تقطير داخل الجسم للخلايا الجذعية في فئران حديثي الولادة

موصوفة هو بروتوكول لإجراء زرع داخل الجسم من الخلايا الوماضة (MSCs) من خلال الحقن داخل المنطقة في الفئران حديثي الولادة مصطلح. هذه التقنية هي خيار قابل للتطبيق سريرياً لإيصال الخلايا الجذعية والأدوية إلى الرئتين الفئران حديثي الولادة لتقييم فعاليتها.

تقطير داخل المناطق المدارية هو التكنولوجيا الحيوية السريرية لتوصيل الخلايا الجذعية والأدوية في رئة حديثي الولادة لتقييم فعالية Chilman. قد تكون هذه التقنية حسنة النية للاستخدام مع مجموعة متنوعة من التطبيقات الأولية في الفئران حديثي الولادة وهي مقياس نسبي سهل وفعال من حيث التكلفة لعلاج الأمراض الرئوية. في اليوم الخامس بعد الولادة، كبح جماح الجراء الجرذ Sprague-Dawley المخدرة، على موقف الاحتضان 60 درجة زاوية.

ووضع شريط وضع العلامات المختبرية على جميع الأطراف الأربعة لكل جرو لتأمينها في مكانها. تطبيق الشريط تحت كل أنف لإصلاح رؤساء. وتحديد الرقبة الأولى لثقب القصبة الهوائية.

استخدام 75٪ من الكحول الإعدادية وسادة لتطهير منطقة شق. وجعل شق عمودي 3 سم خط الوسط فوق القصبة الهوائية لتجنب إتلاف الشرايين السباتي. استخدام ملقط مدبب منحنية دون ربط للتخلص من الدهون والعضلات طبقات لتحديد موقع القصبة الهوائية.

عندما يمكن ملاحظة القصبة الهوائية، استخدم الملاقط لفهم القصبة الهوائية واستخدام حقنة 100 ميكرولتر مجهزة بإبرة قياس 30 لحقن واحد من عشرة أضعاف من الخامس اليراعة اليراعة لوسيفراز GFP المسمى الخلايا الضموية السينية في 30 ميكرولترات من المالحة في القصبة الهوائية، خلال المرحلة الملهمة. عندما تم حقن جميع الخلايا، أغلق الشق مع 160 غرزة الحرير ربط العقدة بإحكام قدر الإمكان. وقطع نهايات خياطة قصيرة قدر الإمكان.

ثم تسمح الجرو للتعافي من التخدير، في بقعة دافئة مع رصد حتى يكون دافئا، وردي، وقادرة على الحركة العفوية قبل إعادة الحيوان إلى قفصه. لتتبع الخلايا السترومية البشرية المزروعة mesenchymal 15 دقيقة بعد الفئران قد تعافى من الجراحة، حقن intraperitoneally الجراء إعادة تخدير مع 125 ملليغرام لكل كيلوغرام من ملح البوتاسيوم لوسيفريان في برنامج تلفزيوني. بعد 10 دقائق من الحقن، استخدم نظام تصوير حيواني صغير للحصول على صور متسلسلة في فترات 5-15 ثانية مع قنينة متوسطة، وقفة 1 f، وحقل رؤية 26 سنتيمتر.

ثم استخدم برنامج التصوير لقياس نشاط الإنارة من الرئتين استنادًا إلى المناطق التلقائية ذات الاهتمام. لوحظ مستوى عال من تعبير GFP في لوسيفيراز اليراعات المسمى الخلايا الجذعية mesenchymal الإنسان. يمكن أن تتميز الخلايا الجذعية الميزينشية كذلك من خلال تعبير علامة سطح الخلية وقدرتها على التفريق إلى الخلايا العظمية، وchondrocytes، والخلايا الشحمية.

يكشف تصوير اللمعان للخلايا النيسية البشرية المزروعة في VIVO عن غياب إشارات الإنارة في مناطق الرئة للفئران المعالجة بالملوحة المالحة العادية. في الفئران المعالجة بالخلايا الجذعية السينيشية ، لوحظ الإنارة داخل القصبة الهوائية ومناطق الرئة المركزية لتلك الحيوانات. في الواقع ، في هذا التحليل التمثيلي ، كشف القياس الكمي لكثافة الإنارة أن الفئران المعالجة بالخلايا الجذعية التحسسية أظهرت زيادة 13 ضعفًا تقريبًا في نشاط الإنارة مقارنة بالجرذان المعالجة بالملوحة المالحة العادية.

عند محاولة هذا الإجراء، من المهم تشريح وعزل القصبة الهوائية دون الحد من الشرايين المحيطة بها. هذه التقنية تسمح بدراسة آثار الإدارة داخل الخلايا والعقاقير من أمراض المواليد بالمير باستخدام الأشعة مع طريقة المريض البشري.