链脲佐菌素治疗:1 型糖尿病斑马鱼模型

1. 斑马鱼与糖尿病的一代，DM Fish

1. 准备恢复水箱和麻醉水箱。回收水是普通的鱼水。对于麻醉水，加入足够的 2-苯氧乙醇，以便在正常鱼水中达到 1:1,000 的稀释度。
通过将
2. 6 mg STZ 添加到 2 ml 0.09% 氯化钠中，制备 0.3% 链脲佐菌素 （STZ） 溶液（在通风橱中），并立即将溶液置于冰上。这将为 20 分钟内注射大约 20 条鱼提供足够的注射溶液。如果超过 20 分钟，请停止并制作新的 STZ 溶液，然后再继续。在单独的试管中分装足够的盐溶液用于对照鱼。一旦 STZ 溶解，所有后续步骤都不需要使用通风橱。
3. 用 STZ 或对照溶液填充配备 27 1/2 号针头的 1/2 cc 注射器，确保没有气泡被捕获。
4. 将鱼放入麻醉水中，单独麻醉每条鱼，并等待它们的游泳运动停止（1-2 分钟）。
5. 短暂麻醉后，将鱼放在纸巾上以吸收多余的水分，将鱼放入称重船并测量鱼的质量。
6. 将鱼放在坚固的表面（培养皿盖）上进行注射。
7. 通过将针头穿过斜面插入腹侧腹膜的后部，将 STZ 或对照溶液注射到鱼的腹膜腔中。
8. 应向每条鱼输送 0.35 mg/g （350 mg/kg） 的 STZ，所需 0.3% 溶液的体积可按以下方式计算。
   1. 将鱼的质量 （g） 乘以 0.35，得到所需的 STZ 量（以 mg 为单位）。
   2. 将上面生成的产物除以 3，得到注射所需的 0.3% 溶液的体积，单位为 μl.
      样品:对于 0.5 克鱼:a） 0.5 x 0.35 = 0.175 b） .0175/3= 0.058 ml = 58 μl.
      没有 STZ 的相同体积将被注入对照鱼。应生成一张表格，说明每个鱼块的注射量，以供快速参考。
9. 注射后，将鱼放入回收水箱中，并监测它们是否正常游泳。一旦达到这一点，鱼就会被转移到一个正常的活水箱中，该水箱保持在 22 °C - 24 °C 的降低温度范围内。这种降低的温度对于有效诱导高血糖（糖尿病，DM）至关重要。
10. 虽然在第一次注射后 24 小时内检测到高血糖，但为了诱导长时间的非常高血糖状态，斑马鱼需要频繁的注射诱导阶段，然后每周维持注射，如下所示。

第 1 周:3 次注射（第 1、3、5 天），第 2 周:1 次注射（第 12 天），第 3 周:1 次注射（第 19 天），第 4 周:（第 21 天）进行感兴趣的测定。

此时，斑马鱼被认为处于长期高血糖状态，并表现出视网膜病变、肾病和鳍再生受损等糖尿病并发症。这些被称为 DM 鱼。此外，如果需要，可以通过每周维持注射将鱼维持在高血糖状态。在此过程中，预计约有 5% 的死亡。