لجمع اللعاب لأي تاريخ جمع مستقبلي. بمجرد إزالة العينات من الفريزر الخاص بالموضوع، احتفظ بها مجمدة أثناء نقلها إلى المختبر عن طريق وضعها في كيس تجميد معزول. عند الوصول إلى المختبر ، استبدل الملصق الأبيض الموجود على كل أنبوب برمز شريطي متسلسل.

تحقق من تطابق الرمز الشريطي المتسلسل مع معرف الموضوع وتاريخ التجميع ووقت التجميع. ثم أعد عينات اللعاب إلى فريزر 20 درجة مئوية تحت الصفر لترسيب الميوسين. بعد إذابة عينات اللعاب ، قم بالطرد المركزي للعينات عند 1500 ضعف الجاذبية لمدة 15 دقيقة.

بمجرد أن تكون كواشف مجموعة فحص اللعاب في درجة حرارة الغرفة لمدة 90 دقيقة تقريبا ، قم بإعداد مخزن الغسيل المؤقت باتباع تعليمات المجموعة ماصة 25 ميكرولترا من عناصر التحكم والعينات القياسية في الآبار المناسبة للوحة 96 بئر. بعد هذه الماصة ، يترافق 200 ميكرولتر من محلول الإنزيم المعد مسبقا في الآبار. امزج العينات عن طريق وضع اللوحة على دوار لمدة خمس دقائق عند 500 دورة في الدقيقة.

بعد احتضان العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة 55 دقيقة ، اغسل الطبق وصمة عاره بمحلول غسيل أربع مرات. ثم أضف 200 ميكرولتر من رابع إيثيل البنزين أو محلول TMB. بمجرد خلط العينات لمدة خمس دقائق.

عند 500 دورة في الدقيقة ، قم بتغطية اللوحة بورق الألمنيوم واحتضانها في الظلام لمدة 25 دقيقة إضافية. عند الانتهاء ، أضف 50 ميكرولترا من محلول التوقف واخلط العينات لمدة ثلاث دقائق عند 500 دورة في الدقيقة. في غضون 10 دقائق من إضافة محلول التوقف ، امسح قاع اللوحة واقرأ اللوحة باستخدام قارئ لوحة عند 450 نانومتر.

بعد ذلك ، احسب تركيز الكورتيزول باستخدام متوسط الكثافة البصرية. اطرح متوسط الكثافة الضوئية في آبار الربط غير المحددة من متوسط الكثافة البصرية في آبار التحكم وأخذ العينات القياسية الصفرية أخيرا ، قم بتقدير تركيزات الضوابط والمجهول باستخدام برنامج قادر على الخدمات اللوجستية.

تصميم الإجراءات الموصوفة لقياس المظهر الجانبي النهاري لتركيزات الكورتيزول اللعاب وألفا الأميليز واللعاب. نظرا لإثبات أن نتائج الكورتيزول منحرفة بشكل إيجابي ، فمن المقترح استخدام تحويل السجل إلى البيانات للحصول على توزيع طبيعي. تتوفر العديد من الاستراتيجيات لنمذجة الاختلافات في الإيقاعات النهارية للكورتيزول وألفا الأميليز.

تتمثل الإستراتيجية الأولى في رسم التغيير النهاري لألفا أميليز أو الكورتيزول بين الاستيقاظ و 30 دقيقة بعد الاستيقاظ. الاستراتيجية الثانية هي رسم تركيز الكورتيزول الكلي أو ألفا أميليز على مدار يوم واحد. يمكن تجميع معلمات الموجز الناتجة في فئتين عامتين ، قياس حجم الاستجابة أو مقاييس نمط الاستجابة بمرور الوقت.

قد تكون نمذجة منحنى النمو مفيدة للدراسات التي يتم فيها جمع عينات متعددة في الأفراد على مدار اليوم. يمكن تركيب منحنى النمو للسماح بالاختلافات الفردية في الدورة النهارية عن طريق إضافة تنبؤات على المستوى الفردي أو مستوى القياس. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية جمع اللعاب وكيفية تعليم مقدمي الرعاية كيفية جمع اللعاب من الناحية الطبية لكبار السن لدينا في المنزل ، ويجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء التحليل المختبري لتحليلات اللعاب الممكنة وذات الامتثال العالي وإنتاج عينات عالية الجودة.