胸腔内注射:化合物输送到成年斑马鱼心脏

1. 准备胸腔内注射的鱼

1. 用网捕捉成年斑马鱼 （Danio rerio） 并将其转移到麻醉溶液中。
2. 1-2 分钟后，当鱼停止游泳并且鳃盖运动减少时，用塑料勺触摸鱼，以确保它不会对任何接触做出反应。
3. 用勺子快速小心地将鱼转移到湿海绵的凹槽中，腹侧朝上。鱼的头部应远离作员的惯用手。

2. 心包显微注射

1. 在立体显微镜下，仔细观察鱼皮下跳动的心脏的运动。目视确定跳动心脏上方和腹侧软骨板定义的三角形中间的注射点（图 1D）。以相对于体轴 30-45° 角插入毛细管尖端（图 1E）。用微毛细管的尖端轻轻穿透皮肤进入心包（图 1C）。最佳切入点更靠近腹部而不是头部。
   注意:不要将毛细血管太深地插入身体和心脏，因为这会对器官造成伤害。在心脏穿刺的情况下，针头通常会充满血液。如果发生这种情况，请去除毛细管并将鱼排除在实验之外。
2. 一旦针头进入心包，踩下显微注射器装置的踏板即可完成注射。
   注意:小心不要将空气注入胸腔。
3. 注射后，轻轻地从胸部抽出毛细血管，并立即将鱼转移到装有系统水的水箱中进行回收。
4. 监测鱼直到从麻醉中完全恢复。
5. 在所需的时间点收集心脏并准备进一步分析。
   注意:如果鱼在 30 秒内没有恢复鳃盖的运动，请用塑料移液管将水挤入鳃中，使鱼恢复活力。

图 1:成年斑马鱼的胸腔内 （IT） 注射。（A） 带细丝（6 英寸，直径 1.0 毫米）的拉动显微注射毛细管的照片和所用拔针程序的值。（B） 拉动的显微注射毛细管的照片，其中细丝（6 英寸，直径 1.0 mm），填充了 2.5 μL 含有 10% 酚红的溶液。拉出的针尖最大长度为 7 毫米。（C） IT 注入程序的示意图。（D） IT 注射程序的照片。该图是从 Bise 等人修改而来的。图 C 和 D 中的数字对应于该程序的相同步骤:（1） 将鱼腹面朝上放在加湿的海绵上。穿刺部位（三角形中的红点）位于胸部中央靠近鳃的地方。（2） 针头刺入心包。红点表示穿刺部位。（3） 通过观察红色溶液在心包腔内的扩散来监测注射。（E） IT 注入方案。注射毛细血管与体轴之间的角度应在 30° 和 45° 之间，以避免心脏穿刺。（F） IT 注射指定体积后 1 小时鱼胸部的照片。白色箭头指向红色组织，这可能表示内出血