نموذج حيوانات صغيرة من نضح الكبد نورموثيرميك السابقين فيفو

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الزرع والحفاظ على الأعضاء. تشمل تطبيقات هذه الطريقة اختبار إضافات التعريرات والمواد المضافة الجديدة ، واختبار البرامج المصممة لتقييم الأعضاء ، وإجراء التجارب المصممة لإصلاح الأعضاء. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن نموذج نضح الكبد المعدل للحرارة خارج الجسم الحي المعروض هنا بسيط وسهل التكرار ومنخفض التكلفة وله مجموعة واسعة من التطبيقات.

ابدأ بإعداد صفعة البوابة قياس 16. قم بقص قسم خمسة ملليمترات من الأنبوب ، وحدد نقطة منتصف القسم بقياس 2.5 ملم. شق في نقطة المنتصف وإزالة النصف الأمامي من الأنبوب.

استخدم hemostat لسحق هذا الجزء المسطح الآن. استخدم ولاعة لإذابة الطرف الآخر من القسطرة الوعائية لإنشاء شفة. بعد ذلك ، قم بإعداد قنية القناة الصفراوية عن طريق قطع منفذ الحقن من قسطرة وعائية قياس 27 ، مع ترك القسطرة فقط.

قم بتوصيل هذا بقسم 10 سم من أنابيب قنية قياس 27. ضع فأر مخدر مع أنفه في مخروط أنف التخدير وأطرافه الأربعة ثابتة. راقب العلامات الحيوية عن طريق ربط الشاشة بالطرف الخلفي الأيسر.

قم بإجراء قرصة إصبع القدم للتأكد من عمق التخدير المناسب. رش بطن بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ واتركه حتى يجف. ضع ستارة معقمة فوق.

ثم ، بعد إجراء شق في خط الوسط من الخنجري إلى العانة باستخدام مقص حاد ، أدخل الصفاق برفق وشق العضلات. قم بتمديد الشق بشكل جانبي إلى اليسار واليمين لتشكيل صليب على مستوى الحد السفلي للكبد. في هذه المرحلة ، قم بخفض تخدير الأيزوفلوران إلى 2٪ اسحب عملية الخنجري باستخدام مشبك البعوض المنحني والأضلاع باستخدام ضاغطات الأضلاع.

ثم استخدم مقصا حادا لقطع الأربطة المنجلية والفرينية والمعدة الكبدية. حدد موقع الوريد الحجابي وربطه بخياطة 7-0 في أقرب وقت ممكن من أصله لمنع التسرب. بعد ذلك ، استخدم قضيب قطني مبلل معقم لنزع أحشاء الفئران.

لف الأمعاء بشاش مبلل بمحلول ملحي عادي بنسبة 0.9٪ ، مع الحرص على عدم شد الأوعية الدموية. ثم قم بتشريح الوريد الأجوف السفلي لإزالة الأنسجة الزائدة. قم بتشريح خلف IVC متفوقة فقط على التشعب وقم بتمرير حلقة من خياطة حريرية 4-O لاستخدامها لاحقا.

بعد ذلك ، قم بسحب الكلية اليمنى للتعرض للوريد الكظري الأيمن وسحب الفص الأيمن من الكبد بشكل متفوق باستخدام الشاش. اربط الوريد الكظري الأيمن بخياطة حريرية 7-0 بالقرب من IVC قدر الإمكان وقم بالكي عبره بعيدا عن ربطة العنق. ثم قم بتشريح الوريد الطحال بعناية.

اربطي إذا تم إبطالهما باستخدام خيوط حريرية 7-0 وقطعيها بين الغرزتين. بعد تشريح الشريان المعدي والاثني عشر ، اربط الشريان المعدي والاثني عشر بخياطة حريرية 7-0 وربطها. ثم قم بتشريح حول الشريان الكبدي وضع ربطة خياطة حريرية 7-0 حوله.

بعد ذلك ، قم بتشريح القناة الصفراوية. ثم تحقق من طول القناة الصفراوية ، واربطها في الطرف البعيد ، وضع حلقة من الخيط حول القناة الصفراوية وبالقرب منها قدر الإمكان. استخدم مقصا صغيرا لقطع ثقب يبلغ قطره نصف قطر القناة ، وضع قسطرة قياس 27 في القناة الصفراوية بالقرب منها.

اربط القسطرة في مكانها باستخدام خياطة ربطة عنق الصندل الرومانية. بعد ذلك ، استخدم إبرة قياس 27 لحقن 0.5 مل من الهيبارين في الوريد القضيبي ، أو IVC. ثم قم بتثبيت وربط IVC باستخدام خياطة الحرير 4-0 الموضوعة مسبقا واربط الشريان الكبدي باستخدام خياطة الحرير الموضوعة مسبقا 7-0.

