Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

Chirag Vasavda; Nicholas W. Zaccor; Paul C. Scherer; Charlotte J. Sumner; Solomon H. Snyder

doi:10.3791/55561

قياس إشارة مستقبلات G- البروتينات عبر الملزمة غتب المسمى راديو

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

قياس إشارة مستقبلات G- البروتينات عبر الملزمة غتب المسمى راديو

Full Text

17,288 Views

10:13 min

June 9, 2017

DOI: 10.3791/55561-v

Chirag Vasavda*¹, Nicholas W. Zaccor*¹, Paul C. Scherer¹, Charlotte J. Sumner^1,2, Solomon H. Snyder^1,3,4

¹The Solomon H. Snyder Department of Neuroscience,Johns Hopkins University School of Medicine, ²Department of Neurology and neurosurgery,Johns Hopkins University School of Medicine, ³Departments of Pharmacology and Molecular Sciences,Johns Hopkins University School of Medicine, ⁴Department of Psychiatry and Behavioral Sciences,Johns Hopkins University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

غوانوسين ثلاثي الفوسفات (غتب) ملزمة هي واحدة من الأحداث المبكرة في G- البروتينات مستقبلات (غر) تفعيل. يصف هذا البروتوكول كيفية وصف فارماكولوجيكال التفاعلات غر-يجند محددة عن طريق رصد ربط التناظرية غتب التناظرية، [ ³⁵ S] غوانوسين-5'- O- (3-ثيو) ثلاثي الفوسفات ([ ³⁵ S] غتبس)، في استجابة ل يجند من الفائدة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل الأغشية الخلوية التي تحتوي على مستقبلات مقترنة ببروتين G أو GPCRs ودراسة علم الأدوية GPCR باستخدام مقال ملزم GTP وظيفي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الكيمياء الحيوية فيما يتعلق بالخصائص الدوائية للمستقبلات المقترنة ببروتين G الراسخة أو اليتيمة. تتمثل المزايا الرئيسية في أنها بسيطة وسريعة وتقيس الحدث الأكثر قربا في إشارات المستقبلات المقترنة ببروتين G.

أولا ، ضع خلايا الكلى الجنينية البشرية على صفيحة زراعة أنسجة بحجم 10 سم في 10 ملليلتر من DMEM الكامل. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون ، حتى الوصول إلى التقاء 70٪ إلى 80٪. بعد الحضانة ، قم بنقل الخلايا باستخدام HAMOR1 باستخدام كاشف تعداء مناسب وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos