نموذج الجلد ماوس الجنين من إصلاح الجرح Scarless

الهدف العام من التجربة التالية هو نمذجة التئام الجروح الجلدية الجنينية الخالية من الندوب بشكل متكرر في الفئران. يتم تحقيق ذلك عن طريق التوقيت الدقيق لعمر الحمل للأجنة لجراحة الجنين باستخدام تقنية الإباضة الزائدة. بعد ذلك في الرحم ، يتم إجراء جراحة الجنين لتوليد جرح جلدي للجنين في نقاط زمنية محددة.

تظهر النتائج أن جروح الجنين المتولدة في سن الحمل E 16.5 تتجدد ، بينما تخضع تلك الموجودة في E 18.5 للإصلاح مع ندبة ليفية بناء على تلطيخ نسيجي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التئام الجروح الخالي من الندوب ، مثل تحديد الاختلافات الجزيئية في جروح الحمل المبكرة التي تلتئم دون تكوين ندبة. بالضبط. يعد توقيت العمر الحملي لأجنة الفئران لجراحة الجنين عند E 16.5 و E 18.5 ذا أهمية حاسمة.

في هذا القسم ، نقوم بتفصيل بروتوكولنا لتوقيت حمل الفئران باستخدام حقن الدورة الشهرية وقوات حرس السواحل الهايتية للحث على الإباضة الفائقة بين الساعة الواحدة والثالثة بعد الظهر. ابدأ بحقن إناث الفئران داخل الصفاق بثلاث إلى خمس وحدات من الدورة الشهرية. في 100 ميكرولتر من PBS.

يجب إيواء الإناث في خمسة أو أقل لكل قفص. هذا هو اليوم الأول من البروتوكول. بعد ذلك في اليوم الثالث بين الظهر و 2:00 مساء حقن نفس الفئران مع قوات حرس السواحل الهايتية بنفس تركيز حقن الدورة الشهرية.

ستحدث الإباضة في حوالي 12 ساعة بعد الحقن مباشرة بعد الحقن ، وهذه الإناث مع ذكور تتراوح أعمارهم بين ثمانية إلى 16 أسبوعا ، وعادة ما تتزاوج أنثى لكل ذكر. الآن في صباح اليوم الرابع ، بين الساعة السادسة و 10:00 صباحا منفصلة. تسجل الإناث من الذكور هذه النقطة الزمنية كعمر الجنين.

E 0.5 لا تهتم بالفحص. بالنسبة للسدادات المهبلية ، فإن ما بين 30 و 50٪ من الإناث سيكونن حوامل اعتمادا على سلالة العقم. أولا ، قم بتنظيف جميع أسطح غرفة العمليات والمعدات باستخدام كحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪.

ثانيا ، قم بتعقيم المستلزمات والأدوات الجراحية عن طريق تعقيمها. وثالثا ، استخدم عبوات معقمة تشمل الشاش والأدوات الجراحية. بعد سد الحمل في سن الجنين ، تم تخدير E 16.5 إلى E 18.5.

تأكد من مستوى التخدير الجراحي باستخدام قرص إصبع القدم. ثم ضعي مرهم العين على العينين وكريم إزالة الشعر على البطن. قم بإزالة الكريم في غضون 30 ثانية ثم افرك الجلد بالبوفيدون واليود والكحول.

الآن تحت مجهر التشريح ، قم بإجراء شق البطن في خط الوسط باستخدام مقص الجراحة المجهرية. كشف الرحم والأجنة برفق وري المجال الجراحي باستخدام PBS دافئ من إبرة طرف حادة. يمكن عمل إبرة طرف حادة عن طريق ثني إبرة عادية.

الآن ضع الجنين بحيث يكون هناك وصول كامل إلى الظهر. ثم باستخدام خياطة نايلون 7.0. مرر غرزة خيط المحفظة عبر الرحم ، بحيث تغطي موقع الجرح الظهري المقصود.

