نموذج الماوس استئصال العظام لسرطان البنكرياس

في السياق السريري، سيخضع المرضى الذين يعانون من سرطان البنكرياس الموضعي لاستئصال البنكرياس يليه العلاج المساعد. يهدف هذا البروتوكول المبلغ عنه هنا إلى إنشاء طريقة آمنة وفعالة لنمذجة هذا السيناريو السريري في الفئران العارية ، من خلال زرع العظام لسرطان البنكرياس يليه استئصال البنكرياس واستئصال الطحال.

يصف هذا البروتوكول نموذجا جراحيا قويا وقابلا للتكرار لسرطان البنكرياس في الفئران ، والذي يمكن استخدامه لاختبار العلاج المساعد والمساعد الجديد. تجمع هذه التقنية بين نموذج تقويم العظام المشترك للعدوى ، وهو فعال في تلخيص سرطان البنكرياس البشري مع تقنية استئصال البنكرياس الآمنة والفعالة. بينما يتم وصف نموذج نقص المناعة في هذا البروتوكول ، يمكن إجراء نموذج بديل للكفاءة المناعية ، باستخدام الخلايا السرطانية KPC المزروعة في C57 ستة فئران سوداء.

سيكون هذا البديل مفيدا لاختبار العلاجات المناعية. للبدء ، ضع الفأر المخدر على حقل معقم في وضع ضعيف وقم بتطبيق اليود بوفيدون ، متبوعا بنسبة 70٪ من الإيثانول لتحضير الجلد. قم بتشريح الجلد عن طريق عمل شق طولي في الربع الجمجمي الأيسر من البطن وشق الطبقات العضلية بين الملقط.

بعد تركيب المحقنة مع تعليق الخلية على جهاز الحقن ، ضع مسحة سلسلة المحفظة فوق شق شق شق البطن وقم بإخراج الطحال وذيل البنكرياس من خلال فتحة المسحة. شد خيوط المحفظة برفق وكشف ذيل البنكرياس للحقن ، مع التأكد من أن الشاش يلامس البنكرياس محيطا ، لكنه لا يضيقه. أمسك ذيل البنكرياس باستخدام ملقط وضع التوتر الجانبي عليه برفق.

ثقب البنكرياس بالإبرة ، وقم بشطفه وتقدمه بينما يتم رفع طرف الإبرة لأعلى قليلا حتى يدخل شطبة تماما إلى الصفاق حقن حمة البنكرياس مع تعليق الخلية بطريقة بطيئة وخاضعة للرقابة. بعد الحقن ، أمسك الإبرة في مكانها لبضع ثوان قبل الانسحاب لتقليل التسرب.

استخدم مسحة مبللة باليود بوفيدون لمسح الموقع بعناية لامتصاص أي تعليق خلوي متسرب عن غير قصد. استبدل الطحال والبنكرياس إلى وضعه التقويمي وأغلق جدار البطن بخياطة حمض البولي جليكوليك 5-0. أغلق الجلد بمشابك.

قم بعمل شق طولي في جلد الربع الجمجمي الأيسر من البطن. ويفضل من خلال موقع الشق السابق. قم بتشريح الجلد بصراحة من جدار البطن العضلي الأساسي وضع ضام احتفاظ بالنفس بالكامل لإبقاء الجرح مفتوحا.

شق الطبقة العضلية بين الملقط ، فقط على جانب واحد من خط الخياطة في العملية السابقة. ثم قم بتمديد الشق لاستئصال خط الخياطة السابق بالكامل. قم بإخراج الطحال والبنكرياس عن طريق سحبه في الجمجمة.

في هذه الحالة ، تم العثور على بعض الالتصاقات مرتبطة بالجانب السفلي من الورم. تم تقسيم هذا عن طريق الكي. يمكن العثور على القولون مرتبطا بالجانب الذيلي للبنكرياس عن طريق التصاقات غشائية.

إذا تم العثور على هذا ، فقم بتشريح القولون بصراحة. قم بتعريض جزء البنكرياس للربط عن طريق تمرير زوج من الملقط الظهري بعناية إلى الأوعية الطحالية في جسم البنكرياس. اربط البنكرياس القريب من الورم بمشبك التيتانيوم ثم قم بتحويل البنكرياس البعيد إلى هذا باستخدام الكي.

بدلا من ذلك ، قم بربط البنكرياس بشكل مستمر مع خياطة حمض البولي جليكوليك 5-0 قبل القطع ، من أجل التحكم في جذع البنكرياس. سحب البنكرياس بعناية ذيلية وكي الأوعية المعدية الطحالية بين القطب القحفي للطحال والمعدة. مع الأخذ في الاعتبار أن الأوعية صغيرة وقد تنزف بسهولة إذا تم اقتلافها أو عدم الكي بشكل كاف.

قد تتراجع هذه الأوعية إلى تجويف البطن وتسبب نزيفا قد يصعب السيطرة عليه. قم بإزالة العينة وافحص موقع الجراحة للتأكد من الإرقاء. أغلق جدار البطن بخياطة حمض البولي جليكوليك 5-0 بطريقة مستمرة وأغلق الجلد بمشابك.

من بين 59 فأرا متتالية خضعت لجراحة زرع ، حدث تسرب جسيم في ثمانية فئران. بعد ثلاثة أسابيع من نمو الورم ، سمح التصوير الحيوي قبل الاستئصال باستبعاد الفئران المصابة بمرض نقيلي جسيم من الاستئصال الجراحي. ترك هذا 45 فأرا شرعت في استئصال البنكريات.

تم تنفيذ الإجراء بنجاح في 100٪ من الفئران. تم تحقيق هامش البنكرياس القريب عياني ، أكبر من خمسة ملليمترات في 43 من هذه الفئران. في وقت الاستئصال ، تم العثور على ورم خبيث موضعي في تسعة من أصل 45 فأرا.

بالإضافة إلى ورم خبيث في خط الخياطة ، لوحظت عقيدات نقيلية معزولة على المنحنى الأكبر للمعدة في ثلاثة فئران وعقدة تحت المحفظة على الكبد في فأر واحد. حدث غزو محلي للبنكرياس الإضافي في ستة فئران مع غزو مباشر لخط الخياطة في خمسة فئران وفي الكبد في فأر واحد. بعد أسبوع واحد من الاستئصال ، كان لدى 32 فأرا نسبة إشراق قصوى أقل من 10 ، مما يشير إلى الحد الأدنى من المرض المتبقي أو عدم وجوده.

متوسط وقت الجراحة من تحريض التخدير إلى الإغلاق 22 دقيقة. تتمثل الخطوة الرئيسية في إجراء الاستئصال في التعرف على المستوى الجنيني غير الدموي الظهري للأوعية الطحالية والبنكرياس. يؤدي تشريح هذا المستوى إلى تحرير جزء من البنكرياس للربط اللاحق.

بعد الاستئصال ، يمكن علاج الفئران بالعلاجات المساعدة. يمكن بعد ذلك تقييم تطور المرض ، باستخدام التصوير الحيوي بالاقتران مع نتائج التشريح وبقاء ، اعتمادا على بروتوكولات أخلاقيات المحلية.