الآن ، استخدم مشبك جراحي مجهري لإغلاق الوريد البابي. قم بتقنيد الوريد البابي باستخدام قسطرة وعائية قياس 22 واغسلها ب 60 مل من محلول ملحي بارد 0.9٪ يحتوي على 100 وحدة من الهيبارين حتى يبيض الكبد. بعد تنظيف الكبد ، قم بكشف IVC فوق الإيجاباتيك وقم بقصه في أعلى مستوى ممكن من الصدر.

قم بإجراء استئصال الكبد عن طريق قطع حول الحجاب الحاجز ثم قطع الشريان الكبدي ، و IVC ، والوريد البابي ، وأي أربطة إضافية. ارفع الكبد وضع محلول ملحي مثلج بنسبة 0.9٪. أخيرا ، ضع الكفة الوعائية قياس 16 في الوريد البابي وقم بتوصيل الكبد بدائرة نضح الكبد الطبيعية للحرارة خارج الجسم الحي.

قبل البدء في كل تروية ، يجب إجراء فحص بصري للدائرة لتحديد وتلف أو تراكم مكونات الدائرة أو الأنابيب. إذا كان هناك تراكم للبكتيريا أو المواد الأخرى على الدائرة ، فيجب استبدال الأجزاء أو تنظيفها. ابدأ بتدفق الإنشاب بمعدل ملليلتر في الدقيقة.

راقب الشاشة بحثا عن أي طفرات في ضغط الوريد البابي ، حيث قد يشير ذلك إلى أن الوعاء أصبح مسدودا ويستلزم إعادة وضع القنية. أدخل قنية الوريد البروتي في الوريد البابي المسند من أجل عودة تدفق الإنشاءات والخياطة باستخدام خياطة حريرية 7-0. بمجرد وضع كلا القنيات في مكانها ، ابدأ في زيادة تدفق التعريج بمقدار مليلتر واحد في الدقيقة حتى يتم الوصول إلى الضغط الفسيولوجي في حدود 10 إلى 16 سم من الماء.

قم بإزالة عينة واحدة من المليلتر من المنفذ المسبق والمنفذ اللاحق أثناء التروية. قسم كل عينة مليلتر إلى عينتين سعة 0.5 ملليلتر. قم بتجميد أحد الحصص التي يبلغ حجمها 0.5 ملليلتر في الأنابيب المبردة في النيتروجين السائل وقم بإجراء تحليل غازات الدم الشرياني باستخدام 0.5 مل من النحيجة.

بعد ذلك ، قم بقياس الرقم الهيدروجيني وقم بتخزين مادة التعرد حسب الحاجة للعودة إلى الرقم الهيدروجيني 7.4. بعد أربع ساعات من التروية ، افصل الكبد عن دائرة التروية. قسم الكبد إلى شرائح 0.5 جرام ، وانقله إلى أنابيب مبردة ، وقم بالتجميد في النيتروجين السائل.

تم قياس ALT عند صفر و 30 و 60 و 90 و 120 و 150 و 180 و 210 و 240 دقيقة من التروية. يوجد ALT أقل بكثير في مجموعة التعريج الأساسي بالإضافة إلى مجموعة PEG-CAT مقارنة بالتعطير الأساسي ، والذي يظهر باللون الأسود في 150 و 180 و 210 و 240 دقيقة. تم الحفاظ على ATP للأنسجة في مجموعة الإنشاءات الأساسية بالإضافة إلى مجموعة PEG-CAT مقارنة بمجموعة الريشات الأساسية وحدها.

كان إنتاج MDA للأنسجة أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة الإنفوز الأساسي منه في مجموعة الإنفوز الأساسي بالإضافة إلى مجموعة PEG-CAT. تم الحفاظ على إجمالي GSH في الانتيوم الأساسي بالإضافة إلى PEG-CAT مقارنة بمجموعة الريفيوس الأساسي وحده. سيحتاج كل تطبيق مقترح لتروية الكبد النموذجية للحرارة خارج الجسم الحي إلى اختبار منهجي في النماذج الحيوانية قبل الاختبار في الأعضاء البشرية المهملة ثم في الكبد البشري.

النموذج المقدم هنا مثالي لأنه قابل للتكرار بسهولة ، ويزيل الاختبارات الدخيلة ، ومنخفض التكلفة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنفيذ نموذج نضح الكبد غير المكلف وسهل التكرار والحرارة العادية باستخدام الفئران.