ضع خيط المحفظة على منطقة من الظهر على يسار أو يمين الحبل الشوكي ، وفي منطقة من جدار الرحم خالية من الأوعية الدموية الكبيرة. بعد ذلك في منتصف سلسلة المحفظة ، قم بعمل شق بثلاثة ملليمترات عبر جدار الرحم والكيس الأمنيوسي. اتبع هذا الشق عن طريق الري بمزيد من PBS الدافئ.

ثم في ظهر الجنين ، استخدم مقصا جراحيا مجهريا لقطع جرح استئصالي كامل السماكة يبلغ طوله حوالي ملليمتر واحد. نظف هذا الشق باستخدام قضيب طرف قطني. الآن حقن ثلاثة ميكرولترات من الحبر الهندي تحت الجلد في موقع الجرح إلى موقع السوق.

اتبع الحقن مع PBS دافئ. تأكد من الاحتفاظ بالحبر في موقع الجرح. تتطلب الخطوات القليلة التالية مساعدا أثناء إغلاق خياطة سلسلة المحفظة.

اطلب من أحد المساعدين الحفاظ على تيار من PBS الدافئ الذي تم إخراجه من حقنة قياس 10 في الكيس الأمنيوسي. عند إغلاق خيوط الخياطة، اسحب المحقنة. الآن أعد الرحم برفق إلى تجويف البطن ، وتجنب الجلد والصفاق ، واطلب من المساعد ري تجويف البطن.

انتهي بوضع دبابيس في الجلد والصفاق لإغلاق تجويف البطن بسرعة. بعد إغلاق البطن ، ضع في حاضنة دافئة عند 37 درجة مئوية. راقب التعافي خلال ال 30 دقيقة القادمة أو حتى يستعيد راقد قصي مستقر.

ثم قم بحقن البوبرينورفين تحت الجلد وإيواء بشكل فردي مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. لا تقم بإيواء مع الآخرين حتى يتعافى تماما من الإجراء. استمر في توفير البوبرينورفين كل 12 ساعة خلال ال 48 ساعة التالية بعد الجراحة وحسب الحاجة بناء على تقييمات الألم المنتظمة.

إذا لزم الأمر ، يمكن توفير مسكنات إضافية للألم بعد الجراحة باستخدام الكاربروفين بعد 48 ساعة من الجراحة. التضحية بالأم بجرعة زائدة من الفلور. استمر في التعرض للفلور لمدة دقيقة واحدة بعد توقفها عن التنفس.

تأكد من القتل الرحيم مع خلع عنق الرحم وحصاد الجنين المصاب وجنين مكافحة جريح من الأمم المتحدة لتحليله النسيجي. قم بإصلاح الأجنة في 4٪ PFA ، متبوعا بالتضمين في البارافين. للنماذج المعدلة وراثيا الفلورية.

قد يكون الحفظ بالتبريد باستخدام مركب OCT مناسبا. بعد تنفيذ الإجراء بشكل صحيح ، يكشف تلطيخ het toin و eosin أن الجلد E 16.5 يشفى مع الحد الأدنى من التندب ، وإعادة الظهورة الكاملة ، وزيادة طفيفة فقط في عدد الخلايا الالتهابية. علاوة على ذلك ، تلتئم هذه الجروح ببنية جلدية طبيعية وتحتوي على بصيلات شعر متجددة داخل موقع الإصابة.

كما لوحظت الأسهم ، فإن انخفاض الحبر عند رأس السهم أمر طبيعي عند تطبيق الحبر بشكل صحيح. أخيرا ، يكشف تلطيخ ثلاثي الكروم عن نمط كولاجين جلدي شبكي دقيق مميز للأدمة غير المتندبة مقارنة بالجروح التي تحدث في E 16.5. الجروح التي تحدث في E 18.5 لها ندبة كثيفة مع فقدان بنية الجلد الطبيعية في موقع الإصابة.

يتم الكشف عن هذا بسهولة من خلال تلطيخ h و d. وبالمثل ، فإن تلطيخ ثلاثي الكروم للأجنة المصابة E 18.5 يكشف عن نمط كثيف من ترسب الكولاجين غير المنظم كما هو مذكور في الأسهم أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تكون لطيفا عند التلاعب بالرحم والجنين.