نماذج الحيوانات خارج الجسم الحي وفي الجسم الحي للإصابات الميكانيكية والكيميائية لظهارة القرنية

تم إنشاء نماذج حيوانية خارج الجسم الحي وفي الجسم الحي لدراسة إصابات القرنية الميكانيكية والكيميائية. توفر هذه التقنية منصة سهلة البناء للباحثين لدراسة الإصابة الميكانيكية والكيميائية للقرنية. لإنشاء جرح ظهاري لقرنية الفئران ، قم بتمييز القرنية المركزية للفأر المخدر باستخدام لكمة خزعة الجلد لتأكيد منطقة محددة جيدا وقابلة للقياس جيدا من الجرح.

ضع مسافة بادئة للثقب برفق فوق القرنية المركزية لترك علامة دائرية قم بتنضير ظهارة القرنية وصولا إلى طبقة بومان باستخدام مزيل حلقة صدأ القرنية المحمول باليد مع نتوء 0.5 ملم لضمان عدم إتلاف طبقة بومان. قم بإزالة الأنسجة السائبة المتبقية في هامش الجرح باستخدام ملقط القرنية. تأكد من منطقة التنضير بتلطيخ الفلورسنت عن طريق وضع قطرة من المحلول الملحي العادي على ورقة فلوريسئين لإذابة الفلوريسئين ثم وضع القطرة المحتوية على الفلوريسئين على العيب الظهاري للفأر لتصورها تحت الضوء الأزرق الكوبالت.

تابع الزراعة خارج الجسم الحي لنموذج جرح تآكل القرنية بالفئران عن طريق الضغط برفق على الحافات المدارية العلوية والسفلية للفئران التي تم قتلها رحيما لدفع مقلة العين للخارج. أدخل طرف مقص القرنية المغلق في الفضاء الخلفي على طول الجدار المداري السفلي لضمان عدم اختراق مقلة العين. ثبت مقلة العين باستخدام ملقط القرنية 0.3 ملم ثم اقطع العصب البصري والأنسجة الرخوة حول الحجاج بمقص القرنية لعزل مقلة العين.

لزراعة مقل عيون الفئران خارج الجسم الحي ، قم بإعداد طبق من 48 بئرا بالشمع المذاب داخل البئر وانتظر التصلب ، ثم باستخدام طرف ملقط الملتحمة ، قم بإنشاء ثقب دائري على سطح الشمع المتصلب لاستيعاب مقل العيون. ضع مقل العيون المحصودة مباشرة على اللوحة المكونة من 48 بئرا مع قيعان وجدران جانبية مغطاة بالشمع لتحقيق الاستقرار. استزرع مقل العيون مع DMEM التي تحتوي على 1٪ مصل بقري جنيني مع أو بدون مضادات حيوية اعتمادا على الغرض من الدراسة.

اغمر سطح العين بوسط الثقافة دون التسبب في طفو مقلة العين وتوثيق مسار التئام الجروح عن طريق تلطيخ الفلوريسئين وجمع الصور بكاميرا رقمية تحت الضوء الأزرق الكوبالت. للحث على إصابة حروق قلوية ، ضع ورقة ترشيح دائرية بقطر 8 ملم في طبق بتري. باستخدام قطارة ، أضف 0.5 هيدروكسيد الصوديوم العادي إلى طبق بتري لامتصاص أوراق الترشيح واستنزاف المحلول الزائد من ورق الترشيح قبل وضعها على قرنية الأرانب المخدرة.

بعد فتح الجفون بمنظار غطاء ، تأكد من أن غشاء نيكتيتينج الأرنب لا يتداخل مع إدخال ورق الترشيح وضع ورق الترشيح المنقوع بالقلويات على القرنية المركزية لمدة 30 ثانية. قم بإزالة ورق الترشيح وشطف سطح العين ب 10 ملليلتر من المياه المالحة العادية لغسل المواد القلوية. لإكمال عيب القرنية ، قم بإزالة ظهارة القرنية داخل المنطقة المعتمة وصولا إلى غشاء بومان باستخدام مزيل حلقة صدأ القرنية.

تأكد من منطقة التنضير مع تلطيخ الفلوريسئين تحت الضوء الأزرق الكوبالت وإزالة ظهارة القرنية المتبقية باستخدام ملقط القرنية. لتأمين حالة الجرح مع tarsorrhaphy ، تأكد من أن الغشاء nictitating يغطي بسلاسة سطح العين وعيب القرنية الظهارية في الجانب الأنفي. قم بإجراء تمرين طرسي مؤقت مع أو بدون عوامل موضعية باستخدام خياطة 6-0 لحماية سطح العين ومنع الأرنب من خدشه ، تأكد من أن خياطة الترنص على بعد 3 إلى 4 ملليمترات من هوامش الجفن العلوي والسفلي مع أربعة إلى خمسة روابط وعقد أطول لمنع الأرنب من كسر الغرز.

في نموذج التئام الجروح خارج الجسم الحي لظهارة القرنية للفأر ، لوحظت منطقة القرنية المركزية المكتئبة بشكل معتدل مع صبغة فلوريسئين إيجابية في المليمترين المركزيين بعد التنضير في الجسم الحي لظهارة قرنية الفأر. تم فحص وتوثيق الثقافة خارج الجسم الحي لمقل عيون الفئران المثبتة على صفيحة استزراع 48 بئرا مغطاة بالشمع يوميا داخل صفيحة استزراع 48 بئرا تحت مجهر ستيريو. بعد يوم واحد من إزالة ظهارة القرنية الفئرانية ، تم الكشف عن عيب ظهاري دائري ملطخ بالفلوريسئين يبلغ قطره 2 ملم في الصور الرقمية التي تم الحصول عليها تحت الضوء الأزرق الكوبالت.

بعد إحداث إصابة قلوية لظهارة القرنية الأرنب ، لوحظ تلطيخ إيجابي للفلوريسئين مع أو بدون ضوء أزرق كوبالت فوق القرنية المركزية بهامش دائري واضح وكامل. لوحظ إعادة الظهارة للجرح الظهاري القرنية مع نمو pannus من الطرف. أهم الخطوات هي إجراءات لإنشاء عيوب ناعمة وحتى ظهارية على أسطح قرنية الفئران والأرانب.

يمكن اختبار العلاجات الطبية والجراحية الجديدة على هذه المنصات. يمكن مراقبة تأثير إعادة الظهارة بعد الإجراءات. سيكون الأوعية الدموية الجديدة للقرنية والعتامة بعد الإصابة في هذا البروتوكول حاجة غير ملباة لمزيد من البحث.