نموذج الطعم العضوي العضوي المشتق من مريض سرطان الخلايا الكبدية للتحقيق في تأثير تجديد الكبد على نمو الورم

يعد تكرار الورم مشكلة بارزة جدا في استئصال التسليم. في هذه الدراسة ، نحاول فهم المزيد عن نمو الورم في بيئة متجددة. لقد ثبت أن عضيات الورم تلخص ورم المريض من الناحية النسيجية والوراثية ، على الرغم من أن النماذج في الجسم الحي نادرة وتفتقر إلى الاستقرار.

لقد نجحنا في تطعيم العضوية المشتقة من المريض في كبد الفأر. لقد أظهرنا هذا لحالتين مثالين. تظهر البقع الكيميائية المناعية النسيجية أن العضيات والطعم الغريب يشبهان ورم المريض الأصلي.

يشبه تطور العضيات من الورم الأصلي نموذجا أكثر دقة لورم المريض مقارنة بالاحتمالات الأخرى مثل مزارع الخلايا ثنائية الأبعاد. سيساعد تضمين هذا النموذج في البيئة المعقدة لتجديد الكبد على فهم المزيد عن التفاعلات الحالية بين الخلايا السرطانية والبيئة التجديدية. نأمل أن نكتسب المعرفة في مجالنا فيما يتعلق بفهم تكرار سرطان الكبد في استئصال الكبد.

لذلك ، مع هذا النموذج ، نريد إنشاء الأساس لمشاريع البحث المستقبلية. للبدء ، استخدم مشرطا وملقطا لتقطيع أنسجة سرطان الكبد المحصودة إلى أجزاء صغيرة من واحد إلى ملليمترين مربعين. انقل قطع الأنسجة إلى أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على خمسة ملليلتر من المخزن المؤقت للتفكك.

ضع الأنبوب على جهاز دوران عند 37 درجة مئوية. بعد الحضانة ، مرر خليط الخلية فوق مصفاة خلية 100 ميكرومتر موضوعة فوق أنبوب سعة 50 ملليلترا. استخدم مكبسا من حقنة سعة خمسة ملليلتر لتحطيم شظايا الأنسجة من خلال الفلتر.

أضف الآن خمسة ملليلتر من DMEM المتقدم المكمل فوق الفلتر لغسله. انقل المرشح إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مل. بعد شفط المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في خمسة ملليلتر من المخزن المؤقت لتحلل خلايا الدم الحمراء.

الطرد المركزي التعليق مرة أخرى لمدة خمس دقائق عند 300 جرام. ثم أعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من PBS قبل العد. قبل طلاء الخلية ، قم بإزالة المادة الطافية من تعليق خلية الطرد المركزي.

أعلق بحوالي ملليلتر واحد من مصفوفة الغشاء القاعدي على الأنبوب وضعها على الجليد. ماصة 20 ميكرولترا من تعليق الخلية في آبار صفيحة من ستة آبار مسبقة التدفئة لإنشاء قطرات. بعد الانتظار لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق ، ضع اللوحة في وضع مقلوب في خزانة تدفق لمدة خمس دقائق.

ثم انقل اللوحة إلى حاضنة لتتجمد. أخيرا ، أضف ملليلترين من وسط الثقافة العضوية في كل بئر. قدم الخط العضوي المشتق من المريض سمات مورفولوجية لورم المريض الأصلي.

للبدء ، ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف مع تثبيت الأطراف لأسفل. استخدم الملقط والمقص الجراحي المجهري لعمل شق في موقع الجراحة المستنفد على طول ألبا الخطي من أسفل البطن إلى الغضروف الخنجري. أدخل الضاعرات في الشق ، واضبط اتجاه الجر للحصول على التعرض الأمثل للجزء العلوي من البطن.

ضع منديلا نظيفا مبللا بالمحلول الملحي بجوار موقع الشق مباشرة. الآن ، قم بإخراج الأمعاء الدقيقة والأعصور على منديل مبلل. كشف الفص العلوي الأيمن حتى يصبح الحقن ممكنا.

