في الجسم الحي قراءات إصابة الأوعية الدموية في شبكية الفأر لتعزيز التكاثر

هنا ، نقدم ثلاثة بروتوكولات لتحليل البيانات لتصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) والتصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) في دراسة انسداد الوريد الشبكي (RVO).

يسمح هذا البروتوكول للمستخدم بالقياس الكمي للعلامات المماثلة سريريا للتلف في تصوير شبكية العين في الفئران ، مما يعزز قابلية ترجمة النتائج اللاحقة. تسمح لنا هذه الطرق بتبسيط التحليل ومنحنا القدرة على مقارنة التصوير بشكل موثوق بين التجارب. بينما تم تطوير هذه الطرق لدراسة نظرة عامة على نموذج الفأر ، إلا أنها يمكن أن تمتد بسهولة إلى البحث عن أي أمراض شبكية تستخدم نفس تقنيات التصوير.

قم بتشغيل صندوق ضوء مجهر تصوير الشبكية ، وجهاز التصوير المقطعي للتماسك البصري ، ومنصة الماوس الساخنة. قم بتشغيل الكمبيوتر وافتح برنامج التصوير. أضف قطرة واحدة من فينيليفرين وتروبيكاميد إلى كل عين.

حقن 100 ميكرولتر من 1٪ فلوريسئين داخل الصفاق. استيعاب الماوس على المنصة. اضبط ارتفاع وزاوية المنصة حتى يصبح عرض قاع الشبكية واضحا ومركزا.

التقط صورة لقاع العين. افتح برنامج التصوير والتصوير المقطعي للتماسك البصري. في برنامج التصوير المقطعي للتماسك البصري ، اضبط الدفع إلى 10.

خذ صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري ، أضف 75 ميكرومتر بعيدا عن الحرق. كرر ذلك مع الأرباع الثلاثة الأخرى من شبكية العين. قم بتبديل الكاميرا إلى مرشح 488 نانومتر.

زيادة كسب الكاميرا إلى 5. التقط صورة لقاع العين بعد 5 دقائق بالضبط من حقن الفلوريسين. افتح صورة الفلوريسئين على برنامج معالجة الصور.

تكرار الصورة. باستخدام أداة الاختيار ، تتبع بعناية الأوعية الرئيسية. تجاهل أي سفن متفرعة من هذه السفن.

في الصورة الأولى ، احذف التحديد ، ولم يتبق سوى السفينة. احفظ هذه الصورة المقنعة. انقل التحديد إلى الصورة الثانية ، واعكس التحديد وحذفه ، وعزل الخلفية.

احفظ هذه الصورة المقنعة. افتح صورة الخلفية وقم بقياس الكثافة المدمجة. افتح صورة الأوعية ، وحدد الخطوط العريضة للأوعية ، ثم قم بقياس متوسط الشدة.

قسم الكثافة المتكاملة للخلفية على متوسط شدة الأوعية ، مما يولد نسبة التسرب للعين. سجل نسبة التسرب هذه لكل عين في مجموعة تجريبية. لمزيد من التحكم في الخلفية ، قم بتطبيع العيون التجريبية إلى متوسط نسبة التسرب لعيون التحكم غير المصابة.

افتح صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري في برنامج معالجة الصور. تتبع حدود طبقة الخلية العقدية ، وطبقة الضفيرة الداخلية ، والطبقة النووية الداخلية ، وطبقة الضفيرة الخارجية ، وطبقة مستقبلات الضوء ، وطبقة RPE. تصدير الملفات بتنسيق CSV.

قم بقياس متوسط سمك كل طبقة وكرر لكل عين في المجموعة التجريبية. افتح صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري في الصورة J.باستخدام أداة الخط ، قم بقياس المسافة التي يكون فيها الحد العلوي لطبقة الضفيرة الخارجية غير واضح. قياس أفقيا ، والحفاظ على خط العرض حيث يبدأ عدم التنظيم.

احسب مجموع المسافات غير المنظمة في الصورة. قسم طول عدم التنظيم على الطول الكلي للشبكية للحصول على نسبة عدم التنظيم. كرر القياس والحساب لصور التصوير المقطعي للتماسك البصري من الأرباع الثلاثة الأخرى من شبكية العين.

خذ متوسط نسب عدم التنظيم من صور التصوير المقطعي التماسك البصري الأربعة. يمثل هذا الرقم متوسط عدم التنظيم لشبكية العين بأكملها. كرر لكل عين في المجموعة التجريبية.

يمكن مقارنة الصور المقنعة المستخدمة لحساب نسبة التسرب لكل صورة شبكية مع غيرها وتحليلها ، وفصل الأوعية الدموية الرئيسية عن مناطق أخرى من شبكية العين. يسمح القياس الكمي للفلوريسئين بمقارنة شدة الإصابة وفعالية العلاج بالإضافة إلى دراسة التغيرات في التسرب على مدار فترة الإصابة. لوحظ ترسيم طبقات شبكية العين في صورة OCT.

يظهر القياس الكمي للسمك لكل طبقة شبكية أن الاستجابة الوذمية الأولية لها تأثير أكثر عمقا على طبقات الشبكية الداخلية. من تحليل المسار الزمني لتلف انسداد الوريد الشبكي ، يمكن ملاحظة التورم الالتهابي الأولي لطبقات الشبكية ، والترقق التنكسي في نهاية المطاف. تتعرض الطبقة النووية الداخلية لاستجابة أكبر بكثير للإصابة الأولية ، لكن الطبقة الضفيرية الداخلية تظهر ترققا أكثر شدة بعد استقرار الوذمة الأولية والعودة إلى خط الأساس.

يتجلى عدم تنظيم طبقة الشبكية الداخلية على أنه اختفاء للحدود العليا لطبقة الضفيرة الخارجية ، حيث يمزج بين الضفيرة الخارجية والطبقات النووية الداخلية معا. تمت مقارنة اضطراب الشبكية لمجموعتين تجريبيتين للتحقيق في فعالية المانع في التخفيف من تلف الشبكية. جودة الصورة مهمة للغاية لجودة التحليل.

عند الحصول على صور شبكية العين ، خذ الوقت الكافي للتأكد من أن طبقات قاع العين والشبكية واضحة ومركزة قدر الإمكان. يمكن استخدام هذه الطرق غير الغازية طوليا وبالاقتران مع الدراسة البيوكيميائية والمناعية للأنسجة لإنشاء ملامح متعددة الأوجه ومفصلة للمرض. تتيح هذه التقنية القياس الكمي الموثوق به لبيانات تصوير الشبكية في الجسم الحي في نماذج أمراض الأوعية الدموية العصبية بحيث يمكن ترجمة البيانات بسهولة أكبر إلى مرض بشري.