أبريل 23, 2018
يصف لنا في فيفو مورين نموذجا لغزو perineural عن طريق حقن خلايا سرطان البنكرياس سينجينيك في العصب الوركي. النموذج يسمح للقياس الكمي لمدى غزو العصب، ويدعم تحقيق الآليات الخلوية والجزيئية لغزو perineural.
الهدف العام من هذا الإجراء الجراحي هو إنشاء نموذج في الجسم الحي للغزو حول العصب عن طريق حقن الخلايا السرطانية في العصب الوركي للفئران. الغزو حول العصب هو غزو الأعصاب الموجودة في العديد من أنواع السرطان يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول العلاقة المترابطة بين السرطان والخلايا العصبية ، مما قد يعزز تطور السرطان وغزوه. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر نموذجا في الجسم الحي للغزو حول العصب حيث يمكن التلاعب بكل من الخلايا السرطانية والبيئة العصبية الدقيقة ويمكن من خلالها تقييم الغزو باستخدام نقاط النهاية النسيجية أو السريرية أو الشعاعية.
تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو علاج الغزو حول العصب لأنه يمكن علاج الفئران المضيفة بعوامل علاجية مرشحة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للآلية الجزيئية لغزو سرطان البنكرياس ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على أنواع الخلايا السرطانية الأخرى. يمكن أيضا تعديل الفئران المضيفة وراثيا ، مما يسمح بدراسة تأثير البيئة الدقيقة العصبية على تطور السرطان.
سيظهر الإجراء ياسونغ يو وأندريا ماركاديس ، أعضاء من مختبري. ابدأ بحصاد خلايا Panc02-H7 الفرعية من قارورة T225 بأربعة ملليلتر من 0.25٪ تريبسين لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية. اجمع الخلايا في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مليلتر وجهاز طرد مركزي عند 900 مرة جم عند 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق.
اغسل الخلايا عن طريق إعادة تعليق حبيبات الخلية في مليلتر واحد من PBS عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل مرتين على الأقل. ثم انقل التعليق إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر على الجليد وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى عند 900 مرة جم عند أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق. بعد الطرد المركزي ، تخلص من المادة الطافية دون إزعاج الحبيبات.
احتفظ بالخلايا المحببة على الثلج حتى الحقن. في اليوم السابق للجراحة ، قم بإزالة الفراء على طول عظم الفخذ على الجانب الظهري لفئران من الذكور أو الإناث C57 Black 6J البالغة من العمر ثمانية أسابيع باستخدام مقص جراحي أو عامل إزالة الشعر الكيميائي. في يوم الجراحة ، قم بتطهير المرحلة ، وتخدير الفئران باستخدام 2٪ isoflurane في غرفة الحث ، وقم بتطبيق مرهم بيطري على العينين لمنع الجفاف تحت التخدير.
حقن كمية مناسبة للوزن من المسكن تحت الجلد ، وانقل الفأر إلى مخروط الأنف في منطقة الجراحة. يتم توفير الدعم الحراري طوال العملية الجراحية. ضع الفأر المخدر على جانبه البطني وقم بتأمين كل طرف برفق بشريط مضاد للحساسية لخلق توتر خفيف في الطرف المراد حقنه.
نظف موقع الحقن بمسحة البيتادين ، ثم مرة أخرى بالكحول بنسبة 70٪. كرر هذه العملية مرتين أخريين وتأكد من عدم وجود شعر متساقط في المجال الجراحي. كخطوة أخيرة ، ضع محلول البيتادين على منطقة الجراحة.
بعد ارتداء القفازات المعقمة ووضع الستارة المعقمة ، استخدم أداة معقمة مخصصة لتطبيق قرصة إصبع القدم قبل عمل الشق تحت الستارة ، ثم استخدم مقصا صغيرا معقما لعمل شق بطول سنتيمتر واحد حوالي ملليمترين أسفل عظم الفخذ وبالتوازي معه. اسحب الجلد بالملقط بشكل جانبي لكشف العضلات تحتها. افصل عضلات الألوية الكبيرة والعضلة ذات الرأسين الفخذية على طول مستوى اللفافة وفضح العصب الوركي تحتها.
حرر العصب من العضلات المحيطة باستخدام تشريح حاد. اسحب ثلاثة ميكرولترات من الخلايا السرطانية من الحبيبات إلى حقنة معقمة سعة 10 ميكرولتر. ضع ملعقة معدنية صغيرة أسفل العصب عند نقطة الحقن للحصول على الدعم.
أثناء التخيل باستخدام مجهر تشريح ، احتفظ بالإبرة موازية للعصب وأدخلها في العصب. احرص على عدم ثقب الجزء الخلفي من العصب. حقن الخلايا ببطء في العصب خلال خمس ثوان.
