في فيفو التصوير من "الفئران مراسل" Cx3cr1^{التجارة والنقل/التجارة والنقل} مع المجالات الطيفية الضوئية التماسك التصوير المقطعي وفحص تنظير العين الليزر

ويصف هذا البروتوكول عالية الدقة كيف تقنيات التصوير مثل التصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي وفحص تنظير العين الليزر يمكن أن تستخدم في القوارض الصغيرة، باستخدام نظام منصة تصوير العيون، للحصول على معلومات حول ميكروجليال وسمك الشبكية خلية التوزيع، على التوالي.

تتمثل الأهداف العامة لهذا الإجراء في استخدام التصوير المقطعي للتماسك البصري في المجال الطيفي وتنظير العين بالليزر المسح الضوئي للحصول على معلومات حول سمك الشبكية وتوزيع الخلايا الدبقية الدقيقة ، على التوالي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال طب العيون التجريبي حول العلاقة بين تشوهات الشبكية وتراكم الخلايا الدبقية الدقيقة. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنه يمكن الحصول على هذه المعلومات في الوقت الفعلي بطريقة غير جراحية.

بعد التأكد من عدم الاستجابة لمسحة القرنية ، ضع الماوس في وضع الانبطاح على الجانب الأيسر من المنصة ، مع مواجهة المدار الأيمن للعدسة. ضع قطرة من هيدروكسي بروبيل ميثيل سلولوز في عدسات لاصقة صلبة ونفاذة للغاز على العين اليمنى وابدأ وحدة الاستحواذ. بالنسبة لعمليات المسح الضوئي B ، حدد خيار التصوير المقطعي بالأشعة تحت الحمراء بالإضافة إلى التصوير المقطعي للتماسك البصري ضمن التطبيق والهيكل ، حدد شبكية العين واستخدم المعالج الدقيق لتحريك العدسة نحو عين الماوس.

قبل التركيز على شبكية العين ، تأكد من تحديد مؤشر العين دكستر ، ثم استخدم مقبض التركيز لتكبير شبكية العين حتى تظهر الأوعية الكبيرة بوضوح في صورة قاع العين على الجانب الأيسر من شاشة الشاشة. استخدم المعالج الدقيق لضبط موضع الكاميرا ، حسب الضرورة ، قم بتدوير مقبض الحساسية لتقليل أو زيادة سطوع صورة قاع العين ، حسب الاقتضاء. حدد المسح الضوئي الخطي من قائمة النمط واستخدم المعالج الدقيق لتحريك المسح الضوئي B بين الزوايا العلوية والسفلية للتصوير المقطعي للتماسك البصري للمجال الطيفي أو SD-OCT.

قم بتعيين قيمة الوقت الفعلي التلقائي إلى تسعة على الأقل للحصول على جودة صورة عالية وانقر فوق اكتساب. عند الحصول على جميع الصور ، انقل العدسات اللاصقة من العين إلى محلول ملح طازج متوازن وترطيب القرنية بقطرة جديدة من هيدروكسي بروبيل ميثيل سلولوز. بعد تصوير العين اليسرى ، قم بتدوير البصرية القياسية بزاوية 30 درجة في اتجاه عكس اتجاه عقارب الساعة لإزالتها وتركيب العدسة بزاوية 55 درجة لجولة ثانية من التصوير.

لتقييم التألق التلقائي ، دون تحريك الماوس ، حدد الأشعة تحت الحمراء على لوحة التحكم وركز على أوعية الشبكية الكبيرة. حدد التصوير الفلوري التلقائي واستخدم مقبض الحساسية لضبط سطوع الصورة ، حسب الضرورة. اضغط على مقبض الحساسية مرة واحدة واضبط القيمة التلقائية في الوقت الفعلي على 67 على الأقل.

عند الوصول إلى القيمة التلقائية في الوقت الفعلي ، احصل على الصورة واضغط على مقبض الحساسية مرة ثانية لإيقاف المتوسط. اضبط التركيز لتصور طبقات الشبكية المختلفة ، حسب الاقتضاء تجريبيا. عندما يتم الحصول على جميع الصور ، على عدسة واسعة المجال بزاوية 102 درجة على البصريات وتصوير التألق التلقائي في كل عين ، كما هو موضح للتو.

لقياس سمك الشبكية اليدوي في كل صورة ، انقر نقرا مزدوجا فوق الاسم الموجود في أول تجريبي لفتح فحص OCT. افتح المسح B الذي تم الحصول عليه باستخدام العدسة 30 أو 55 درجة وحدد ملف تعريف السماكة. انقر فوق أيقونة تحرير تجزئة الطبقة.

سيحدد البرنامج تلقائيا أغشية الحد الداخلية والقاعدة. لتصحيح موضع الأغشية يدويا ، حدد الطبقة المراد تعديلها ، بالإضافة إلى خيار الدائرة الحمراء. اضغط باستمرار على زر الماوس، حرك الدائرة لتعديل الخط حتى يتم وضع الطبقة المقابلة بشكل صحيح وانقر فوق حفظ وإغلاق للخروج من النافذة.

ضمن خيار الطبقة ، حدد شبكية العين وانقر على موضع مختلف على الرسم التخطيطي لعرض سمك الشبكية للموضع المحدد. ثم قم بقياس سمك الشبكية والمسافة المطلوبة من رأس العصب البصري وتصدير القيم إلى جدول بيانات. في عمليات المسح الفردية SD-OCT التمثيلية هذه من فأر متماثل اللواقح للتعبير عن gfp تحت مروج Cx3cr1 ، يتم تصور بنية الشبكية بوضوح في كل من صور العدسة 30 درجة و 55 درجة.

ومع ذلك ، لوحظت انعكاسية عالية للمشيمية في عمليات المسح التي تم الحصول عليها باستخدام عدسة 30 درجة. بعد SD-OCT ، يسمح تنظير العين بالليزر بتصور الخلايا الدبقية المجهرية الإيجابية gfp الفردية في شبكية العين باستخدام عدسة 55 درجة أو 102 درجة مع تغطية منطقة قاع العين الأكبر التي تم الحصول عليها باستخدام عدسة 102 درجة. في فحوصات SD-OCT ، بعد التصحيح اليدوي لحدود الشبكية الداخلية وحدود الغشاء الأساسي ، عادة ما يتم ملاحظة ارتباط جيد لقياس سمك الشبكية بين العدسات 30 و 55 درجة عند قياس نفس المسافة من رأس العصب البصري.

بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في أقل من خمسين دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال طب العيون التجريبي لاستكشاف أمراض الشبكية في القوارض الصغيرة في الجسم الحي.