في المختبر نمذجة السرطانية العصبية الغزو: وظهري الجذر العقدة نموذج

توضح مقالة الفيديو هذه استخدام العقد الجذرية الظهرية (DRG) / نموذج الخلية السرطانية في سرطان البنكرياس الغدي الأقنية.

الهدف العام لهذا النموذج هو تلخيص البيئة المكروية العصبية السرطانية. يتيح ذلك استكشاف تفاعلات الخلايا العصبية للخلايا السرطانية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال البيئة المكروية للورم ، مثل التفاعل بين الخلايا السرطانية والخلايا العصبية والتأثير المتبادل لكل مجموعة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها موثوقة وسهلة الأداء ومعالجة كل من العوامل الخلوية والدماغية في المكانة العصبية. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو التطوير العلاجي والاستهداف الدوائي للعوامل الرئيسية في عملية إعادة التشكيل العصبي والغزو طوال تطور السرطان. بعد القتل الرحيم للحيوان في حجرة CO2 ، انقع الفراء بنسبة 70٪ من الإيثانول واتركه حتى يجف.

قم بتثبيت الفأر في وضع الانبطاح ، ثم قم بعمل شق خط الوسط يمتد بشكل قحمي من الرقبة الخلفية إلى العمود الفقري الخشبي. بعد ذلك ، استخدم الملقط لرفع اللوحات الجلدية بشكل ثنائي وفضح الأنسجة تحت الجلد. ملامسة جمجمة الفأر حتى يتم تحديد الوصلة القحفية العنقية.

استخدم مقصا بزاوية عموديا على لقطع عضلات عنق الرحم والعمود الفقري عند تقاطع عنق الرحم. بعد ذلك ، قم بتشريح العمود الفقري ذيليا واستخدم المقص لإجراء قطع ذيلية كاملة في الفقرات القطنية الخامسة. بعد ذلك ، ضع الفأر في وضع ضعيف ، وبعد إجراء شق على طول خط الوسط من الرقبة إلى البطن ، اسحب الجلد بشكل جانبي ثم افتح الصفاق.

في الجمجمة ، افتح جدار الصدر بالمقص. بعد إزالة الأعضاء البريتونية وخلف الصفاق ، استخدم ملقطا وشفرة جراحية لقطع الأضلاع ، تاركا ما يقرب من خمسة ملليمترات من الأضلاع بارزة من العمود الفقري. قم بإزالة العمود الفقري من باقي الجسم.

واغسلها مرتين باستخدام PBS البارد. ضع العمود الفقري متجها لأعلى في نفس الاتجاه القحفي الذيلي على منصة امتصاص غير ملتصقة تحت مجهر استريو مزود بتكبير 4X. أثناء النظر من خلال هذا المجهر الاستريو ، قم بإزالة أي عضلات العمود الفقري والنسيج الضام.

استخدم الأضلاع كمعالم للأعصاب ، لأنها تغادر العمود الفقري. تقع DRG في فقرات عنق الرحم والصدر والقطني. استخدم المقص لقطع الجسم الفقري عند خط الوسط ، مما يؤدي إلى إنشاء نافذة على الحبل الشوكي ، ثم سحب الجسم الفقري برفق لكشف الحبل الشوكي وجذور DRG.

بعد ذلك ، باستخدام مقص الزنبرك ، قم بإزالة الضلع العلوي لفضح DRG. اتبع العصب المحيطي وسطيا على طول الضلع الجانبي إلى DRG. حدد DRG ، والذي يمكن وصفه بأنه يشبه صفار بيضة مقلية ملقاة على العصب.

اقطع العصب الوربي البعيد عن DRG مع ترك ملليمترين إلى ثلاثة ملليمترات من العصب البعيد إلى العقد لاستخدامها في التراجع. أمسك العصب الصادر بعناية باستخدام الملقط دون الضغط أو إتلاف DRG. الآن قم بتطبيق تراجع لطيف على DRG عن طريق سحب العصب بشكل جانبي.

ثم قطع الجذور الأمامية والخلفية بالقرب من DRG. انقل DRG المعزول إلى طبق بتري مقاس 35 ملم مليء ب DMEM المكمل بالثلج. من خلال العمل في غطاء التدفق الصفحي ، ضع طبق بتري زجاجي قاع 35 ملم على شبكة ورقية على الجليد.

باستخدام طرف ماصة مبرد مسبقا، قم بتوزيع ما يقرب من 10 ميكرولترات من ECM المستنفد لعامل النمو في وسط الشبكة. أثناء عرض الطبق من خلال مجهر استريو من 2 إلى 4X ، ضع DRG في وسط ECM بالقرب من قاع الطبق. بعد حصاد وغسل 40,000 خلية سرطانية ذات أهمية من الثقافات المتقاربة ، تعيد تعليق الحبيبات و 40 ميكرولترا من ECM على الجليد.

مرة أخرى ، اعرض الشبكة من خلال المجهر الاستريو ، وقم بقياس 500 ميكرون من DRG ، وقم بتوزيع 10 ميكرولتر من تعليق الخلية في هذه المرحلة. كرر في جميع الاتجاهات من DRG. اترك الطبق في غطاء التدفق الصفحي لمدة 10 إلى 15 دقيقة حتى يتصلب ولكن لا يجف.

بمجرد أن تصلب وحدة التحكم في المحرك ، أضف DMEM المكملة ببطء عن طريق سحب العينات على الجدار الجانبي للوحة. أضف ما يقرب من ملليلترين من الوسائط ، وهو ما يكفي لتغطية ECM. يجب أن تتم إضافة DMEM ببطء شديد عن طريق سحب العينة على الجدار الجانبي للوحة لتجنب انفصال DRG عن قاع اللوحة.

ضع اللوحة في حاضنة زراعة الأنسجة ، واتبع التعليمات الواردة في الجزء المكتوب من البروتوكول للحفاظ على المزرعة. يظهر هذا الرسم المجهري DRG في الجزء العلوي من مجال الرؤية والخلايا السرطانية في الجزء السفلي من مجال الرؤية في اليوم صفر بعد البذر. هنا ، تظهر نفس الثقافة بعد سبعة أيام من البذر.

كما هو موضح في الأسهم ، تهاجر الخلايا السرطانية على طول الخلايا العصبية DRG. يوضح هذا الرسم البياني مؤشر غزو العصب DRG لأنواع مختلفة من الخلايا السرطانية. يمكن ملاحظة أن خلايا Kpc 989 و MiaPaCa لها مؤشر غزو عصبي أعلى من خلايا QLL2 أو NIH3T3.

يصور هذا الرسم البياني الإحداثي مسار هجرة خلية سرطانية KPC الملامسة للعصب الموضح باللون الأحمر وخلية QLL2 الموضحة باللون الأرجواني. يتم عرض إحداثيات X و Y. يوضح هذا الشكل تحليلا من مسافة المنشأ لخلايا سرطانية QLL2 المهاجرة مع ملامسة محورية.

هنا تظهر مسافة المنشأ للخلايا السرطانية في البكالوخي. في كل حالة ، كان اتجاه الهجرة نحو العقدة العصبية. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تحضير المزيد من العقد أكثر من المطلوب لأن معدل الفحص ليس 100٪ بعد تطويره ، مهد دافع DRG الطريق للباحثين في مجال أبحاث السرطان لاستكشاف المكانة العصبية داخل البيئة المكروية للورم.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية التعرف على المعالم التشريحية مثل DRG في الماوس ، واستخراج DRG ، وأخيرا ، كيفية زراعته في DCM. كما يتم تقديم تثقيف DRG جنبا إلى جنب مع الخلايا السرطانية.