اسحب الخليط العضوي في حقنة هاميلتون التي تحمل علامة شطف. قم بحقن التعليق بثبات في الماوس حتى العلامة دون تحريك الإبرة. ضع الضغط بقطعة قطن على موقع الحقن.

ثم افحص البطن بحثا عن أي تمزق في الفص أو ارتداد. شطف البطن مع 0.5 مل من محلول ملحي معقم. ضع خياطة جارية بخيطة قابلة للامتصاص لإغلاق البطن.

يشبه الورم الذي تم تطويره في الفأر كلا من العضيات المشتقة من المريض وكذلك الورم الأصلي للمريض. لبدء استئصال الكبد البسيط ، قم بإجراء شق البطن على فأر مخدر في وضع ضعيف. باستخدام مسحات قطنية مبللة ، ادفع الفص الإنسي إلى الأمام لخلق مساحة أكبر في المجال الجراحي.

اقلب فص الكبد الجانبي الأيسر في الجمجمة لكشف الفص المذنبي والرباط. قطع الرباط تماما. ثم أدخل رباط أسفل فص الكبد الجانبي.

الآن اقلب فص الكبد الجانبي الأيسر ذيليا وقم بتوجيه الطرف الحر الأيسر من الرباط حول الطرف الأيسر من فص الكبد الجانبي الأيسر. قم بتوجيه الطرف الحر الأيمن حول الطرف الآخر. استخدم قطعة قطن لتطبيق الجر على الفص ، مع التأكد من وضع الرباط في المنتصف.

ثم اربط نصف عقدة مزدوجة. قم بتأمين هذه العقدة بعقدة نصف ثانية أخرى مربوطة في الاتجاه الآخر دون شدها بالكامل. عندما يتم وضع الرباط بشكل صحيح ، أمسك الطرف الحر من الجمجمة للرباط بملقط غير حاد واسحب الطرف الذيلي بزوج آخر من الملقط.

قم بتأمين العقدة بعقدة ثانية مربوطة في الاتجاه المعاكس. قطع بالقرب من الرباط دون قطعه لاستئصال الكبد. بعد الاستئصال الطفيف لفص الكبد الجانبي الأيسر ، قم بتمرير الرباط المنجلي.

اقلب الفص في الجمجمة ، ثم أدخل رباط تحته واقلبه بشكل ذيلي. الآن قم بتكرار ens الحرة للرباط حول الشفين. بمجرد وضع الرباط بشكل صحيح ، اربط نصف عقدة مزدوجة ببطء.

شد عقدة النصف الثاني بالكامل في الاتجاه المعاكس ، ثم أضف عقدة نصف ثالثة في الاتجاه المعاكس. استئصال الفص ، ثم اغسل البطن بمحلول ملحي معقم. ضع الأمعاء مرة أخرى في مكانها التشريحي.

لإغلاق البطن ، استخدم الملقط للإمساك بالجلد والصفاق. ضع غرزة بخيط قابل للامتصاص في الطرف العلوي من خط الشق. قم بإجراء غرزة ثانية على الجانب الآخر من الشق الخارج على جانب الجلد.

اربط العقدة بإحكام مع ترك الطرف الحر بدون إبرة قصيرة. اترك نهاية الإبرة من الغرز طويلة. قم بإنهاء خياطة الجري بعقدة في الطرف السفلي من الشق.

نظف البطن من أي دم متبقي. المساهمة النسبية لفصوص الكبد قابلة للمقارنة بين الفئران المختلفة من نفس السلالة. زاد متوسط وزن الفص السفلي الأيمن إلى 0.82٪ من إجمالي وزن الجسم بعد الاستئصال الطفيف.

أدى الاستئصال الرئيسي إلى زيادة بنسبة 0.99٪ من إجمالي وزن الجسم. أدى الاستئصال الرئيسي للفص العلوي الأيمن إلى زيادة واضحة في وزنه بالنسبة إلى الفص السفلي الأيمن.