حقن مثلي من خلايا سرطان الثدي في الثديية الدهون وسادة من الفئران لدراسة نمو الأورام.

الهدف العام من هذا الإجراء هو التحقيق في تطور خلايا الثدي بعد نقش الخلايا السرطانية في وسادة دهون الذاكرة للفأر. يتم تحقيق ذلك عن طريق حقن خلايا سرطان الثدي في وسادة الذاكرة الدهنية للفأر البالغ ، ثم قياس حجم الورم باستخدام الفرجار عند مستويات زمنية محددة مسبقا. في نهاية التجربة ، تم تحديد كتلة الورم وحجمه ويتم حصاد دم ورئتي لمزيد من التحليل.

في النهاية ، يمكن قياس النقائل الكلية والصغرى عن طريق التحليل الكيميائي البصري والمناعي على التوالي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل حقن الخلايا السرطانية تحت الجلد ، هي أن موقع حقن وسادة الدهون الثديية يحاكي الموقع الأصلي لتكوين ورم الثدي ، مما يؤدي إلى نتائج أكثر موثوقية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان الثدي ، مثل الورم أو المثبطات أو الجينات المسرطنة أو مكونات الحيز اللحمي التي تشارك في تطور السرطان.

قبل يوم واحد من الإجراء ، حلق فئران جاما N-O-D-S-C-I-D من الحلمة الرابعة إلى خط الوسط ووزنها للتحقق من أن جميع لها أوزان متشابهة تقريبا. في اليوم التالي ، اغسل مزرعة خلايا سرطان غدي للثدي البشري مرة واحدة باستخدام PBS ثم جرب اليانسون في الخلايا عندما تنفصل معظم الخلايا. قم بإخماد التفاعل باستخدام 10 ملليلتر من المصل الذي يحتوي على وسائط DMEM ثم قم بتدوير الخلايا لمدة سبع دقائق عند 1 ، 200 دورة في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة ، واغسل الحبيبات لإزالة أي أثر للمصل ، ثم أعد تعليق الحبيبات الثانية في PBS.

بعد العد ، قم بتقسيم الخلايا بتركيزات 500 ، 000 لكل 150 ميكرولتر في أنابيب طرد مركزي دقيقة معقمة على الجليد. ثم املأ أنبوبا مخروطيا سعة 50 ملليلترا ب 35 ملليلترا من PBS وآخر بنسبة 70٪ من الإيثانول وانقع مسحات القطن في كل منهما. عندما تكون جميع الأدوات جاهزة لكل ، ضع مرهم العيون على عيون.

ثم استخدم شريطا لاصقا لكبح فأر التخدير برفق على وسادة التدفئة وتأكيد التخدير عن طريق قرص إصبع القدم. استخدم قطعة قطن مبللة بالإيثانول لتنظيف المنطقة المحلوقة ثم استخدم شفرة مشرط لعمل شق صغير بين الحلمة الرابعة وخط الوسط. أدخل قطعة القطن المنقعة ب PBS في الشق لعمل جيب ثم استخدم الملقط لكشف وسادة دهون الذاكرة ، والتي يمكن اكتشافها من خلال لونها الأبيض.

استخدم زوجا آخر من الملقط للضغط على وسادة الدهون في قاعدتها وفضح الأنسجة بالكامل. ثم قم بعمل ماصة خلايا السرطان الغدي لأعلى ولأسفل عدة مرات لعمل محلول خلوي متجانس وشفط 150 ميكرولترا من الخلايا برفق إلى حقنة الأنسولين. الحرص على إمساك المحقنة أفقيا بحيث يكون ثقب الإبرة متجها لأعلى.

حقن الخلايا في وسادة الدهون الثديية لتأكيد الحقن الناجح عن طريق تورم الأنسجة. ثم حرر الوسادة الدهنية برفق واستخدم ملقط البعوض لخياطة الشق ، وقم بتدوير الخيط حول ملقط البعوض في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة وفي اتجاه عقارب الساعة لعمل ثلاث عقد. بعد الجراحة، قم بحقن مسكن وضع كل في وضع الاستلقاء القصي في قفص فردي، وراقب الفئران حتى تتعافى تماما.

بعد ثمانية أسابيع من زرع الخلية ، يتم تحضير الفئران لحصاد الأعضاء. ثبت على قاعدة رغوية واستخدم الفرجار لقياس حجم الورم. بعد ذلك ، قم بعمل شق عمودي طويل في خط الوسط ثم قم بعمل شقين أفقيين أسفل الساق الأمامية وفوق الساق الخلفية.

قم بتثبيت الجلد على الرغوة لكشف الورم ، ثم استخدم المقص لفصل الورم عن الجلد. ثم قم بإزالة الرئتين برفق ، ووضع الرئة اليسرى في محلول بوين لمدة ثلاثة أيام وبعد ذلك سيصبح هذا الفولكلور النقيلي السطحي مرئيا بوضوح للعين المجردة ، وقم بتجميد جزء من الأنسجة في النيتروجين السائل لعزل الحمض النووي الريبي لاحقا ، ووضع الجزء المتبقي من الورم في أحد الأنابيب المخروطية المملوءة بالفورمين. بعد ذلك ، بعد التضحية بالحيوان عن طريق ثقب القلب ، قم بتوزيع عينة الدم 450 ميكرولتر في أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على 50 ميكرولترا من سترات الصوديوم 3.2٪ ، ثم قم بتدوير خلايا الدم الحمراء وتخزين عينات البلازما عند سالب 20 درجة مئوية حتى يؤدي استخدام الأخطاء التجريبية مثل التلقيح غير الدقيق للخلايا أو التسرب إلى اختلافات في حجم الورم أو حتى عدم وجود ورم يؤدي إلى تشكيل هيكل يشبه الذاكرة.

وسادة دهنية حقن مع عازلة التحكم. يعتمد معدل نمو الورم أيضا على طبيعة خط الخلايا المحقون ، ويمكن ملاحظته بشكل عام من خلال جلد الفأر. بالإضافة إلى ذلك ، قد تظهر المنطقة المحيطة بالورم أوعية كبيرة تنشأ عن إعادة تشكيل الأوعية الدموية والتي قد تلعب أدوارا حاسمة في إزالة الفضلات وتزويد أنسجة الورم بالمغذيات والأكسجين.

على عكس التجارب المختبرية ، قد لا يكون معدل نمو الخلايا السرطانية ثابتا في الوقت المناسب في الجسم الحي بسبب نقص الأكسجة ونقص العناصر الغذائية. قد تتشكل المناطق النخرية داخل الأنسجة المحيطة ، وستؤثر هذه المناطق على معدل نمو الورم. بالإضافة إلى ذلك ، قد تؤثر الخلايا المحقونة التي تعبر عن جينات معينة ذات أهمية على تطور السرطان لأن الجينات قد تحفز نمو الورم الذي يبدأ بسرعة ، ولكنه يتباطأ في النهاية أو العكس.

جمع الرئتين في محلول بوين على تصور البؤر النقيلية السطحية ، والتي تظهر على شكل تكوينات شاحبة بارزة على سطح أنسجة الرئة. يعتمد تكوين البؤر على خط الخلية. قد تؤدي الخلايا غير العدوانية إلى ظهور نقائل دقيقة فقط ، والتي يمكن التعرف عليها بسهولة من خلال تلطيخ h و e على أنسجة الرئة المضمنة في البارافين.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل Eliza للإجابة على أسئلة إضافية مثل ، كيف يؤثر نمو الورم التجريبي على مستويات السيتوكينات أو الجزيئات المؤيدة للأوعية الدموية في البلازما.