يشير تكوين لمبة في منطقة الحقن إلى حقنة جيدة. اترك الإبرة في مكانها لمدة ثلاث ثوان لتقليل التدفق العكسي قبل إزالة الإبرة برفق. يعد الحقن الصحيح للخلايا السرطانية في العصب الوركي أمرا بالغ الأهمية.
إذا تم حقن الخلايا خارج العصب ، فسوف يعاني اتساق الغزو. ومع ذلك ، مع الممارسة والخبرة ، هذا نادر جدا. بعد الحقن ، أعد العصب إلى موضعه الأصلي وقم بتغطية العصب بالعضلات العلوية.
عالج الفئران بتسكين مناسب ثم أغلق الجلد ب 5-0 خيوط نايلون. ضع الفأر بمفرده في قفص نظيف للمراقبة وقدم الدعم الحراري أثناء التعافي حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. في اليوم السابع بعد الجراحة ، ضع الفأر القتل رحيم على جانبه البطني وقم بتثبيت الأطراف البعيدة باستخدام المسامير.
بعد إزالة الجلد على الجانب الظهري من الطرف والجذع المحقون ، استخدم تشريحا حادا لتعريض العصب الوركي بعمق العضلات. للوصول إلى العصب في منطقة الحبل الشوكي ، افصل الحرقفة عن العجز عن طريق إدخال مقص مغلق في المنطقة الضيقة حيث يوجد العصب الوركي ، ثم افتح المقص أثناء الإمساك بالماوس. قم بتشريح العصب الوركي بعناية بعيدا إلى نهاية عظم الفخذ وبالقرب من الحبل الشوكي.
يعد التعامل الدقيق أمرا ضروريا ، حيث أن الأعصاب التي تم غزوها هشة للغاية وعرضة للكسر تحت التوتر أو التعامل القوي. كن حساسا وحافظ على سلامة العصب الوركي أثناء التشريح. احصد العصب عن طريق قطع نهايته البعيدة أولا.
ارفع العصب بعناية مع تحريره من الأنسجة المجاورة. قطع العصب في الطرف القريب قدر الإمكان من خروجه من العمود الفقري. استخدم فرجار الورنية لتقدير الطول الإجمالي للغزو.
ابدأ المعالجة عن طريق تضمين العصب المقطوع في مركب OCT. ضع الأعصاب طوليا ومسطحا في قاع القالب قدر الإمكان. حدد على الكاسيت الجانب القريب والبعيد من العصب عن طريق وضع علامة على الحرفين P و D ، ثم ضع الأعصاب المضمنة فوق الجليد الجاف.
عينات القسم باستخدام ميكروتوم ناظم البرد بسمك خمسة ميكرون ووضع الأقسام على شرائح زجاجية. إذا أمكن ، قم بتركيب قسمين عصبيين لكل شريحة. يشير إلى الجانب القريب من العصب.
بعد تلطيخ الشرائح باستخدام H & E والحصول على الصور باستخدام ماسح ضوئي للشرائح ، استخدم برنامج التصوير لتحديد طول الغزو. أدى حقن العصب الوركي بالخلايا السرطانية Panc02-H7 في الموقع المشار إليه إلى تسلل العصب حتى 14 ملم بالقرب من الحبل الشوكي كما هو موضح هنا. فئران NCAM بالضربة القاضية هي فئران يكون فيها جزيء الالتصاق ، جزيء التصاق الخلايا العصبية 1 ، ناقصا.
يكون تسلل Panc02-H7 أقل وضوحا في هذه الفئران. أظهر القياس الكمي لطول ومساحة الغزو أن الغزو قد انخفض بشكل كبير في الفئران بالضربة القاضية NCAM. بمجرد إتقانه ، يمكن تنفيذ هذا الإجراء في 30 دقيقة إذا تم تنفيذه بشكل صحيح.
منذ تطويرها ، سمحت هذه التقنية للباحثين في مجال بيولوجيا السرطان باستكشاف العلاقات بين الخلايا السرطانية والخلايا العصبية في الغزو حول العصب. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام نموذج العصب الوركي لدراسة الغزو حول العصب ، بما في ذلك حقن الخلايا السرطانية في العصب الوركي واستخراج ومعالجة الأعصاب التي تم غزوها. شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تقدم هذه الدراسة نموذجًا في الفئران لدراسة الغزو المحيط بالأعصاب عن طريق حقن خلايا سرطان البنكرياس في العصب الوركي. يسهل النموذج قياس غزو العصب واستكشاف الآليات الخلوية والجزيئية الأساسية.
This in vivo murine sciatic nerve model enables mechanistic investigation of perineural invasion, a key pathway in cancer progression and therapeutic resistance. By allowing manipulation of both cancer cells and nerve microenvironment, the model supports target validation and preclinical de-risking of anti-invasive strategies. Its applicability across cancer types and genetic backgrounds enhances portfolio relevance for oncology discovery programs.
The model fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to preclinical validation of anti-invasive therapeutics, particularly in pancreatic and neurotropic cancers.